Name: Une nouvelle méthode de stabilisation vertébrale pour Produire contusion Traumatisme médullaire (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-01-05T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 24 s
Description: Découvrez une méthode de stabilisation vertébrale pour produire des contusions traumatiques médullaires reproductibles chez le rat adulte. Cette technique améliore la précision expérimentale en neurosciences.

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Ce travail a été soutenu par les Instituts nationaux de la santé [NS36350, NS52290 et NS50243 à X-MX]; Fonds de dotation George Mari Hulman; l&#39;État de l&#39;Indiana; et un prix Ruth L. Kirschstein service national de recherches (NRSA) 1F31NS071863 à CLW

1. Exposition du col de l&#39;utérus vertébrale Laminae <ol><li> Nettoyer la surface chirurgicale avec 70% d&#39;éthanol, préchauffée avec un coussin chauffant. Couvrir la surface avec un champ opératoire stérile avant de placer une gaze stérile, des cotons-tiges, et des outils chirurgicaux autoclaves dans le domaine de la chirurgie. Utilisez un stérilisateur de microbilles pour la chirurgie inter-stérilisation des instruments chirurgicaux. </li><li> Anesthésier le rat avec de la kétamine (87,7 mg / kg) / xylazine (12,3 mg / kg) par voie intraperitoneale (IP). Le plan de l&#39;anesthésie adéquate est atteinte lorsque l&#39;animal cesse de répondre à un stimulus de pincement orteil. Injecter en sous-cutané 0,01-0,05 mg / kg buprénorphine et 5 mg / kg Carprofen avant l&#39;intervention chirurgicale. La buprénorphine devrait alors être administré tous les 8-12 h et Carprofène une fois par jour, pour les 4-7 premiers jours après la chirurgie. </li><li> Appliquer une pommade de protection pour les yeux de l&#39;animal pour éviter le dessèchement de la cornée pendant la chirurgie. </li><li> Rasez la zone chirurgicale sur la dorsalesurface du rat de la région médio-thoracique à l&#39;arrière de la tête avec une tondeuse. Enlever la fourrure rasée aide d&#39;un aspirateur équipé d&#39;un filtre HEPA. </li><li> Appliquer la solution de bétadine à la zone rasée comme un gommage chirurgicale puis nettoyer la zone avec 70% tampons imbibés d&#39;alcool isopropylique. </li><li> Utilisez une lame de scalpel pour effectuer une incision médiane de 3-4 cm dans la peau de la base de la tête caudale à la mi-thorax. </li><li> Identifier la ligne médiane du fascia et les muscles sous-cutanés antérieure à la glande de l&#39;hibernation au bas du cou; couper à travers le trapèze et d&#39;autres muscles le long de la ligne médiane pour réduire l&#39;hémorragie. </li><li> Trouver la ligne médiane de deux régions du tissu adipeux sous-tend les muscles; couper les muscles paraspinous caudale strictement le long de la ligne médiane, et les couches musculaires séparés en utilisant un petit écarteur de tissu jusqu&#39;à ce que le niveau du T2 thoracique apophyse épineuse est atteint. </li><li> Identifier et couper le muscle relié à l&#39;apophyse épineuse T2 à utiliser this la structure comme un point de repère anatomique. </li><li> Retirer la pointe cartilagineuse de l&#39;apophyse épineuse de T2 pour améliorer la visibilité des vertèbres cervicales. </li><li> Séparer les muscles spinaux latéralement des apophyses épineuses et lames de C4-T1; Toutefois, épargner le muscle couvrant sur la lame de C3 pour prévenir les saignements. </li><li> Couper les muscles sur les lames à partir de C4-T1 latéralement vers les facettes des deux côtés de la colonne vertébrale. </li><li> Après la moelle lames sont exposés, placer l&#39;animal sur sa surface ventrale dans le canal en forme de U du stabilisateur. </li><li> Identifier la vertèbre C5 en comptant les apophyses épineuses rostralement du T2 à T1 repère, C7, C6, et enfin C5. </li></ol> 2. Stabiliser les vertèbres et Exécution de l&#39;impact des blessures <ol><li> Positionner les deux bras de stabilisateur en acier inoxydable à suspendre l&#39;animal en plaçant les bords dentelés des bras sous l&#39;lateral facettes de l&#39;C5-6 vertèbres (figure 1C). Après avoir obtenu les bras avec vertèbres en place (figure 2B), régler l&#39;appareil pour assurer la stabilisation de la colonne vertébrale est de niveau et centré. Enfin, verrouiller les bras en serrant les vis du stabilisateur. </li><li> Couper les ligaments entre les apophyses épineuses et lames à C4-5 et C5-6 d&#39;identifier la marge de la lame de C5. </li><li> L&#39;utilisation d&#39;un micro-rongeur, un clip loin la moitié de la lame sur la droite à C5 comme prévu SCI (Figure 5C-E). Après laminectomie, transport de l&#39;animal avec le stabilisateur sous le dispositif de blessures. Fixer l&#39;animal avec stabilisateur sur un support (figure 3A-C) afin d&#39;aligner avec précision le piston sur la cible de la moelle épinière à l&#39;aide d&#39;un micro-manipulateur latéral (figure 3). </li><li> À fort grossissement, localiser les zones d&#39;entrée de la racine dorsale C5 et C6 (DREZs) sur la surface de la moelle épinière dorsale exposée sans durotomy. Visez le piston au milieu des deux DREZs identifiés et mi-chemin entre la ligne médiane et le bord latéral de la moelle épinière (figure 5B). </li><li> L&#39;utilisation d&#39;un dispositif de frappe NYU / Mascis avec une pointe de 2,5 mm de diamètre (figure 3A et B), produire une C5 hémi-contusion (figure 5B &amp; E) par une baisse de 10 g tige x 12,5 mm de hauteur (figure 2A). </li><li> Vérifiez la blessure visuellement par des ecchymoses sur la moelle épinière (Figure. 5E, flèche) et vérifiez les paramètres de blessures fournies par le logiciel NYU 12,17 (figure 6). </li><li> muscles de suture et des tissus mous avec stérile 4-0 vicryl suture, puis fermez l&#39;incision de la peau avec des agrafes chirurgicales (EZ Clips). </li><li> Appliquer une pommade antibactérienne sur le site chirurgical. </li><li> Administrer 5,0 ml de solution saline stérile à 0,9% sous-cutanée à l&#39;animal pour l&#39;hydratation. </li><li> Placer l&#39;animal dans un chaleurenvironnement contrôlé par (recirculation padcage d&#39;eau chaude sur un coussin chauffant)) avec de la nourriture humide prévu sur la literie (changés tous les jours), et une bouteille d&#39;eau avec un long bec pour un accès facile placé sur le plancher de la cage. Fournir des soins pour assurer une récupération adéquate avant de retourner à l&#39;animal de la cage de la maison. </li><li> Comme il se agit d&#39;une blessure contondante cervicale unilatérale, l&#39;animal sera probablement perdre fonction de la patte avant ipsilatérale, transitoire, qui commence à récupérer pendant les premières semaines après l&#39;accident. Cependant, la fonction controlatéral doit rester intact, donc l&#39;animal doit être capable de manger et boire sans perte de valeur, et ne ont qu&#39;une dépréciation mineur dans la locomotion et le toilettage. </li></ol>

