Orthotopique aortique transplantation: un modèle de rat pour étudier le développement de la vasculopathie chronique

L'objectif général de cette procédure est d'établir un modèle précis et une méthode facilement réalisable pour étudier le développement de la vasculopathie de transplantation. Cela est réalisé en utilisant la combinaison de souche PVG vers une souche CI. La deuxième étape de la procédure consiste à prélever l'aorte du donneur.

La troisième étape de la procédure consiste à préparer le receveur. La dernière étape de la procédure consiste à anastomoser l'aorte du donneur à l'aorte du receveur. En fin de compte, des résultats peuvent être obtenus montrant la formation de néointima à l'aide d'une histologie pathologique.

Bonjour, je suis Sonya Schwefel, professeure en immunologie des transplantations au laboratoire TS Eye du Centre cardiaque universitaire de Hambourg, en Allemagne. Et moi, c'est Manish Duboff, également du laboratoire TS Eye.

Notre laboratoire s'intéresse à l'immunologie de transplantation. Dans cette vidéo, nous vous présenterons le modèle de transplantation aortique orthotopique, un modèle simple et pertinent pour étudier le développement de la vasculopathie de transplantation chez le rat. Nous utilisons cette procédure dans notre laboratoire afin d'explorer le rejet chronique dans le cadre de pathologies cardiovasculaires.

Dans le modèle de greffe aortique orthotopique, l'aorte peut facilement être évaluée histologiquement. En outre, le modèle de PVG vers un CI est particulièrement utile pour les études de vasculopathie de greffe. En effet, le rejet vasculaire aigu n'est pas un facteur de confusion majeur et le développement de la vasculopathie est similaire aux observations cliniques.

Commençons. Le donneur utilisé pour la transplantation aortique orthotopique est un rat PVG pesant environ 250 à 300 grammes. Après anesthésie de l'animal, rasez les poils abdominaux et thoraciques.

Placez le rat sur le dos et positionnez un masque facial sur son nez et sa bouche. Pour maintenir l'anesthésie, désinfectez largement la région abdominale et thoracique à l'aide de bétadine, puis d'éthanol à 80 %. Ensuite, vérifiez les réflexes de l'animal en pinçant ses pattes arrière.

Pour confirmer qu'il est suffisamment anesthésié. Exsanguer le rat en ouvrant l'abdomen et en pratiquant une ouverture dans l'aorte abdominale. Ouvrir soigneusement le thorax afin de localiser l'aorte thoracique descendante.

Disséquez l'aorte thoracique des tissus environnants, tels que les graisses, les nerfs et l'œsophage. Prélevez un fragment de 1,5 centimètre d'aorte à l'aide d'acuta sans endommager le tissu aortique. Perfusez complètement la greffe aortique avec du sérum physiologique froid et conservez la greffe à quatre degrés Celsius.

Le receveur pour cette transplantation aortique orthotopique est un rat A CI pesant environ 250 à 300 grammes. Pour commencer cette procédure, rasez la région abdominale du rat anesthésié et appliquez une pommade ophtalmique afin d'empêcher le dessèchement des yeux pendant l'anesthésie. Placez le rat sur le dos et positionnez un masque facial sur son nez et sa bouche pour maintenir l'anesthésie.

Ensuite, désinfectez la zone abdominale à l’aide de povidone-iodée, suivie d’éthanol à 80 %. Après avoir pincé les pattes arrière afin de confirmer que le rat est suffisamment anesthésié, ouvrez l’abdomen en pratiquant une incision abdominale médiane et en séparant la peau et le muscle. Deux étapes.

Une fois l'abdomen ouvert, placer les intestins dans le gant imbibé de solution saline. Replier le gant autour des intestins afin d'éviter la perte d'humidité. Retirer le tissu adipeux recouvrant l'aorte abdominale.

Disséquez l'aorte depuis la région infrarénale jusqu'à la bifurcation, en prenant soin de ne pas endommager les branches des vaisseaux. Si nécessaire, ligaturez les branches de l'aorte après avoir disséqué l'aorte. Commencez par placer une pince microchirurgicale sur la partie infrarénale de l'aorte afin d'arrêter le flux sanguin.

Placez ensuite une deuxième pince près de la bifurcation de l'aorte. Maintenant que le flux sanguin est interrompu, retirez un court segment de l'aorte. Puis prélevez le greffon aortique du donneur qui a été conservé dans du sérum physiologique à 0,9 % sur de la glace.

Raccourcissez-le à la longueur appropriée et positionnez-le dans l'intervalle de l'aorte. Reliez l'aorte du donneur à celle du receveur à l'aide de sutures continues en prolène 8-0, en commençant par l'anastomose bout à bout au niveau de l'extrémité crâniale. Une fois l'anastomose bout à bout à l'extrémité distale terminée, ouvrez soigneusement le clamp distal.

Ensuite, ouvrez délicatement le clamp crânien. Un pouls doit être visible à l'extrémité distale de l'aorte. Replacez maintenant les intestins dans l'abdomen et rincez l'abdomen avec du sérum physiologique stérile préchauffé.

Fermer la couche musculaire de la paroi abdominale à l’aide de points continus en proline six zéro. Ensuite, utiliser des points continus en proline cinq zéro pour fermer la peau pendant que le rat est encore sous anesthésie. Injecter quatre à cinq milligrammes par kilogramme de carprofène par voie sous-cutanée.

Replacer l'animal dans sa cage. Ajouter du méthimazole à l'eau de boisson comme médicament contre la douleur pendant trois jours. Après la transplantation.

Les résultats d'histopathologie après 120 jours seront présentés sur notre microscope d'histologie. Les images montreront clairement le développement de la vasculopathie de greffe. Le rétrécissement luminal développé sera mis en évidence par animation informatique.

Nous venons de vous montrer comment réaliser une transplantation aortique allogénique chez le rat. Nous avons également démontré le développement réussi d'une vasculopathie du greffon après 120 jours à l'aide de l'histopathologie. Cette méthode permet d'étudier les effets initiaux des médicaments sur la vasculopathie chronique du greffon.