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DOI: 10.3791/55653-v
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Nous présentons une solution logicielle pour le suivi semi automatisé de la concentration relative de protéines sur toute la longueur des protrusions cellulaires dynamiques.
L’objectif global de ce logiciel d’analyse d’images est l’analyse parallèle de la dynamique de protrusion et de la concentration relative en protéines sur toute la longueur du filopodial. Cette méthode peut vraiment nous aider à comprendre des questions clés en biologie cellulaire, en particulier les protéines individuelles impliquées dans l’extension et la rétraction des filopodes. Le principal avantage de la technique est que l’algorithme de suivi de forme adaptatif fourni permet une évaluation quantitative de la dynamique de la saillie et la localisation des protéines résolue dans l’espace.
Pour commencer, cultivez des neurones, des cellules HeLa ou COS, dans un milieu supplémenté comme détaillé dans le protocole de texte. Une fois que la confluence de 40 % est atteinte, transvectez les cellules avec les constructions de votre choix, à l’aide d’un réactif de transvection selon les instructions du fabricant. Conservez les cellules transvectées dans un incubateur à 37 degrés Celsius et 5 % de CO2 pendant 15 à 18 heures.
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