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Nous ne avons rien à communiquer.

Ici, nous avons démontré une méthode de stabilisation cervicale de la colonne vertébrale pour la production unilatérale contondante SCI à C5. Ce procédé de stabilisation augmente la précision du traumatisme anatomiquement compatible et produit des déficits fonctionnels 13,18. En d&#39;autres modèles qui se appuient sur dorsale serrage des apophyses épineuses, le risque de dommages de processus épineux ou de détachement des pinces de la vertèbre est assez élevé. Ces modèles peuvent également permettre à la colonne vertébrale considérable décalage et rendement de la force de contusion et de la nature flexible de la colonne vertébrale et les colonnes vertébrales (figure 1A et B). Le tissu rendement modifie le temps et les résultats en vigueur des blessures imprévisibles (figure 1A-B &amp; 6B) de contact plongeur-tissu. Notre stabilisation vertébrale décrit fournit également d&#39;autres avantages à la préparation chirurgicale: 1) cette méthode stabilise entièrement centrée sur les vertèbres C5 sous lamicroscope chirurgical qui augmente la précision des laminectomies (figure 1c); 2) l&#39;animal monté dans le stabilisateur en forme de U peuvent être prises directement à partir de l&#39;emplacement de chirurgie à la fixation de montage personnalisé, ce qui évite la procédure de remonter l&#39;animal sur les appareils SCI et de gagner du temps; et 3) stabiliser les vertèbres au niveau de la blessure et dorsale et caudale directement au site souhaité de blessure peut grandement diminuer le déplacement du corps causé par la respiration, une autre mesure afin de réduire la variabilité. Le principal avantage de l&#39;utilisation de ce procédé de stabilisation est la quantité réduite de rendement, ou mouvement ventrale de la moelle épinière et de la colonne lors de l&#39;impact. Basé sur la physique simple d&#39;une blessure à une contusion, la force et l&#39;énergie de l&#39;impact seront transférés de la tige à la moelle épinière, idéalement avec l&#39;absorption de cette énergie sur le site de l&#39;impact cordon. Toutefois, si les rendements de la colonne vertébrale au-dessous du cordon, comme ce est possibledans le procédé de serrage épineuse dorsale (figure 1A et B), la force réelle appliquée à la corde est réduite et variable, en fonction du degré de rendement. Bien que cette vidéo illustre l&#39;ensemble de la procédure d&#39;un modèle SCI contondante col de l&#39;utérus, l&#39;essence de cet article est l&#39;introduction de la méthode de stabilisation vertébrale nous utilisons dans diverses applications dans notre laboratoire, en particulier pour les études SCI. Une version modifiée de ce dispositif de stabilisation et le procédé a été utilisé sur des souris 23 SCI. Cette méthode simple de la stabilisation de la colonne vertébrale est très utile pour la recherche SCI, et nous avons déjà utilisé cette méthode et l&#39;équipement pour effectuer une contusion thoracique ainsi que des modèles de SCI lacération. Un autre laboratoire a récemment décrit une variante de cette forme de stabilisation des lésions cervicales dans ce journal 22. En résumé, nous introduisons cette nouvelle méthode de stabilisation vertébrale à plusieurs Surgicprocédures al pour générer reproductible SCI expérimentale allant de laminectomie à la production des blessures. Les avantages de ce dispositif de stabilisation ne sont pas limités à col contusion de la moelle épinière, car cette méthode de stabilisation a été adapté pour une grande variété d&#39;expériences telles que les injections intra-rachidiennes, la transplantation cellulaire, la collecte du LCR des cisterna magna, hémisection et transection blessures, blessures contusion thoracique, l&#39;imagerie in vivo utilisant la microscopie à deux photons, et l&#39;enregistrement électrophysiologique moelle. L&#39;augmentation de la qualité des interventions chirurgicales et aux blessures de la colonne vertébrale et de réduire la variabilité expérimentale permettra de fournir un aperçu de véritables mécanismes de blessure et de récupération, et l&#39;écran les effets des différents traitements sur le désordre dévastateur de SCI.

