Une méthode alternative et Validé Injection pour l'accès à l'espace sous-rétinien via Une approche transclérale Postérieur

L’objectif global de cette étude est de décrire une nouvelle technique d’injection sous-rétinienne qui peut être utilisée pour cibler des vecteurs viraux, des agents pharmacologiques ou induire des cellules souches pluripotentes dans l’espace sous-rétinien chez la souris. Cette méthode peut répondre à des questions clés dans les domaines de la science de la vision et de l’ophtalmologie, telles que l’évaluation de l’efficacité de nouvelles interventions thérapeutiques pour les dégénérescences rétiniennes. Le principal avantage de cette technique est qu’elle peut être utilisée pour administrer du matériel dans l’espace sous-rétinien, avec une efficacité élevée, des dommages minimes et une récupération rapide de la structure et de la fonction rétiniennes.

Sachin P, un technicien de mon laboratoire, fera la démonstration de la procédure. Pour commencer cette procédure, coupez les moustaches d’une souris anesthésiée pour faciliter la visualisation et maintenez la température corporelle de l’animal à 37 degrés Celsius avec un coussin d’eau en circulation. Ensuite, dilatez ses pupilles avec 2,5 % de gouttes ophtalmiques à base de phényléphrine.

Ensuite, appliquez des gouttes ophtalmiques à base de méthylcellulose pour prévenir la sécheresse et minimiser les cataractes transitoires induites par l’anesthésie. Stérilisez les instruments avant l’opération. Ensuite, préparez la fluorescéine diluée dans une enceinte de biosécurité.

Remplissez la seringue avec la quantité appropriée de fluorescéine. Ensuite, effectuez un pincement des orteils pour vous assurer que l’animal est profondément anesthésié et positionnez la souris de manière à ce que l’œil à injecter soit orienté vers le haut et clairement visible dans le microscope de dissection. Pincez doucement la conjonctive temporale à l’aide d’une paire de pinces à pointe fine.

Ensuite, faites une incision circonférentielle d’environ 90 degrés à l’aide des ciseaux Vannas incurvés. Répétez la procédure sur la capsule de Tenon sous-jacente. Après cela, réséquez le problème conjonctif environnant avec des pinces à pointe fine, tout en faisant pivoter le globe par voie nasale.

Dirigez-vous vers le site d’injection à environ 0,5 millimètre du nerf optique et prenez grand soin de ne pas perturber le sinus rétro-orbitaire. Une étape critique consiste à exposer le site d’injection qui nécessite une rotation de l’œil, sans endommager l’œil lui-même, ni les structures associées, en évitant notamment d’endommager le sac sanguin orbitaire. Dans cette procédure, faites une petite incision au niveau de la sclérotique du site d’injection, en grattant doucement l’œilleton avec une lame ophtalmique à 22,5 degrés.

Cette incision doit être juste assez grande pour permettre à la pointe de l’aiguille de passer à travers la sclère. Ensuite, insérez l’aiguille biseautée de calibre 33 dans la sclérotomie avec le biseau tourné et incliné parallèlement à la rétine. Injectez la quantité souhaitée de fluorescéine à 0,01 % en appuyant lentement sur le piston avec une pression uniforme.

Notez que lorsque l’aiguille se trouve dans l’espace sous-rétinien, une légère résistance se fera sentir lors de la pression sur le piston. Il n’y aura pas de résistance si l’aiguille perfore la rétine, mais une résistance élevée si l’aiguille ne pénètre pas dans la sclérotique ou l’EPR. Une autre étape critique est l’injection ciblant l’espace sous-rétinien.

Cela doit être accompli sans pénétrer à travers la rétine neurosensorielle, jusqu’à la cavité vitrée. Attendez quelques secondes avant de retirer l’aiguille, afin de minimiser le refoulement. Par la suite, rincez l’œil avec une solution saline stérile et assurez-vous que l’œil a pivoté pour revenir à sa position normale.

Ensuite, appliquez une couche épaisse de crème ophtalmique antibiotique triple sur la surface cornéenne de l’œil injecté. Ensuite, placez la souris dans une cage solitaire propre pour la récupérer. Surveillez sa respiration et sa température pendant la récupération de l’anesthésie, et vérifiez qu’il peut maintenir une décubitus sternal.

Effectuer une surveillance et un traitement postopératoires supplémentaires appropriés, y compris une injection sous-cutanée de carprofène, pour la gestion de la douleur post-chirurgicale. Voici une reconstruction 3D de la bulle en forme de dôme au site d’injection. La bulle en forme de dôme est ensuite remplie d’un blanc dense pour montrer l’étendue et les marges du décollement de la rétine.

Les coupes transversales rétiniennes de l’OCT sont visibles en blanc, tandis que l’espace rempli de liquide au niveau de l’EPR et des photorécepteurs apparaît noir. Et dans cette figure, les scintigraphies OCTB représentatives au site du décollement maximal de la rétine sont montrées pour la pré-injection, 10 minutes après l’injection et quatre semaines après l’injection. Cette image montre la formation et la résolution d’une bulle plate à partir d’une injection de 0,3 microlitre.

Et cette image montre la formation et la résolution d’une bulle bombée à partir d’une injection de 0,5 microlitre, tandis que cette image montre la formation et la résolution d’une bulle bombée à partir d’une injection d’un microlitre. Enfin, voici un exemple de cicatrisation choroïdienne sévère et d’amincissement de la rétine au site d’injection. Les rétines conservent une fonction normale après la résolution des bulles.

À neuf intensités d’éclairage, les formes d’onde des réponses médiées par les bâtonnets scotopiques sont montrées pour la pré-injection et quatre semaines après l’injection pour les injections de 0,3 microlitre, 0,5 microlitre et 1 microlitre. Une fois maîtrisée, cette technique peut être réalisée en 10 à 15 minutes par œil. Lors de la tentative de cette procédure, il est important d’évaluer la santé des yeux avant de commencer.

Excluez les yeux avec des opacités cornéennes ou du cristallin, ou les yeux enfoncés pour lesquels cette procédure serait très difficile. Suite à cette procédure, d’autres méthodes telles que l’OCT et l’imagerie du fond d’œil peuvent être réalisées afin d’évaluer la qualité de l’injection.