Imagerie de polysomes isolés du cerveau d’une souris à l’aide de la microscopie à force atomique

Commencez avec une feuille de mica avec des polysomes collés isolés du tissu cérébral de la souris.

Un polysome est un complexe de plusieurs ribosomes attachés à un brin d’ARN.

À l’aide de ruban adhésif, fixez la feuille de mica au porte-échantillon.

Placez le porte-échantillon dans la platine du microscope à force atomique.

Positionnez le porte-à-faux prémonté. Alignez le laser et le détecteur pour assurer une détection précise du signal pendant l’imagerie.

Ajustez la fréquence d’oscillation du porte-à-faux pour optimiser la détection des caractéristiques de surface tout en préservant l’intégrité de l’échantillon.

Commencez l’imagerie en faisant osciller la pointe en porte-à-faux sur la surface de l’échantillon.

Lorsque la pointe rencontre une surface élevée du polysome, le laser est dévié.

Ces déviations du laser sont capturées par le détecteur, qui génère une image avec une résolution à l’échelle nanométrique.

Utilisez un logiciel approprié pour corriger les effets arbitraires d’inclinaison et de dérive, ce qui permet de visualiser le polysome.

Fixez l’échantillon préparé au porte-échantillon de l’AFM à l’aide de ruban adhésif double face. Ensuite, insérez le support d’échantillon dans l’étage AFM conformément aux instructions du fabricant. Après l’étalonnage, approchez-vous de l’échantillon jusqu’à ce que la pointe en porte-à-faux s’engage dans la surface.

Sélectionnez une zone de balayage de 2 x 2 microns, une résolution d’au moins 512 x 512 pixels. Choisissez le mode de soustraction en arrière-plan en direct et sélectionnez une échelle Z de 20 à 25 nanomètres. Ensuite, commencez l’acquisition de l’image. Inspectez l’image, à la recherche de la présence d’objets ronds caractérisés par une hauteur comprise entre 10 et 15 nanomètres lors de l’acquisition d’images dans l’air.

Ensuite, ajustez le point de consigne et les paramètres de retour jusqu’à ce que les objets pointus soient visualisés. L’arrière-plan devrait apparaître relativement plat dans de bons échantillons avec des objets de 2 à 4 nanomètres de haut. Une fois que l’image est bonne, acquérez plusieurs balayages de 2 par 2 microns dans différentes zones d’échantillonnage.