Force mécanique cohérente et reproductible sur les tissus de la moelle cible est essentiel pour minimiser la variabilité fonctionnelle et histologique et pour établir avec succès des blessures de la moelle épinière contondante (SCI) modèles 1-7. La quantité de force appliquée à une région cible de la moelle épinière dépend des méthodes utilisées pour la stabilisation de la colonne vertébrale. Décalage en position de la colonne vertébrale cible lors d&#39;un contact entre le piston d&#39;impact et de la moelle épinière modifie la force de blessure résultant. Le modèle SCI contondante col de l&#39;utérus est un modèle cliniquement plus pertinent que d&#39;autres formes de SCI, car environ 50% des cas SCI homme se produisent à ce niveau 8, et plusieurs études ont été réalisées SCI en utilisant des modèles de blessures cervicales animaux 9-14. Bien que les modèles SCI contondantes utilisent souvent une certaine forme de stabilisation en serrant le processus de la colonne vertébrale antérieure et postérieure à l&#39;endroit de la blessure, cette préparation est difficile pour la production du col SCI. &amp;# 160; Comme le montre cette démonstration, le procédé de stabilisation est avantageux que nous avons développé dans sa capacité à augmenter à la fois la qualité et la reproductibilité de la blessure par contusion. En particulier, cette méthode de stabilisation vertébrale a été créé dans le but de modifier les lacunes et les défis des autres modèles: 1) la variabilité de rendement vertébrale sous la force de l&#39;impact peut se produire par serrage dorsales adjacente apophyses épineuses rostrale et caudale à la laminectomie. Le degré de déplacement vertébral dépend du nombre d&#39;articulations vertébrales entre l&#39;impact et les vertèbres étant stabilisée (figure 1). Par conséquent, plus les articulations impliquées la moins stable de la colonne vertébrale devient; 2) des processus épineux dorsales sont l&#39;insuffisance de serrage fragile et la cause à la suite d&#39;une fracture de l&#39;apophyse épineuse ou la pince de glisser hors du processus; et 3) les apophyses épineuses de ces vertèbres sont extrêmement courts entre la vertèbre C3 à T1 par rapport à ceux de la verte thoraciquebrae, ce qui rend difficile l&#39;aide de colliers traditionnels de saisir les apophyses épineuses pour stabiliser le rachis cervical. Nous décrivons ici un nouveau procédé de stabilisation de la colonne vertébrale pour la production en C5 contondante SCI femelles adultes de rats Sprague-Dawley. Cette méthode peut être utilisée pour la stabilisation d&#39;autres niveaux de la colonne vertébrale et la moelle épinière, et ainsi conjugués avec d&#39;autres appareils contondantes SCI, y compris le cordon Université de New York / multicentrique animaux Spinal Injury étude (NYU / Mascis) impacteur 15 (Figure 2) , Precision Systems et Instrumentation, LLC Infinite Horizon (IH) dispositif 16, l&#39;Ohio State University / électromagnétique Spinal Cord Injury dispositif 1, et l&#39;appareil Système blessures Louisville (LISA) 17, permettant une utilisation répandue dans la recherche SCI.

