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DOI: 10.3791/52795-v
Cyrille Ramond1,3, Antonio Bandeira2, Claire Berthault3, Pablo Pereira3, Ana Cumano3, Odile Burlen-Defranoux3
1Research Center Growth and Signaling, INSERM U845,Institut Cochin, 2Unit for Biology of Lymphocyte Populations, Immunology Department, Institut Pasteur and CIMI, Unity of Treg Biology and Therapy,University of Pierre & Marie Curie, 3Unit for Lymphopoiesis, Immunology Department, INSERM U668,University Paris Diderot, Sorbonne Paris Cité, Cellule Pasteur, Institut Pasteur
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This article describes a methodology to analyze thymic settling progenitors and their T cell progeny through in vivo and in vitro techniques. The study focuses on the kinetics of generation, phenotype, and numbers of T cells produced from these progenitors.
Cet article décrit une méthodologie in vivo et in vitro pour caractériser les progéniteurs de sédimentation thymique par l’analyse de la cinétique de génération, du phénotype et du nombre de leur descendance de lymphocytes T.
L’objectif général de cette procédure est d’analyser la cinétique phénotypique de génération et le nombre de lymphocytes T produits par les progéniteurs thymiques E 13 ou E 18. Pour ce faire, on isole d’abord les lobes thymiques d’embryons de souris E 13, E 14 et E 18. Dans un second temps, les lobes thymiques E 14 sont irradiés puis colonisés par un flux trié E 13 ou E 18 cellules pendant 48 heures dans une goutte suspendue.
Dans la dernière étape, les lobes colonisés sont greffés sous la capsule rénale de souris adultes CD 3 knock-out. En fin de compte, la cytométrie en flux peut être utilisée pour évaluer la présence de la descendance progénitrice de sédimentation thymique E 13 et E 18 dans le sang des animaux chimériques. Le principal avantage de cette technique par rapport à nos méthodes existantes, comme la culture in vitro de cellules T sur des cellules in-so, est que cette technique combine les méthodes qui permettent une maturation complète des cellules T à partir de progéniteurs définis dans un essai tridimensionnel avec la greffe de cultures d’organes thymiques chez des souris receveuses intactes, permettant l’évaluation de la différenciation et de la fonction des progéniteurs sliques thymiques et de la descendance.
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