La ventilation à pression contrôlée pour induire lésion pulmonaire aiguë chez la souris

L’objectif global de cette procédure est d’induire des lésions pulmonaires chez les souris à l’aide d’un ventilateur. Ceci est accompli en effectuant une trachéotomie et en administrant une ventilation mécanique à haute pression. Ensuite, un cathéter de l’artère carotide est inséré pour mesurer les paramètres hémodynamiques.

Une fois que l’animal a été sous respirateur suffisamment longtemps pour induire des lésions pulmonaires, des échantillons de sang artériel et du liquide de lavage broncho-alvéolaire sont prélevés. La dernière étape de la procédure consiste à prélever du tissu pulmonaire pour une analyse plus approfondie. En fin de compte, il est possible d’obtenir des résultats qui corrèlent les changements dans les échantillons prélevés avec la durée de la ventilation mécanique.

Le principal avantage de cette technique par rapport aux méthodes existantes comme l’inhalation de LPS est qu’elle induit une lésion pulmonaire aiguë, qui ressemble à toutes les principales caractéristiques du syndrome de détresse respiratoire aiguë trouvées chez l’homme. Pour commencer, placez une souris anesthésiée en position couchée sur une table chauffée à température contrôlée, enroulez le matériau de suture autour de chaque extrémité, puis collez les sutures sur la table. Ensuite, fixez la tête en place en passant une suture sous les dents supérieures.

Administrez un bolus salin de 500 microlitres et insérez une sonde rectale attachée à un contrôleur de rétroaction thermique pour vous assurer que la température corporelle reste à 37 degrés Celsius. Une fois préparée, la souris peut être recouverte d’huile minérale pour réduire l’exposition aux allergènes des cheveux. Enfin, couvrez l’animal d’un emballage alimentaire disponible dans le commerce pour aider à maintenir la température corporelle.

Pour exposer la trachée, faites une incision le long du cou et émoussez, disséquez le muscle environnant et le tissu conjonctif. Placez deux sutures chirurgicales de 10 centimètres de long sous la trachée à environ un centimètre l’une de l’autre. Utilisez d’abord des ciseaux mc et Vanna pour inciser soigneusement la trachée entre deux anneaux de cartilage, à environ trois à quatre millimètres sous le larynx.

Pour terminer l’intubation, insérez l’extrémité d’une canule en polyéthylène émoussée à un angle de 85 degrés dans la trachée. Ensuite, inclinez la canule de manière à ce qu’elle soit alignée avec la lumière trachéale. Avancez lentement le tube jusqu’à ce que la pointe ait disparu dans l’ouverture du thorax.

Fixez le tube en position avec les deux sutures chirurgicales qui ont été placées sous la trachée plus tôt. Enfin, connectez le tube au ventilateur. Les lésions pulmonaires sont induites à l’aide d’un servo 900 C de Siemens.

À l’aide d’une technique de ventilation à pression contrôlée, réglez le pic de pression inspiratoire à 45 millibars avec une fréquence de 80 respirations par minute et une pression expiratoire finale positive de zéro à trois millibars avec une fraction d’oxygène inspiré égale à un, le rapport inspiration/expiration est de un pour un. Une fois que l’animal est connecté avec succès au ventilateur, un cathéter est inséré dans l’artère carotide pour mesurer la pression artérielle et la fréquence cardiaque. Un morceau d’artère plus long sera exposé si le bras est d’abord attaché sur le côté du corps.

Commencez par disséquer les muscles para-trachéaux pour exposer l’artère carotide une fois isolée, et non une suture à l’extrémité proximale de l’artère, et fixez-la avec une pince ou du ruban adhésif. Placez une deuxième suture à environ un centimètre de la première et attachez-la, mais ne serrez pas la suture autour de l’artère. Disséquez l’artère jusqu’à l’extrémité très distale et placez une petite pince pour éviter la perte de sang.

Utilisez des micro-ciseaux pour découper une petite ouverture diagonale dans l’artère au-dessus de la deuxième suture. Tenez l’ouverture avec une pince fine tout en insérant le cathéter et serrez le nœud pour le maintenir en place. Ensuite, desserrez la pince et avancez le cathéter. Plus loin.

Avancez le cathéter au-delà de la deuxième suture. Fixez le cathéter avec plusieurs nœuds et du ruban adhésif. Une fois le cathéter en place, perférez une solution saline normale à un taux de 0,1 millilitre par heure et joignez-le à l’appareil de mesure de la pression artérielle.

Enfin, fixez des pinces aux extrémités pour surveiller la fréquence cardiaque. Après trois heures de ventilation mécanique, des échantillons sont prélevés pour mesurer l’étendue des lésions pulmonaires. Tout d’abord, prélevez des échantillons du cathéter de l’artère carotide pour l’analyse des gaz du sang.

Après avoir approfondi le niveau d’anesthésie, retirez le raccord du ventilateur et insérez une seringue remplie d’un millilitre de solution saline tamponnée au phosphate. Plongez la seringue et attendez trois secondes avant de recueillir le liquide de lavage broncho-alvéolaire dans la seringue. Il convient de noter que le volume récupéré doit être nettement inférieur à un millilitre. Flash.

Congelez le liquide de lavage broncho-alvéolaire dans de l’azote liquide et stockez-le à moins 80 degrés Celsius. Pour isoler les poumons, faites d’abord une incision juste en dessous du sternum. Tenez le sternum avec une pince et étendez l’incision le long de la cage thoracique. Ensuite, coupez le diaphragme sur les bords et loin des côtes pour révéler une vue claire de l’ouverture inférieure du thorax.

Soulevez le sternum à l’aide d’une pince et ouvrez le thorax à l’aide de longues entailles sur les côtés droit et gauche, en gardant les coupures aussi latérales que possible afin que toute la paroi antérieure du thorax puisse être tournée vers le haut. Connectez une aiguille de calibre 27 et demi à une seringue remplie de cinq millilitres de PBS. Insérez l’aiguille dans le ventricule droit et rincez la circulation arytique jusqu’à ce que les poumons deviennent complètement blancs.

Si ce n’est pas le cas, assurez-vous que la pointe de l’aiguille est correctement placée dans le ventricule droit et repositionnez-la si nécessaire. Excise les poumons et bloque en tirant le cœur vers le haut et en coupant la trachée. Utilisez des mouchoirs pour absorber le sang qui obstrue votre vue.

Tirez le cœur en direction de l’abdomen et coupez soigneusement le long de la colonne vertébrale pour mobiliser tous les organes thoraciques. Coupez l’aorte et placez les organes thoraciques sur une table d’opération propre. Coupez le cœur et nettoyez tous les principaux vaisseaux de l’échantillon.

Assurez-vous qu’il n’y a pas de tissu thymus encore attaché aux poumons. Séparez les lobes des poumons, placez-les dans des tubes individuels, cassez les cramponnez, congelez-les et stockez-les à moins 80 degrés Celsius. Pour une analyse plus approfondie.

Comme on le voit ici, la teneur en protéines du liquide de lavage broncho-alvéolaire augmente avec la durée de la ventilation. La variation relative de la teneur en protéines est normalisée à zéro heure de ventilation pour évaluer l’étendue des lésions pulmonaires. Eliza pour l’albumine et la Myla peroxydase sont effectuées et les cellules inflammatoires du liquide BL sont quantifiées.