<table><tbody><tr><td>Purdue Products Bétadine Blouse chirurgicale</td><td>Fisher Scientific</td><td>19-027132</td><td></td></tr><tr><td>Éponges de gaze Dukal</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-415-490</td><td></td></tr><tr><td>Kétamine (87,7 mg/kg)/Xylazine (12,3 mg/kg)</td><td>Webster Veterinary</td><td>07-881-9413, 07-890-5745</td><td></td></tr><tr><td>Éthanol Decon 200 Proof</td><td>Fisher Scientific</td><td>04-355-450</td><td></td></tr><tr><td>Larmes artificielles Œil Pommade</td><td>Webster Veterinary</td><td>07-870-5261</td><td></td></tr><tr><td>Pommade antiobiotique</td><td>Webster Veterinary</td><td>07-877-0876</td><td></td></tr><tr><td>Applicateurs à pointe de coton</td><td>Fisher Scientific</td><td>1006015</td><td></td></tr><tr><td>Rongeur</td><td>Fine Science Tools</td><td>16000-14</td><td></td></tr><tr><td>Ciseaux chirurgicaux</td><td>Outils de science fine</td><td>15009-08</td><td></td></tr><tr><td>Ciseaux (dissection émoussée)</td><td>Outils de science fine</td><td>14040-10</td><td></td></tr><tr><td>Écarteur chirurgical</td><td>Outils de science fine</td><td>17005-04</td><td></td></tr><tr><td>Grande pince</td><td>Outils de science fine</td><td>11024-18</td><td></td></tr><tr><td>Pince fine</td><td>Outils de science fine</td><td>11223-20</td><td></td></tr><tr><td>Hemostat</td><td>Outils de science fine</td><td>13004-14</td><td></td></tr><tr><td>Scalpel</td><td>Outils de science fine</td><td>10003-12</td><td></td></tr><tr><td>Lame de scalpel #15</td><td>Fisher Scientific</td><td>10015-00</td><td></td></tr><tr><td>EZ Clips</td><td>Fisher Scientific</td><td>59027</td><td></td></tr><tr><td>Sutures stériles</td><td>Outils scientifiques fins</td><td>12051-10</td><td></td></tr><tr><td>Stérilisateur d’instruments</td><td>Outils scientifiques fins</td><td>14040-10</td><td></td></tr><tr><td>Stabilisateur chirurgical</td><td>Fabriqué sur mesure</td><td>N/A</td><td>Contactez Y. Ping Zhang pour plus de détails. (yipingzhang50@gmail.com)</td></tr><tr><td>Barres de stabilisation vertébrale (pieds d’extrémité griffus)</td><td>Fabriqué sur mesure</td><td>N/A</td><td>Contactez Y. Ping Zhang pour plus de détails. (yipingzhang50@gmail.com)</td></tr><tr><td>NYU/MASCIS Dispositif d’impact</td><td>fabriqué sur mesure</td><td>W. M. Keck Center for Collaborative Neuroscience Rutgers, The State University of New Jersey e-mail : impactor@biology.rutgers.edu</td><td></td></tr></tbody></table>

une nouvelle méthode de stabilisation vertébrale pour produire contusion traumatisme médullaire

A Novel Vertebral Stabilization Method for Producing  Contusive Spinal Cord Injury

Blessures animaux cliniquement pertinente moelle épinière cervicale (SCI) modèles sont essentiels pour développer et tester des thérapies potentielles; Toutefois, la production de SCI cervicale fiable est difficile en raison de l&#39;absence de méthodes satisfaisantes de stabilisation vertébrale. La méthode classique pour stabiliser la colonne vertébrale est de suspendre la colonne cervicale rostrale et caudale par des pinces attachées aux apophyses épineuses cervicales. Cependant, ce procédé de stabilisation ne parvient pas à empêcher le tissu produisant au cours de la contusion que les processus de la colonne vertébrale cervicale sont trop courtes pour être efficacement fixé par les pinces (figure 1). Ici, nous introduisons une nouvelle méthode pour stabiliser complètement la vertèbre cervicale au même niveau de la blessure d&#39;impact. Ce procédé minimise efficacement le mouvement de la colonne vertébrale à l&#39;endroit de l&#39;impact, ce qui améliore grandement la production de SIC cohérentes. Nous fournissons description visuelle de l&#39;équipement (Figure 2-4), la méthodes, et un protocole étape par étape, pour la stabilisation de la 5 vertèbre cervicale (C5) de rats adultes, pour effectuer une laminectomie (figure 5) et produire un contondante SCI par la suite. Bien que nous démontrons qu&#39;une contusion cervicale hémi-en utilisant le dispositif de frappe NYU / Mascis, cette technique de stabilisation vertébrale peut être appliqué à d&#39;autres régions de la moelle épinière, ou être adapté à d&#39;autres appareils SCI. Améliorer l&#39;exposition de la moelle épinière et la fixation par la stabilisation vertébrale peut être utile pour produire des blessures cohérentes et fiables à la moelle épinière. Ce procédé de stabilisation vertébrale peut également être utilisé pour des injections stéréotaxiques et des traceurs de cellules, et pour former une image en utilisant la microscopie à deux photons dans diverses études neurobiologiques.

