Orthotopique aortique transplantation: un modèle de rat pour étudier le développement de la vasculopathie chronique

L’objectif global de cette procédure est d’établir un modèle précis et une méthode facilement réalisable pour étudier le développement de la vasculopathie de transplantation. Ceci est accompli en utilisant la combinaison PVG à une combinaison de souches CI. La deuxième étape de la procédure consiste à prélever l’aorte du donneur.

La troisième étape de la procédure consiste à préparer le destinataire. La dernière étape de la procédure consiste à anastomoser l’aorte du donneur avec l’aorte du receveur. En fin de compte, des résultats peuvent être obtenus qui montrent la formation de neointima en utilisant l’histologie pathologique.

Bonjour, je suis Sonya Schwefel, professeure en immunologie de la transplantation au Thet Eye Lab du Centre universitaire de cardiologie de Hambourg, en Allemagne. Et je suis Manish Duboff. Également du TS Eye Lab.

Mon laboratoire s’intéresse à l’immunologie de la transplantation. Dans cette vidéo, nous allons vous présenter le modèle de transplantation aortique orthotopique, un modèle facile et valide pour étudier le développement de la vasculopathie de transplantation en Wes. Nous utilisons cette procédure dans notre laboratoire pour étudier le rejet chronique dans les questionnements cardiovasculaires.

Dans le modèle de greffe d’aorte orthotopique, l’aorte peut facilement être évaluée histologiquement. De plus, le PVG vers un modèle IC est particulièrement utile pour les études de vasculopathie de transplantation. Étant donné que le rejet vasculaire aigu n’est pas un facteur de confusion majeur et que le développement de la vasculopathie est similaire aux résultats cliniques.

Alors commençons. Le donneur utilisé dans cette transplantation aortique ORTHOTOPIQUE est un rat PVG pesant environ 250 à 300 grammes. Une fois l’animal anesthésié, rasez ses poils abdominaux et thoraciques.

Placez le rat sur son dos et placez un masque facial sur son nez et sa bouche. Pour maintenir l’anesthésie, désinfectez largement la région abdominale et thoracique à l’aide de Provo iode, suivi de 80 % d’éthanol. Ensuite, vérifiez les réflexes de l’animal en pinçant ses pattes arrière.

Pour confirmer qu’il est suffisamment anesthésié. Exsanglez le rat en ouvrant l’abdomen et en perçant un trou dans l’abdomen de l’aorte. Ouvrez soigneusement le thorax pour trouver l’aorte thoracique descendante.

Disséquez l’aorte thoracique des tissus environnants, tels que les nerfs adipeux et l’œsophage. Retirez un morceau de 1,5 centimètre de l’aorte à l’aide d’acuta sans endommager les tissus de l’aorte. Perfuser soigneusement le greffon aortique avec une solution saline froide et conserver le greffon à quatre degrés Celsius.

Le receveur de cette greffe orthotopique de l’aorte est un rat A CI pesant environ 250 à 300 grammes. Pour commencer cette procédure, rasez la région abdominale du rat anesthésié et appliquez une pommade pour les yeux pour éviter que les yeux ne se dessèchent pendant l’anesthésie. Placez le rat sur son dos et placez un masque facial sur son nez et sa bouche pour maintenir l’anesthésie.

Ensuite, désinfectez la région abdominale avec de l’iode provo, suivi de 80 % d’éthanol. Après avoir pincé les pattes arrière pour confirmer que le rat est suffisamment anesthésié, ouvrez l’abdomen en effectuant une incision abdominale médiane et en séparant la peau et le muscle. Deux étapes.

Une fois l’abdomen ouvert, placez les intestins dans le gant salinisé. Pliez le gant autour des intestins pour éviter la perte d’humidité. Retirez le tissu adipeux recouvrant l’aorte abdominale.

Disséquez l’aorte de la région infrarénale à la bifurcation, en faisant attention de ne pas endommager les branches des vaisseaux. Si nécessaire, ligaturez les branches de l’aorte après avoir disséqué l’aorte. Tout d’abord, utilisez une pince microchirurgicale sur la partie infrarénale de l’aorte pour arrêter le flux sanguin.

Ensuite, placez une deuxième pince près de la bifurcation de l’aorte. Maintenant que le flux sanguin a été arrêté, retirez un court segment de l’aorte. Prenez ensuite le greffon aortique du donneur qui a été conservé dans une solution saline à 0,9 % sur de la glace.

Raccourcissez-le à la longueur appropriée et positionnez-le dans l’espace de l’aorte. Connectez l’aorte du donneur à l’aorte du receveur en effectuant huit sutures prolènes zéro, en commençant par l’anastomose crânienne de bout en bout. Lorsque l’anastomose distale de bout en bout est terminée, ouvrez soigneusement la pince distale.

Ensuite, ouvrez soigneusement la pince crânienne. Il devrait y avoir un pouls visible à l’extrémité distale de l’aorte. Maintenant, ramenez les intestins dans l’abdomen et rincez l’abdomen avec une solution saline stérile préchauffée.

Fermez la couche musculaire de la paroi abdominale à l’aide de six sutures zéro proline. Ensuite, utilisez cinq sutures sans proline pour fermer la peau pendant que le rat est encore sous anesthésie. Injectez quatre à cinq milligrammes par kilogramme de carprofène par voie sous-cutanée.

Remettez l’animal dans sa cage. Ajoutez du méthimazole à l’eau potable pour les analgésiques pendant trois jours. Après la transplantation.

Les résultats histopathologiques après 120 jours seront démontrés sur notre microscope histologique. Les images montreront clairement le développement de la vasculopathie de greffe. Le rétrécissement luminal développé sera mis en évidence par une animation par ordinateur.

Nous venons de vous montrer comment effectuer une auto-greffe aortique topique chez le rat. Nous avons également démontré le développement réussi de la vasculopathie de transplantation après 120 jours en utilisant l’histopathologie. Cette méthode permet d’étudier les premiers effets des médicaments sur la vasculopathie chronique de l’allogreffe.