Coloration par anticorps des mélanocytes de cochenilles : une technique pour détecter les facteurs de transcription exprimés dans les mélanocytes associés aux écailles dorsales de modèles de poisson-zèbre

- Les facteurs de transcription sont des protéines contenant des domaines de liaison à l’ADN. Ils se lient à des séquences d’ADN spécifiques et aident à réguler l’expression des gènes dans les cellules. Pour détecter l’expression du facteur de transcription dans les mélanocytes associés aux écailles, il faut d’abord prélever des écailles dorsales pigmentées foncées sur un poisson-zèbre anesthésié. Fixez les écailles et traitez-les avec une solution de perméabilisation pour rendre les mélanocytes individuels perméables.

Traitez avec une solution d’eau de Javel pour éliminer les granules de pigment de mélanine foncée des cellules. Ce processus de blanchiment élimine les risques de signaux de fond associés aux pigments lors des étapes de coloration ultérieures. Incuber avec une solution bloquante contenant des protéines pour bloquer les sites de liaison aux protéines non spécifiques à la surface de la cellule.

Maintenant, traitez l’échantillon avec les anticorps primaires souhaités. Ces anticorps se lient à leurs facteurs de transcription cibles dans les cellules. Ensuite, étiquetez l’échantillon avec des anticorps secondaires fluorescents spécifiques aux anticorps primaires. De plus,