À la suite de ce protocole, cohérente et reproductible cervicale hémi-contondante SCI est produite (Figure 5 &amp; 6). L&#39;utilisation d&#39;un stabilisant pour stabiliser les vertèbres processus latérales de la même vertèbre au niveau destiné à SCI permet à ces résultats satisfaisants. En utilisant ce procédé, non seulement la vertèbre C5 cible, mais également adjacent C4 et C6 sont rigidement fixés. Le logiciel NYU / Mascis fournit une lecture avec un graphique situé sur un x et y-axe et prend en charge l&#39;utilisation de notre méthode de stabilisation vertébrale, et de l&#39;équipement (figure 6). Ce procédé de stabilisation permet de réduire la variabilité des blessures que peut provoquer le déplacement vers le bas à partir du tissu cible et de la colonne vertébrale (figure 1). Après une lésion, un hématome bleuâtre unilatérale clairement centrée entre la C5 et C6 DREZs est visible (figure 5E). Ces paramètres de blessures sont conformes de l&#39;animal à l&#39;anusmal selon la lecture fournie par le logiciel NYU / Mascis (figure 6). Comme l&#39;hémi-contusion cervicale produit déficits des membres antérieurs claires, ce modèle est idéal pour évaluer membres antérieurs capacités fonctionnelles telles que l&#39;atteinte, toilettage 13, et l&#39;objet de manipulation 18-19. Comme déficits moteurs membres postérieurs sont moins importants, le Basso, Beattie et Bresnahan (BBB) ​​locomotrice échelle de notation 4 ne est pas approprié pour une utilisation dans ce modèle. Le résultat fonctionnel après une blessure est plus visible dans les ipsilatérales déficits patte extenseurs, dans laquelle le rat présente une &quot;matraqués&quot; poing avec tous les chiffres fléchie 18. Tous les animaux exposés à la même gravité des blessures et le niveau de la moelle épinière doivent présenter des déficits similaires à la patte antérieure ipsilatéral illustré dans ce protocole, lors d&#39;une lésion correcte. Animaux mal lésée peut présenter manifestation très différente et la durée des déficits 13,18. Histologiquement, ce modèle produit des dommages de matière grise et blanche à l&#39;épicentre des blessures et rostrale et caudale à l&#39;endroit de la blessure, conduisant à la lésion et de la cavité formation considérable contenue presque exclusivement dans le côté blessé de la moelle épinière. Un grand formes de cicatrice gliale principalement basée astrocytes aux frontières de lésion avec la mort neuronale massif 18. <img alt="Figure 1" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/50149/50149fig1highres.jpg" width="500" /> Figure 1: Illustration de la flexibilité de la colonne vertébrale au cours SCI contondante avec différentes méthodes de serrage. Figures A et B montrent flexibilité ou «rendement» de la colonne vertébrale lorsque apophyses épineuses sont serrés dorsale, permettant impacts inappropriées et des données incohérentes. L&#39;illustration montre la Une affiche beaucoup plus de flexibilité lors de l&#39;impact (ligne rouge pointilléeet les grandes flèches courbes) par rapport à celle représentée sur B (petites flèches courbes), que les pinces sont plus loin du site de laminectomie et des blessures. La figure C montre la stabilisation latérale avec notre dispositif décrit avec le bras stabilisateur fermement serrées sous l&#39;apophyse transverse de la vertèbre lorsque le site d&#39;impact sera effectuée. Il n&#39;y a pas de flexibilité de la colonne vertébrale au cours de cette procédure, comme la vertèbre d&#39;intérêt est complètement stabilisé. <img alt="Figure 2" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/50149/50149fig2highres.jpg" width="500" /> Figure 2: NYU / Mascis impacteur et le récipient de stabilisation personnalisé. Figure A affiche les pièces et fonctions de l&#39;appareil des blessures de la moelle épinière NYU / Mascis, avec de multiples réglages de la hauteur de la tige pour la gravité des blessures (en médaillon). Figures B et C illustrent le récipient en forme de U qui détient larat, et les bras de stabilisation en toute sécurité, en dents de scie qui stabilisent la colonne vertébrale au cours de la chirurgie et la blessure (conçu et réalisé par Zhang YP). <img alt="Figure 3" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/50149/50149fig3highres.jpg" width="500" /> Figure 3: système et microadjuster latérale de montage personnalisé sur l&#39;impacteur NYU / Mascis Figure A détaille les différentes composantes du système de montage personnalisé pour le stabilisateur de rat en forme de U pour les blessures de la moelle épinière.. Notez le microadjuster latérale dans la figure A, cruciale pour un alignement précis de la moelle épinière de rat de blessure. Figures B et C fournir de plus amples représentation du stabilisateur sans (B) et avec le conteneur de rat en forme de U (C) par rapport à d&#39;autres importants les composants du dispositif de blessure (système de montage conçus et produits par YP Zbloquer). <img alt="Figure 4" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/50149/50149fig4highres.jpg" width="500" /> Figure 4:. Mesures des composants individuels du dispositif et les pièces jointes stabilisation chirurgicale Chaque composant du système de stabilisation personnalisé est mis en surbrillance afin de faire apparaître les dimensions et la dimension (A, C et D). Bras de stabilisation thoraciques (B) sont présentés pour afficher l&#39;application éventuelle de ce dispositif pour une utilisation dans différents modèles de chirurgie de la colonne vertébrale. <img alt="Figure 5" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/50149/50149fig5highres.jpg" width="500" /> Figure 5: repères chirurgicaux et la préparation de l&#39;hémi-contusion lésion de la moelle épinière cervicale. Figures A et B décrivent les monuments correctes pour impa bonalignement de ct sur le rat exposé moelle épinière. Le point d&#39;impact appropriée est directement entre les dorsales racines C5 et C6 nerveuses (rostrale-caudale) et la ligne médiane et les bords latéraux de la moelle épinière (B). Montrer les statistiques de la CE, au plus fort grossissement, le processus d&#39;exposition de la moitié souhaitée de la moelle épinière cervicale en cas de blessure, par laminectomie unilatérale prudent. En outre, les chiffres D et E démontrer le cordon immédiatement avant et après la moelle épinière des blessures par contusion. Remarque l&#39;hémorragie visible (E) causée par l&#39;impact (flèche noire). <img alt="Figure 6" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/50149/50149fig6highres.jpg" width="500" /> Figure 6 :. Des exemples de acceptables par rapport lectures de données inacceptables suivantes impact avec l&#39;impacteur NYU / Mascis. Le graphique du haut (A) et le haut ensemble de données (C) </strong&gt; illustrent une lecture d&#39;un très bon impact, avec des mesures de données de &quot;erreur%&quot; pour vitesse d&#39;impact de la tige, la hauteur initiale et le temps de démarrage, comme indiqué par la flèche rouge et souligné. Toutes les valeurs se situent bien dans la fenêtre d&#39;erreur acceptable. Inversement, le panneau inférieur montre les données produites par un impact incorrecte causée par la stabilisation inadéquate de la colonne vertébrale (B) et erreur lors de &quot;réduction à zéro&quot; de la tige du pendule et la pointe sur la surface de la moelle épinière, avant de fixer la hauteur de la tige d&#39;impacteur (C). Notez l&#39;erreur considérable indiqué pour la hauteur initiale et l&#39;heure de début de la chute de frappe, comme indiqué par la flèche rouge et souligner. Le logiciel fournit également un avertissement que l&#39;erreur a été détectée pour ces paramètres (en bas du panneau C).

