Vein Interposition Modèle: un modèle approprié pour étudier Bypass Graft Patency

L’objectif global de cette procédure est d’étudier la perméabilité du greffon de pontage dans un modèle d’interposition de veine de rat. Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans le domaine de la chirurgie de pontage, telles que le chemin sous-jacent des processus biologiques et physiologiques lors de l’occlusion du pontage. Le principal avantage de cette technique est que l’intervention chirurgicale est facile et rapide, ce qui peut être utilisé pour étudier de nouvelles thérapies et voies respiratoires in vivo.

La démonstration de la technique sera assurée par Grigol Tediashvili, un microchirurgien de notre laboratoire. Avant l’opération, vérifiez la profondeur suffisante de l’anesthésie en pinçant les pattes arrière du rat et en vérifiant l’absence de réflexes. Ensuite, appliquez un peu de pommade vétérinaire sur les yeux pour prévenir la sécheresse sous anesthésie.

Ensuite, écartez les pattes arrière et fixez leur position à l’aide de ruban adhésif. Ensuite, rasez les poils inguinaux avec une tondeuse à cheveux, puis désinfectez largement la zone avec de la povidone iodée suivie de 80 % d’alcool. Répétez ces gommages alternés trois fois au total.

Maintenant, au microscope, effectuez une incision verticale le long de la linea inguinalis. Ensuite, à l’aide de deux pinces, séparez doucement les tissus sous-cutanés et exposez la veine épigastrique superficielle jusqu’à son origine sur la veine fémorale. Faites-le très soigneusement, car la veine est fragile.

Ensuite, arrêtez le flux sanguin dans la veine épigastrique superficielle à l’aide de deux pinces. Maintenant, récoltez un segment de la veine. Soulevez délicatement la veine isolée et coupez le vaisseau à l’aide de micro-ciseaux.

Ensuite, placez le segment de veine sur de la gaze stérile. Là, glissez soigneusement une aiguille de calibre 30 dans une extrémité et rincez la veine avec de l’héparine. Ensuite, transférez la veine dans 1 % de lidocaïne et gardez-la sur de la glace pour éviter les spasmes.

Maintenant, euthanasiez le rat donneur en augmentant l’anesthésie à 5 % d’isoflurane. Ensuite, en préparation des anastamoses, préparez le rat receveur de la même manière que le rat donneur jusqu’à l’étape de rasage. Après deux à trois minutes d’isoflurane à 5 %, ouvrez l’abdomen du rat donneur le long de la linea alba, coupez à travers le diaphragme et retirez le cœur pour arrêter la circulation.

Continuez à préparer le rat receveur pour la chirurgie. Rasez le côté médial des jambes avec une tondeuse à cheveux et désinfectez la peau avec trois gommages alternés de povidone iodé et d’éthanol à 80 %. Avant de poursuivre, effectuez un autre pincement des orteils pour surveiller l’anesthésie.

Maintenant, effectuez une incision fémorale médiane du genou au pli inguinal. Au microscope, à l’aide de deux pinces, séparez l’artère fémorale de son environnement. Ensuite, utilisez deux micro-pinces pour arrêter le flux sanguin, en plaçant la pince proximale en premier.

Ensuite, découpez un court segment de l’artère fémorale clampée et jetez-le. Raccourcissez le moignon artériel restant pour laisser un espace d’un à deux millimètres plus grand que la greffe veineuse. Ensuite, rincez le moignon artériel avec de l’héparine à l’aide d’une aiguille de calibre 30.

Si l’adventice dépasse légèrement de la souche du vaisseau, utilisez une pince pour tirer légèrement l’adventice sur l’extrémité du vaisseau, puis retirez un morceau d’adventice. Maintenant, placez le segment de veine récolté entre les moignons artériels dans la bonne orientation et ajustez la taille de l’espace pour un bon ajustement. Maintenant, effectuez d’abord l’anastomose proximale à l’aide d’une suture prolène 10-0.

Commencez par suturer chaque côté latéral, puis ajoutez trois autres sutures sur le côté ventral. Terminez par trois points de suture sur le côté dorsal. Ensuite, connectez les vaisseaux distaux à l’aide de la même technique, en commençant par une suture sur chaque côté latéral, suivie de trois sutures sur le côté ventral, puis en terminant sur le côté dorsal.

Une fois les anastomoses terminées, chargez deux seringues d’un millilitre avec les composants de la colle de fibrine. Ensuite, soulevez soigneusement le greffon avec une pince et appliquez environ 100 microlitres du composant un sous le greffon, suivis de 100 microlitres du composant deux. Les deux composants doivent toujours être ajoutés dans les mêmes volumes.

Maintenant, remettez le greffon dans sa position et appliquez 100 microlitres de chaque composant sur le greffon pour couvrir complètement le greffon et l’anastomose. Cela permet d’éviter l’insuffisance anastomotique et la distension excessive de la greffe veineuse. Maintenant, ouvrez soigneusement les pinces en commençant par la pince distale.

Ensuite, confirmez la réussite de l’intervention chirurgicale en vérifiant la présence d’un pouls visible dans la veine transplantée et l’artère distale du greffon. Avant de fermer la peau, retirez tout excès de colle qui pourrait entraver la fermeture. Ensuite, fermez les couches de la peau à l’aide de sutures prolènes 5-0.

Avant que le rat ne se réveille, injectez quatre à cinq milligrammes de carprofène par kilogramme par voie sous-cutanée. Gardez un œil sur l’animal jusqu’à ce qu’il ait repris une conscience suffisante pour maintenir le décubitus sternal. Ensuite, donnez au rat une cage domestique sans autres animaux.

Pendant les trois prochains jours, fournissez du métamizole dans l’eau de boisson et vérifiez quotidiennement le rétablissement du rat. Une fois complètement rétabli, le rat peut être hébergé avec d’autres rats. Les animaux se remettent bien de l’opération et ont montré une excellente condition physique après l’opération.

L’intégration réussie de la veine dans l’artère fémorale et la perméabilité du greffon après la transplantation ont été confirmées de manière non invasive à l’aide de l’échographie duplex. En transplantant la veine d’un rat tiède positif à un rat tiède négatif, l’imagerie par bioluminescence a été utilisée pour surveiller la présence du greffon. Il a été constaté que l’hyperplasie myointimale se développe progressivement dans le greffon au fil du temps.

La coloration histologique au trichrome de Masson met en évidence la formation de myointimales à l’intérieur de la lame élastique interne. Pour confirmer que le modèle reproduit la dynamique de l’hyperplasie myointimale, l’oblitération luminale a été mesurée. Une perte progressive de perméabilité du greffon a été notée de sept à 28 jours après la chirurgie, ce qui correspond bien au modèle.

Une fois maîtrisée, cette technique peut être réalisée en 20 minutes si elle est exécutée correctement. Merci d’avoir regardé, et bonne chance dans vos expériences.