Intra-iliaque Artère injection pour la modélisation efficace et sélective des métastases osseuses Microscopique

Ce manuscrit présente en détail la procédure d’injection intra-iliaque dans l’artère iliaque (AII), une technique permettant d’administrer des cellules cancéreuses spécifiquement aux tissus des membres postérieurs, y compris les os, afin d’établir des métastases osseuses expérimentales. Bien qu’initialement établi avec des modèles de tumeurs mammaires, ce protocole peut être facilement étendu à d’autres types de cancer.

L’objectif global de cette procédure est d’établir des métastases osseuses expérimentales en délivrant des cellules cancéreuses directement aux tissus des membres postérieurs, y compris les os, par injection intra-iliaque. Cette méthode peut donc nous aider à répondre aux questions clés sur la colonisation osseuse du cancer du sein, en particulier dans la phase précoce de ce processus, comment les cellules cancéreuses du sein interagissent avec les cellules du microenvironnement dans l’os. Nous avons fait une injection dans l’artère iliaque aujourd’hui.

Le principal avantage de cette technique est qu’elle permet d’établir de manière efficace et sélective un modèle expérimental de métastase osseuse microscopique pour divers types de cancer sans causer de lésions tissulaires locales. En général, les personnes qui ne connaissent pas cette méthode auront du mal à trouver une injection précise, la position d’injection de l’artère iliaque sur le microscope, peut prendre de la pratique pour atteindre un taux de réussite d’injection supérieur à quatre-vingt-dix pour cent. Commencez par confirmer le niveau approprié de sédation par pincement des orteils d’une souris de vingt grammes âgée de cinq à six semaines.

Après avoir appliqué la pommade oculaire, essuyez plusieurs fois la zone rasée de l’aine droite avec des cotons-tiges séquentiels, stériles et imbibés d’éthanol isopropylique, suivis d’un gommage chirurgical à la bétadine. Ensuite, couvrez toute la souris avec un rideau stérile. Ensuite, utilisez une lame de scalpel stérile en acier au carbone numéro dix et un manche numéro trois pour faire une incision cutanée d’un à 1,2 centimètre entre le quatrième et le cinquième mamelon dans la partie inférieure droite de l’abdomen.

Et transférez l’animal sous un microscope de dissection de paillasse standard. Sous l’objectif 4X, insérez des pinces de séparation émoussées dans l’incision entre le tissu adipeux et le péritoine, et poussez les tissus vers l’extérieur des deux côtés pour révéler les vaisseaux iliaques et les nerfs. Ensuite, utilisez des pinces droites et fines pour percer le tissu conjonctif entre les vaisseaux et le nerf le plus proche des vaisseaux.

Ensuite, faites glisser la pince coudée à travers le tissu conjonctif et sous les vaisseaux iliaques, tout en insérant la pince droite dans les tissus conjonctifs de l’autre côté des vaisseaux pour guider la pince inclinée à travers le tissu. Nous vous recommandons de séparer et de soulever le rebord ilial et l’artère comme un faisceau pour cette étape. Bien que les cellules tumorales ne soient injectées que dans l’artère, l’isolement des deux vaisseaux ensemble permet d’économiser du temps et des efforts.

Une fois que la pince coudée est en place, séparez davantage la veine iliaque et l’artère des tissus environnants, en maintenant les vaisseaux au-dessus de la pince inclinée pendant la dissection. Lorsque les vaisseaux sont dégagés, utilisez la pince droite pour appliquer la pointe d’une suture en soie 4-0 à la pince coudée et tirez la suture lentement et doucement sous les vaisseaux. Les deux vaisseaux de la veine et de l’artère iliaques doivent alors être maintenus par la suture.

Lorsque les vaisseaux sont prêts, pipetez les cellules tumorales de haut en bas plusieurs fois pour les remettre en suspension dans une solution unicellulaire et briser les amas de pommeaux. Ensuite, aspirez 100 microlitres de cellules par souris dans une seringue à insuline de calibre 31. Maintenant, glissez la pince coudée sous les vaisseaux en utilisant la suture comme guide, et ouvrez la pince de manière à ce que les vaisseaux reposent doucement sur les pointes.

De l’autre main, insérez la pointe de l’aiguille côté biseau vers le haut dans la lumière de la section de l’artère entre les pointes des pinces. Appuyez lentement sur le piston pour injecter les cellules. La suspension cellulaire évacuera le sang à travers le vaisseau.

Lorsque toutes les cellules ont été distribuées, retirez doucement l’aiguille, en gardant les vaisseaux surélevés sur la pince pour éviter les saignements. Ensuite, retirez la suture. Enfin, retirez rapidement la pince et appuyez un coton-tige sur l’incision pendant cinq à 10 minutes pour arrêter le saignement.

Ici, une image bioluminescente représentative de l’animal entier après injection intra-artérielle iliaque de cinq fois 10 à la cinquième cellule cancéreuse du sein MCF-7 marquée à la luciférine GFP suivie d’une administration de d-luciférine par injection rétro-orbitaire dans le sinus est présentée. Au 14e jour après l’injection, un fort signal de bioluminescence a été obtenu à partir de l’os postérieur injecté dans l’artère intra-iliaque, mais pas à partir de l’os témoin controlatéral, confirmant la localisation spécifique des cellules injectées. La coupe d’une coloration H&E des os porteurs de tumeurs a également mis en évidence une population cellulaire compacte, semblable à des pavés, avec de gros noyaux indiquant des lésions métastatiques microscopiques de MCF-7 dans le tissu osseux 14 jours après l’injection intra-iliaque dans l’artère iliaque.

De plus, la coloration immunofluorescente des sections osseuses a également révélé un mélange des cellules MCF-7 avec des ostéoblastes et des préostéoblastes. Une fois maîtrisée, cette technique peut être réalisée en dix à quinze minutes. En suivant ces procédures, vous pouvez utiliser d’autres méthodes pour répondre à des questions supplémentaires.

Par exemple, nous pouvons utiliser RNA-Seq pour profiler les cellules du microenvironnement dans la niche des métastases et les comparer aux cellules normales. Cette technique permet aux chercheurs sur le cancer du sein et sur le cancer de la prostate d’étudier les micrométastases osseuses chez les animaux. Après avoir regardé cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la façon d’établir un modèle de métastases osseuses du cancer du sein par injection intra-iliaque.

Veuillez prendre les précautions appropriées, car travailler avec de la kétamine et de la xylazine peut être extrêmement dangereux.