La stabilisation vertébrale est nécessaire pour minimiser la variabilité, et pour produire cohérentes expérimentales blessures de la moelle épinière. En utilisant un appareil de stabilisation personnalisé en conjonction avec le dispositif de frappe NYU / Mascis, nous avons démontré ici le matériel et la procédure appropriée pour générer reproductibles cervicale (C5) blessures de la moelle épinière hémi-contondante chez des rats adultes.

Une nouvelle méthode de stabilisation vertébrale pour Produire contusion Traumatisme médullaire

Clinically-relevant animal cervical spinal cord injury (SCI) models are essential for developing and testing potential therapies; however, producing ...

L'objectif général de cette procédure est de produire une lésion de la moelle épinière uniforme, précise et reproductible à l'aide d'un stabilisateur vertébral nouveau, utilisable avec plusieurs dispositifs de lésion médullaire. Ce résultat est obtenu en disséquant soigneusement les tissus entourant les vertèbres cervicales, en prenant soin de minimiser l'hémorragie. La deuxième étape consiste à placer l'animal dans le dispositif de stabilisation et à immobiliser les vertèbres à l'aide des bras de stabilisation cannelés.Ensuite, réalisez une laminectomie afin d'exposer la région ciblée de la moelle épinière. La dernière étape consiste à fixer le dispositif de stabilisation en forme de U aux masses de NYU et à l'impacteur, puis à provoquer une lésion médullaire. Une lésion médullaire contusive, finalement constante et reproductible, est ainsi induite à l'aide du nouveau dispositif de stabilisation. Aujourd'hui, nous allons démontrer l'utilisation de notre dispositif chirurgical de stabilisation unique, utilisé conjointement avec l'impacteur médullaire de New York University, pour créer des lésions de la moelle épinière reproductibles et contrôlées.Nous utilisons ce dispositif de stabilisation dans notre laboratoire pour induire des lésions de la moelle épinière ainsi que pour des interventions chirurgicales de transplantation et de microinjection, et pour l'imagerie. Commencez cette procédure en nettoyant la surface chirurgicale avec de l'éthanol à 70 %. Placez un tapis chauffant sur la zone chirurgicale et allumez-le.Ensuite, placer les compresses stériles en coton et les instruments chirurgicaux stérilisés au autoclave dans la zone opératoire. Après avoir recouvert la surface d'un champ opératoire stérile, utiliser un stérilisateur à billes chauffantes pour la stérilisation des instruments entre les interventions chirurgicales. Nettoyer également le stabilisateur avec de l'éthanol à 70 % avant chaque intervention et entre chaque intervention.Endormez maintenant le rat par injection intrapéritonéale de xylazine-kétamine, et confirmez la profondeur de l'anesthésie à l'aide d'une stimulation par pincement des orteils. Appliquez ensuite une pommade protectrice sur les yeux de l'animal afin d'éviter le dessèchement cornéen. Ensuite, rasez le dos du rat, de la région thoracique moyenne jusqu'à la tête.Ensuite, retirez le pelage à l’aide d’un aspirateur muni d’un filtre HEPA. Puis appliquez de la Bétadine sur la zone rasée comme antiseptique chirurgical et nettoyez la zone avec des lingettes contenant de l’alcool isopropylique à 70 %. Injectez par voie sous-cutanée 0,01 à 0,05 milligramme par kilogramme de buprénorphine et cinq milligrammes par kilogramme de carprofène avant la procédure chirurgicale.La buprénorphine doit ensuite être administrée toutes les huit à douze heures et le carprofène une fois par jour pendant les quatre à sept premiers jours suivant l'intervention chirurgicale. Ensuite, placer le rat sur la zone chirurgicale préchauffée. Utiliser une lame de scalpel pour pratiquer une incision médiane de trois à quatre centimètres sur la peau, depuis la base de la tête jusqu'au milieu du thorax. Puis identifier la ligne médiane de l'aponévrose et des muscles sous-cutanés situés en avant de la glande hibernante au niveau du cou inférieur.Couper le muscle trapèze et les autres muscles le long de la ligne médiane afin de réduire l'hémorragie. Repérer le tissu adipeux sous-jacent aux muscles au niveau de la ligne médiane. Sectionner soigneusement les muscles paraspinaux.Séparez ensuite les couches musculaires à l’aide d’un petit rétracteur tissulaire jusqu’à atteindre le niveau de l’épineuse thoracique T2. Ensuite, sectionez le muscle rattaché à l’épineuse T2 et utilisez cette structure comme repère anatomique. Puis, retirez l’apophyse cartilagineuse de l’épineuse