Création d’un modèle de rongeur d’anévrisme de l’aorte abdominale en bloquant adventitiels Vasa Vasorum Perfusion

L’objectif global de cette procédure est d’induire une hypoxie du tissu aortique pour l’initiation d’un anévrisme de l’aorte abdominale ou AAA avec dilatation progressive de l’aorte chez le rat. Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans la période de recherche sur les anévrismes de l’aorte sur les mécanismes responsables du développement et de la rupture des anévrismes de l’aorte abdominale. Le principal avantage de cette technique est que les caractéristiques morphologiques et pathologiques de celle entre le modèle de rat sont similaires à celles observées dans les anévrismes de l’aorte abdominale humaine.

Nous avons eu l’idée de cette méthode pour la première fois lorsque nous étudiions une autre possibilité d’un AAA humain. La démonstration visuelle de cette méthode est essentielle car la chirurgie d’induction de l’hypoxie est difficile à apprendre par le seul biais d’instructions textuelles. Tatsuro Yata, notre chirurgien vasculaire, et Hirona Kugo, tous deux anciens docteurs de notre laboratoire, feront la démonstration de la procédure.

Après avoir confirmé le niveau approprié de sédation par pincement des orteils, utilisez un rasoir électrique pour raser les poils abdominaux d’un rat de 300 à 400 milligrammes, suivi d’une désinfection séquentielle à l’alcool et à la solution de povidone iodée de la peau exposée. Placez le rat sur la table d’opération en position couchée et appliquez une pommade sur les yeux de l’animal. Ensuite, utilisez des ciseaux pour faire une incision abdominale médiane ventrale et utilisez de la gaze stérile et un écarteur de plaie pour emballer le contenu abdominal dans la cavité abdominale.

Pour détacher l’aorte du tissu périvasculaire, utilisez une pince à épiler pour ramasser et déchirer doucement le rétropéritoine, exposant ainsi la paroi aortique. Ensuite, exfoliez l’aorte infrarénale dans l’espace rétropéritonéal de la veine rénale gauche jusqu’à la bifurcation du tissu périvasculaire. Utilisez une suture en soie 5-0 pour ligaturer les vaisseaux qui se ramifient à partir de l’aorte abdominale afin de bloquer l’apport sanguin à un point éloigné de l’aorte qui ne rétrécit pas la lumière aortique.

Pour bloquer le flux sanguin aortique, placez des clips vasculaires juste en dessous de l’artère rénale et juste au-dessus de la bifurcation de l’aorte. Semblable à la création d’une hémorragie à la surface de la paroi aortique, insérez le micro-ciseau à 5 mm distalement du clip aortique adjacent aux branches de l’artère rénale pour couper la paroi aortique antérieure et utilisez une aiguille à demeure de calibre 24 pour insérer peu profondément un cathéter en polyuréthane à travers l’incision. Fixez une seringue de 1 ml remplie d’eau sur le polyuréthane et rincez le sang restant de l’aorte.

Ensuite, coupez un nouveau cathéter en polyuréthane de 10 mm de long et insérez-le complètement dans l’incision de la lumière aortique. Repositionnez le point médian du cathéter pour qu’il corresponde à l’emplacement de l’incision et utilisez un 8-0 Suture monofilament pour fermer l’incision avec une suture interrompue. Lister l’aorte abdominale avec un nœud de chirurgien à l’aide d’une suture en soie 5-0 et d’un cathéter en polyuréthane.

Lorsque le cathéter est bien fixé, retirez les clips vasculaires au niveau de la bifurcation aortique et sous l’artère rénale pour rétablir le flux sanguin antérograde et confirmer la présence d’une pulsation aortique macroscopique. Après avoir retiré la gaze, utilisez une suture en polypropylène 4-0 pour fermer fermement l’incision abdominale en deux couches afin d’éviter une protrusion d’un organe. Ensuite, appliquez de la lidocaïne topique sur l’incision abdominale et placez le rat sur un coussin chauffant avec surveillance jusqu’à ce que la récompense soit complète.

En postopératoire, observez l’évolution temporelle de l’aorte élargie sur une échographie échographique, en mesurant le diamètre maximal du bord intérieur au bord extérieur de l’aorte abdominale selon les protocoles standard. 28 jours après l’opération, utilisez un scalpel pour ouvrir l’abdomen avec une nouvelle incision ventrale et utilisez des ciseaux pour prélever l’anévrisme. Placez les aortes récoltées dans du formol tamponné à 10 % pendant 24 à 48 heures.

Après avoir intégré les aortes dans de la paraffine et obtenu des sections du tissu aortique, selon les protocoles standard, hydratez les sections de paraffine fixées dans de l’eau distillée pendant 10 minutes, suivies d’une incubation dans l’hématoxyline de Verhoeff. La rouille et la corrosion peuvent être identifiées avec l’hématoxyline de Verhoeff et l’activité de laboratoire de solutions de van Gieson. Par conséquent, la fraîcheur et les temps d’incubation de ces colorants tissulaires sont importants pour l’archivage et la coloration facultative.

Après 25 minutes, rincez les sections avec trois lavages de 1 minute à l’eau, suivis de 10 à 30 trempages dans une solution différenciante. Rincez à nouveau les sections trois fois à l’eau et placez les échantillons dans du thiosulfate de sodium à 5 % pendant une minute. Après un autre lavage à l’eau, immergez les échantillons dans la solution van Gieson pendant cinq minutes.

Ensuite, déshydratez les tissus lors d’immersions ascendantes à l’éthanol de 30 secondes, suivies d’une clairance avec deux incubations de xylène de 5 minutes. Utilisez ensuite un support de montage par résonance pour couvrir les sections avec des lamelles de taille appropriée. Sur ces images, un anévrisme représentatif de l’aorte abdominale, 28 jours après l’insertion du cathéter, est montré.

La mesure des extrémités supérieure et inférieure de l’aorte par échographie transabdominale révèle un diamètre normal sans dilatation immédiatement après la mise en place du cathéter, qui augmente jusqu’à une taille maximale environ 14 jours après la mise en place et reste inchangé ou augmente légèrement jusqu’à la fin de la période expérimentale. L’analyse histopathologique de l’anévrisme au jour 28 révèle une dégradation importante des fibres élastiques par rapport à celle observée au jour zéro. Une fois maîtrisée, cette technique peut être complétée en environ une heure si elle est exécutée correctement.

Après cette procédure, d’autres méthodes telles que l’analyse in vitro peuvent être effectuées pour répondre à des questions supplémentaires sur les fonctions en série individuelles. Après son développement, cette technique a ouvert la voie aux chercheurs dans le domaine de l’anévrisme de l’aorte abdominale pour explorer la maladie dans des groupes démographiques de patients spécifiques. Après avoir regardé cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la façon d’induire une hypoxie du tissu aortique pour l’initiation d’anévrismes de l’aorte abdominale avec dilatation aortique progressive chez le rat.

N’oubliez pas que travailler avec des instruments chirurgicaux peut être extrêmement dangereux et que des précautions contre les blessures et les infections doivent toujours être prises lors de l’exécution de cette procédure.