Mesure des potentiels d’action musculaire composés dans les muscles des membres antérieurs de souris in vivo

Fixez une souris anesthésiée en position couchée.

Insérez par voie sous-cutanée les électrodes de stimulation, en les alignant avec le nerf innervant le muscle du membre antérieur.

Insérez par voie sous-cutanée l’électrode d’enregistrement sur le dessus du muscle du bras, l’électrode de référence dans les coussinets de marche et l’électrode de masse sur le côté.

Appliquez des impulsions électriques pour stimuler les neurones des membres antérieurs, induisant un afflux d’ions positifs et une génération de potentiel d’action.

Le potentiel d’action induit la libération de neurotransmetteurs excitateurs à la jonction neuromusculaire, conduisant à l’activation et à la contraction des fibres musculaires.

Enregistrez la réponse combinée de toutes les fibres musculaires - le potentiel d’action musculaire composé, ou CMAP.

Appliquez des stimuli maximaux pour assurer la stimulation de toutes les fibres musculaires.

Terminez la stimulation et déterminez la latence, le délai entre le début du stimulus et la réponse.

Une latence accrue indique une diminution de la vitesse de conduction due à la démyélinisation neuronale.

Mesurez l’amplitude CMAP ; une amplitude diminuée indique la perte de neurones fonctionnels.

Pour mesurer le CMAP sur les membres antérieurs, positionnez la souris sur le coussin chauffant en position couchée et utilisez du ruban adhésif pour étendre les deux membres antérieurs sur les côtés du corps. Ensuite, placez 5 millimètres de l’électrode de stimulation par voie sous-cutanée sans perforer les muscles sous-jacents des deux côtés du membre antérieur pour les aligner avec le nerf du plexus brachial.

Ensuite, placez l’électrode d’enregistrement par voie sous-cutanée au-dessus du muscle biceps brachial. Par la suite, placez 3 millimètres de l’électrode de référence à un angle de 30 degrés sur les coussinets de marche et insérez l’électrode de terre par voie sous-cutanée sur le côté de la souris.

Les électrodes sont à proximité les unes des autres dans cette configuration. Empêchez les électrodes de se toucher car cela déforme l’enregistrement.

Stimulez tous les axones à l’aide d’une impulsion par seconde avec une durée de stimulus de 0,1 milliseconde. Pour acquérir des données, démarrez la stimulation en appuyant sur le bouton de stimulus récurrent de l’unité de contrôle et tournez le bouton du contrôleur d’intensité pour augmenter le stimulus.

Pour atteindre les stimuli supramaximaux, appliquez des stimuli croissants en tournant le bouton du contrôleur d’intensité jusqu’à ce que l’amplitude de la réponse CMAP cesse d’augmenter. À partir de là, augmentez le stimulus de 20 % pour vous assurer que l’amplitude du CMAP a atteint sa réponse maximale. Mettez fin à la stimulation en appuyant à nouveau sur le bouton de stimulus récurrent.

Utilisez l’outil de marquage pour indiquer les points suivants dans l’enregistrement : initiation de la réponse, pic positif maximal et pic négatif maximal. L’initiation du stimulus est déterminée automatiquement par le logiciel.

Déterminez la latence comme un délai entre le déclenchement du stimulus et le début de la réponse. Utilisez la latence pour évaluer la démyélinisation des axones. Mesurez l’amplitude du pic négatif maximal au pic positif maximum, et utilisez l’amplitude de l’amplitude pour corréler le nombre d’axones fonctionnels.