T2 afin d’améliorer la visibilité des vertèbres cervicales.Séparez latéralement les muscles para-épineux des apophyses épineuses et des lames vertébrales, tout en préservant le muscle recouvrant la lame de C3 afin d'éviter tout saignement. Ensuite, sectionnez les muscles recouvrant les lames vertébrales latéralement, en direction des articulations facetaires de chaque côté de la colonne vertébrale. Une fois les lames vertébrales exposées, placez l'animal dans le canal en forme de U du stabilisateur.Localisez la cinquième vertèbre cervicale en comptant les apophyses épineuses de manière rostrale à partir du repère de la deuxième vertèbre thoracique jusqu’à la première vertèbre thoracique, la septième et la sixième vertèbres cervicales, et enfin la cinquième vertèbre cervicale. Lors de cette procédure, positionnez les deux bras en acier inoxydable du stabilisateur afin de suspendre l’animal en plaçant les bords cannelés des bras sous les facettes latérales des vertèbres C5-C6. Après avoir fixé les bras avec les vertèbres en place, ajustez l’appareil de stabilisation pour garantir que la colonne vertébrale soit de niveau et centrée.Enfin, verrouillez les bras en resserrant les vis de blocage du stabilisateur. Ensuite, sectionez les ligaments situés entre les apophyses épineuses et les lames de C4-C5 et de C5-C6. Afin de localiser le bord de la lame de C5 à l’aide d’un micro-rongeur, retirez la moitié de la lame de C5 droite pour la lésion médullaire (SCI).Après la laminectomie, transporter l'animal avec le stabilisateur de la table chirurgicale vers le dispositif de lésion. Fixer l'animal conjointement avec le stabilisateur sur un support attaché au dispositif de lésion. Aligner précisément l'embout avec la cible de la moelle épinière à l'aide d'un manipulateur microscopique latéral sous forte augmentation.Localisez les zones d'entrée des racines dorsales C5 et C6 sur la surface dorsale exposée de la moelle épinière sans durrotomie. Orientez le poussoir vers le milieu des deux ZER identifiés et à mi-chemin entre la ligne médiane et le bord latéral de la moelle épinière. À l’aide d’un dispositif d’impact NYU doté d’une pointe de 2,5 millimètres de diamètre, provoquez une contusion hémilatérale C5 à l’aide d’une tige de 10 grammes lâchée d’une hauteur de 12,5 millimètres.Vérifiez visuellement la lésion par la contusion de la moelle épinière et contrôlez les paramètres de la lésion fournis par le logiciel NYU. Ensuite, suturez les muscles et les tissus mous, puis fermez l'incision cutanée à l’aide d’agrafes chirurgicales. Appliquez une pommade antibactérienne sur le site opératoire et administrez 5,0 millilitres de solution saline stérile à 0,9 % par voie sous-cutanée à l’animal pour assurer l’hydratation.Par la suite, placer l'animal dans un environnement thermorégulé avec de la nourriture humide fournie sur la litière et une bouteille d'eau munie d'un long bec verseur, placée au fond de la cage pour un accès facile. Assurer un suivi permettant une récupération adéquate avant de retourner l'animal dans sa cage d'origine. Cette figure illustre un enregistrement d'un très bon impact, avec des mesures de données exprimées en pourcentage d'erreur pour l'impact, la vitesse de la tige, la hauteur initiale et le temps de départ ; toutes les valeurs se situent bien dans la plage d'erreur acceptable.En revanche, ce panneau illustre des données produites par un impact inapproprié, causé par une stabilisation incorrecte de la colonne vertébrale et une erreur lors du réglage à zéro de la tige de l'impacteur sur la surface de la moelle épinière. Avant de régler la hauteur de la tige de l'impacteur, ce dispositif de stabilisation immobilise la moelle épinière. Toutefois, un avantage majeur de ce dispositif réside dans la mobilité qu’il permet, facilitant le transport de l’animal stabilisé d’une table chirurgicale vers une station de microinjection pour transplantation, puis vers un dispositif d’impact ou une station d’imagerie.La stabilisation des processus vertébraux latéraux permet de stabiliser les vertèbres spécifiques d'intérêt, ce qui conduit à une lésion de la moelle épinière plus reproductible. La cohérence et la reproductibilité constituent des facteurs essentiels pour les modèles expérimentaux de lésions médullaires afin de minimiser la variabilité et d'optimiser l'élucidation des effets thérapeutiques, éléments tous cruciaux pour une application en vue de la translation clinique et la découverte d'un traitement contre les lésions de la moelle épinière.

