Encyclopedia of Experiments: Biology
Un abonnement à JoVE est nécessaire pour afficher ce contenu. Connectez-vous ou commencez votre essai gratuit.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- أولا، جمع الذباب في المرحلة المطلوبة من التنمية ووضعها في أنبوب معقم. لحساب الميكروبات الداخلية فقط، قم بتعقيم السطح الخارجي للذباب عن طريق غمره في الإيثانول بنسبة 70٪. لقياس كل من الميكروبات الداخلية والخارجية، تخطي خطوة التعقيم هذه.
يجب أن يكون لديك الآن خليط متجانس يحتوي على البكتيريا التي يمكنك زراعتها.
في بروتوكول المثال، سنقوم بتطعيم الذباب العقيم بثقافة بكتيرية جنوبوتية أو محددة وجمع وقياس CFUs.
- استخدم نصائح التصفية لنقل 100 ميكرولتر من النمو بين عشية وضحاها إلى أنبوب ميكروفوج معقم.
بعد الحصول على OD600، قم بإزالة النافورة بطرف ماصة واستخدم mMRS الطازج لإعادة تعليق الكريات. اخلط السلالات البكتيرية المخففة بنسب متساوية لإنشاء كوكتيل متعدد الأنواع. نقل 50 ميكرولتر من الكوكتيل إلى الأنابيب المخروطية التي تحتوي على النظام الغذائي العقيم والبيض المصفى. تأكد من إضافة البكتيريا بعد نقل البيض لمنع التلوث بين القنينات ثم ضع الأنابيب الملقحة في الحاضنة.
لقياس وحدات تشكيل المستعمرة أو CFUs ، قم بنقل خمس ذبابات إلى أنبوب ميكروفوج 1.7 ملليلتر يحتوي على 125 ميكرولتر من الخرز الخزفي و 125 ميكرولتر من مرق mMRS. تجانس الذباب باستخدام متجانس الأنسجة.
إزالة 10 ميكرولتر من البئر الأول وإضافته إلى البئر الثاني الذي يحتوي على 70 ميكرولتر من MRS. ميكس محتويات البئر الثاني جيدا. ثم نقل 10 ميكرولترات من البئر الثاني إلى البئر الثالث الذي يحتوي على 70 ميكرولتر من MRS، واخلط جيدا. نقل 10 ميكرولترات من كل تمييع إلى لوحة mMRS. يميل الطبق قليلا لنشر التخفيف عدة ملليمترات أسفل سطح الأجار والسماح للسائل بالجفاف قبل تحريك اللوحة. إلى 100 مستعمرة معزولة.
