Isolement de cellules souches de mélanome : une méthode pour obtenir des cellules de mélanome CD133 positives et négatives à l’aide du tri cellulaire activé par magnétisme

- Le mélanome abrite une petite sous-population de cellules souches cancéreuses possédant à la fois des capacités d’auto-renouvellement et d’initiation tumorale. CD133 ou Prominin-1, une glycoprotéine transmembranaire pentaspan, est l’un des marqueurs clés exprimés par les cellules souches cancéreuses du mélanome métastatique. Pour isoler les cellules CD133 positives, commencez par une suspension de cellules de mélanome primaire dans un tampon approprié.

Incuber avec un réactif bloquant contenant des protéines qui bloquent les sites de liaison non spécifiques à la surface de la cellule. Traitez les cellules avec des anticorps primaires CD133 biotinylés. Ces anticorps se lient aux antigènes CD133 exprimés sur les cellules CD133 positives. Maintenant, ajoutez des microbilles magnétiques anti-biotine à la suspension. Incuber pour que les microbilles se lient aux cellules marquées à la biotine.

Enfin, passez la suspension incubée à travers une colonne placée dans un champ magnétique. Grâce à l’influence magnétique, toutes les cellules CD133-positives marquées avec les microbilles collent à la colonne, tandis que les cellules non marquées passent à travers. Collectez ces cellules CD133-