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Caractérisation des progéniteurs thymique décantation dans l'embryon de souris Utilisation In...
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Developmental Biology
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JoVE Journal Developmental Biology
Characterization of Thymic Settling Progenitors in the Mouse Embryo Using In Vivo and In Vitro Assays

Caractérisation des progéniteurs thymique décantation dans l'embryon de souris Utilisation In Vivo Et In Vitro Essais

Full Text
8,828 Views
08:56 min
June 9, 2015

DOI: 10.3791/52795-v

Cyrille Ramond1,3, Antonio Bandeira2, Claire Berthault3, Pablo Pereira3, Ana Cumano3, Odile Burlen-Defranoux3

1Research Center Growth and Signaling, INSERM U845,Institut Cochin, 2Unit for Biology of Lymphocyte Populations, Immunology Department, Institut Pasteur and CIMI, Unity of Treg Biology and Therapy,University of Pierre & Marie Curie, 3Unit for Lymphopoiesis, Immunology Department, INSERM U668,University Paris Diderot, Sorbonne Paris Cité, Cellule Pasteur, Institut Pasteur

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Overview

This article describes a methodology to analyze thymic settling progenitors and their T cell progeny through in vivo and in vitro techniques. The study focuses on the kinetics of generation, phenotype, and numbers of T cells produced from these progenitors.

Key Study Components

Area of Science

  • Immunology
  • Cell Biology
  • Developmental Biology

Background

  • Thymic settling progenitors play a crucial role in T cell development.
  • Understanding their kinetics and differentiation is essential for immunological research.
  • The study utilizes mouse embryos to explore these progenitors.
  • Existing methods often lack the ability to fully mature T cells from defined progenitors.

Purpose of Study

  • To characterize the thymic settling progenitors.
  • To analyze the generation and phenotype of their T cell progeny.
  • To improve upon existing in vitro T cell culture methods.

Methods Used

  • Isolation of thymic lobes from E 13, E 14, and E 18 mouse embryos.
  • Irradiation of E 14 thymic lobes followed by colonization with flow sorted E 13 or E 18 cells.
  • Grafting of colonized lobes under the kidney capsule of adult CD three knockout mice.
  • Flow cytometry to assess the presence of T cell progeny in the blood of chimeric animals.

Main Results

  • The methodology allows for full T-cell maturation from defined progenitors.
  • Successful evaluation of differentiation and function of thymic progenitors.
  • Demonstrated presence of E 13 and E 18 progeny in the chimeric mice.
  • Enhanced understanding of T cell development dynamics.

Conclusions

  • This technique provides a novel approach to study T cell maturation.
  • It bridges in vitro and in vivo methodologies for comprehensive analysis.
  • The findings contribute to the understanding of thymic progenitor biology.

Frequently Asked Questions

What are thymic settling progenitors?
Thymic settling progenitors are cells that migrate to the thymus and give rise to T cells.
Why is flow cytometry used in this study?
Flow cytometry is used to assess the presence and characteristics of T cell progeny in the blood.
What is the significance of using E 13 and E 18 embryos?
These embryonic stages are critical for studying the development and maturation of thymic progenitors.
How does this method improve upon existing techniques?
It combines in vitro and in vivo approaches to allow full maturation of T cells from defined progenitors.
What are the implications of this research?
The findings may enhance our understanding of T cell development and potential therapeutic applications.
Can this method be applied to other types of progenitors?
While this study focuses on thymic progenitors, the methodology could be adapted for other cell types.

Cet article décrit une méthodologie in vivo et in vitro pour caractériser les progéniteurs de sédimentation thymique par l’analyse de la cinétique de génération, du phénotype et du nombre de leur descendance de lymphocytes T.

L’objectif général de cette procédure est d’analyser la cinétique phénotypique de génération et le nombre de lymphocytes T produits par les progéniteurs thymiques E 13 ou E 18. Pour ce faire, on isole d’abord les lobes thymiques d’embryons de souris E 13, E 14 et E 18. Dans un second temps, les lobes thymiques E 14 sont irradiés puis colonisés par un flux trié E 13 ou E 18 cellules pendant 48 heures dans une goutte suspendue.

Dans la dernière étape, les lobes colonisés sont greffés sous la capsule rénale de souris adultes CD 3 knock-out. En fin de compte, la cytométrie en flux peut être utilisée pour évaluer la présence de la descendance progénitrice de sédimentation thymique E 13 et E 18 dans le sang des animaux chimériques. Le principal avantage de cette technique par rapport à nos méthodes existantes, comme la culture in vitro de cellules T sur des cellules in-so, est que cette technique combine les méthodes qui permettent une maturation complète des cellules T à partir de progéniteurs définis dans un essai tridimensionnel avec la greffe de cultures d’organes thymiques chez des souris receveuses intactes, permettant l’évaluation de la différenciation et de la fonction des progéniteurs sliques thymiques et de la descendance.

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