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Une façon fiable et reproductible pour produire un col de l'utérus blessures unilatérale moelle épinière aide de l'impacteur Infinite Horizon est décrite. La méthode tire parti d'un cadre personnalisé conçu et pince pour stabiliser la colonne vertébrale. La procédure normalisée et biomécanique des blessures paramètres entraînent des blessures suffisantes et durables.

Un modèle de contusion unilatérale des blessures moelle épinière cervicale aide de l&#39;impacteur Infinite Horizon

Source : Elzat, E. Y. Y., et al., Établissement d’un modèle de lésion de la moelle épinière chez la contusion chez la souris basé sur une technique mini-invasive. J. Vis. Exp. (2022). Cette vidéo montre la méthode d’induction d’une lésion de contusion au niveau de la moelle épinière T9 dans un modèle murin, à l’aide d’une plate-forme coaxiale de lésion de la moelle épinière. Un poids est lâché sur la moelle épinière au niveau T9 qui crée une contusion qui provoque immédiatement une décoloration...

Induction d’une contusion de la moelle épinière dans un modèle murin à l’aide d’une plate-forme coaxiale de lésion de la moelle épinière

Source : Lakshman, N., et al. Un test de la neurosphère pour évaluer l’activation des cellules souches neurales endogènes dans un modèle murin de lésion minime de la moelle épinière. J. Vis. Exp. (2018). Cette vidéo démontre l’activation et la migration des cellules souches neurales (NSC) dans un modèle de lésion de la moelle épinière chez la souris. Pour exposer la moelle épinière, une vertèbre de la région thoracique de la colonne vertébrale est retirée d’une souris anesthésiée. Une lésion...

 Un modèle minimal de lésion de la moelle épinière pour étudier l’activation et la migration des cellules souches neurales

Un modèle de contusion de la lésion médullaire sévère est décrite. Les étapes détaillées pré-opératoire, opératoires et post-opératoires sont décrits pour obtenir un modèle cohérent.

Un modèle de contusion de graves lésions de la moelle épinière chez les rats

Lésion de la moelle épinière est une condition traumatique qui entraîne une morbidité grave et une mortalité élevée. Dans ce travail, nous décrivons en détail un modèle de contusion de blessure de la moelle épinière chez la souris suivie d'une transplantation de cellules souches neurales.

Neural Transplantation de cellules souches dans la partie expérimentale Modèle contusion de la moelle épinière des blessures

Nous présentons un modèle de lésion de la moelle épinière à base de déplacement tissulaire qui peut provoquer une lésion de la moelle épinière persistante et cohérente chez les souris adultes.

Un modèle de lésion de la moelle épinière à base de déplacement tissulaire à base de tissus chez les souris

Nous introduisons une in vivo utilisant deux fluorochromes différents pour suivre la dynamiques changements vasculaires de la colonne vertébrale suite à une contusion médullaire chez les rats Sprague-Dawley adultes de méthode d’imagerie.

Un In Vivo Duo-color méthode d’imagerie vasculaire dynamique après contusion médullaire

Nous décrivons ici une nouvelle technique rapide de modélisation des lésions ouvertes de la moelle épinière chez le rat qui élimine la laminectomie. L’hémisection latérale est réalisée lors d’une visualisation au microscope. La technique est polyvalente et peut également être utilisée dans les régions cervicales, thoraciques et lombaires de la moelle épinière d’autres animaux.

Une technique d’hémisection latérale rapide et mini-invasive de la moelle épinière pour modéliser les lésions ouvertes de la moelle épinière chez le rat

Des techniques mini-invasives et un dispositif de laboratoire simple améliorent la reproductibilité du modèle de lésion de la moelle épinière en réduisant les dommages opératoires chez les animaux de laboratoire et en permettant le maintien de la morphologie anatomique. La méthode est intéressante car les résultats fiables et la procédure reproductible facilitent les recherches sur les mécanismes de réparation des maladies.

Établissement d’un modèle de lésion médullaire par contusion chez la souris basé sur une technique mini-invasive

Voici un nouveau dispositif automatisé de contusion des lésions de la moelle épinière pour les souris, qui peut produire avec précision des modèles de contusion des lésions de la moelle épinière à des degrés divers.

Impacteur automatisé pour un modèle de lésion contusive de la moelle épinière chez la souris

Le système de vis d’ajustement sagittal (SAS) a été largement utilisé pour les traumatismes thoraco-lombaires (TL). Des options percutanées et des dispositifs spécialisés de réduction des traumatismes sont également disponibles pour le système SAS. Nous décrivons une technique pour réduire les fractures en rafale TL à l’aide d’un système SAS et d’un dispositif de réduction des traumatismes nouvellement introduit.

Traitement mini-invasif de la fracture thoraco-lombaire à l’aide de vis d’alignement sagittal et d’un dispositif de réduction des traumatismes

Découvrez une méthode de stabilisation vertébrale pour produire des contusions traumatiques médullaires reproductibles chez le rat adulte. Cette technique améliore la précision expérimentale en neurosciences.

Une nouvelle méthode de stabilisation vertébrale pour Produire contusion Traumatisme médullaire

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