Ablation stereotactically guidée du Rat Cortex auditif et localisation de la lésion dans le cerveau

L’objectif général de cette procédure est de décrire l’ablation stéréotaxique du cortex auditif et l’utilisation d’une carte de coordonnées pour localiser la lésion sur une image de la surface du cerveau. Cette méthode peut aider les chercheurs en neurosciences auditives à aborder le rôle des cortex dans la voie de la perception du son. Ainsi que les mécanismes et la plasticité positionnelle de la ligne.

Le principal avantage de cette technique est qu’elle permet l’exposition chirurgicale et l’ablation du cortex auditif en utilisant des méthodes de base qui peuvent être adaptées par n’importe quel investigateur. Cette méthode peut donc être utile dans le domaine des neurosciences auditives, elle peut également être appliquée dans d’autres systèmes tels que le visuel et le somatosensoriel. Cette méthode peut également être utilisée pour étudier les défauts que l’ablation unilatérale du cortex auditif exerce dans d’autres zones corticales.

La démonstration visuelle de cette méthode est essentielle, car l’identification et la traduction correctes des coordonnées stéréotaxiques dans l’os temporal sont essentielles pour localiser avec précision le cortex auditif. Pour commencer cette procédure, placez le rat anesthésié sur un coussin chauffant pour maintenir sa température corporelle. Stabilisez ensuite la tête de l’animal dans un cadre stéréotaxique à l’aide de deux barres d’oreille et d’une barre de morsure.

Rasez le cuir chevelu et désinfectez la zone chirurgicale avec de la povidone iodée. À l’aide d’un scalpel, faites une incision le long de la ligne médiane pour exposer le crâne et rétracter le périoste recouvrant la surface du crâne. Après cela, utilisez un coton-tige stérile pour enlever doucement tout sang recouvrant la surface du crâne.

Afin de visualiser Bregma, Lambda et la ligne interaurale, faites une incision dans le muscle temporal près de son insertion dorsale sur le crâne avec un scalpel. Après cela, tirez le muscle à l’aide d’une aiguille et d’un matériau de suture et fixez le matériau de suture au cadre stéréotaxique afin d’exposer l’os temporal. Abaissez lentement une aiguille droite stérile jusqu’à ce qu’elle soit juste au-dessus de la surface du crâne, de sorte que la pointe de l’aiguille soit réglée sur le zéro interaural.

Définissez ce point sur zéro. Ensuite, ciblez l’AC à l’aide de quatre points. Abaissez ensuite l’aiguille à droite au-dessus de l’os temporal pour visualiser chacun de ces quatre points.

Marquez les points avec un marqueur sur l’os temporal et reliez-les afin de dessiner un rectangle. Le rectangle servira de guide pour ouvrir une fenêtre dans l’os. Dans cette procédure, ouvrez la fenêtre à l’aide d’une perceuse électrique et d’un petit foret.

Percez le périmètre du rectangle à 8 000 tr/min jusqu’à ce que l’os cède. Refroidissez la surface de forage en la rinçant avec une solution saline stérile froide pour éviter d’endommager les structures sous-corticales. Lorsque l’os cède, veillez à ne pas percer le cerveau.

Lorsque les bords sont détachés, tirez l’os de couverture avec une pince fine et rangez-le dans une solution saline froide et stérile. À l’aide d’un microscope chirurgical, coupez doucement les méninges à l’aide d’un couteau microchirurgical et retirez-les à l’aide de deux pinces à pointe fine. En cas de saignement, rincez le site chirurgical avec une solution saline stérile et froide.

Ensuite, aspirez doucement le CA à l’aide d’un dispositif d’aspiration chirurgicale couplé à une aiguille stérile à pointe émoussée de calibre 20. Aspirez uniquement les six couches corticales, et non la substance blanche sous-jacente. Ce point est critique et doit être effectué avec beaucoup de soin.

Lorsque l’aspiration est terminée, couvrez le site chirurgical avec l’os extrait et appliquez une gaze hémostatique résorbable. Laissez le muscle temporal retrouver sa position d’origine, puis suturez la peau à l’aide de pinces à plaie. Après cela, appliquez une pommade antibiotique sur la plaie.

Par la suite, injectez de la buprénorphine par voie sous-cutanée dans le dos du rat comme analgésique, une heure et huit heures après la fin de la chirurgie. Gardez l’animal sur le coussin chauffant jusqu’à ce qu’il se réveille et retournez-le dans sa cage d’hébergement pour qu’il se rétablisse. Lorsque la recherche effectuée avec le rat ablaté par AC est terminée, anesthésiez-le en phase terminale par injection intrapéritonéale de 0,1 millilitre de pentobarbital sodique.

Après avoir effectué une profusion intracardiaque de solution de Ringer et de formaldéhyde, retirez la peau et le muscle de la tête pour exposer le crâne. À l’aide de ciseaux Spencer, faites une coupe transversale dans l’os orbitaire. Après cela, retirez l’arrière du crâne et utilisez des rongeurs pour couper le long des bords supérieurs du crâne afin d’exposer le cerveau.

Attention à ne pas endommager le cerveau. Une fois le cerveau exposé, retirez soigneusement la dure-mère à l’aide d’une pince à pointes fines. Utilisez un doigt pour ramasser doucement sous et élever le cerveau.

Ensuite, soulevez le cerveau et coupez les nerfs jusqu’à ce qu’il soit libre. Ensuite, plongez le cerveau dans une solution de formaldéhyde et conservez-le à quatre degrés Celsius pendant 24 heures. Après la post-fixation, placez soigneusement le cerveau dans une matrice cérébrale de rat sagittale, exposant la surface latérale du cerveau.

Placez une caméra à 21 centimètres au-dessus de la surface du cortex à l’aide d’un support de caméra. Ensuite, sélectionnez le mode de prise de vue super-macro et prenez une photo de la surface du cerveau. Ensuite, à l’aide d’un programme d’édition d’images, ouvrez les images et réduisez-les de 50 %Identifiez les références Bregma, Lambda et zéro interaural et marquez leur position dans les images.

Dessinez le contour de l’ablation sur l’image latérale du cerveau. Importez la carte de coordonnées où se trouvent les régions primaire et secondaire du cortex auditif dans le fichier du programme d’édition. Cliquez ensuite sur la carte et faites-la glisser pour la superposer à la photographie latérale du cerveau ablaté.

Faites coïncider les références Bregma et Lambda de la carte de coordonnées avec les références Bregma et IA identifiées sur l’image du cerveau latéral. Par la suite, utilisez la fissure rhinale comme référence pour ajuster l’image du cerveau à la carte et les faire coïncider. Il est important de confirmer que la substance blanche est intacte.

Cela peut être fait par immunomarquage initial d’une section en série du cerveau. Pour démontrer l’efficacité de notre protocole, nous avons maintenu les trois rats ablatés par AC pendant une semaine, puis nous avons collecté les cochlées pour étudier les changements dans l’expression des sous-unités AMPA les plus pertinentes présentes dans la cochlée adulte, GluA2 et GluA3 par qPCR. La comparaison entre les transcrits de rats ablatés par AC et d’animaux témoins fictifs a montré une régulation à la baisse pour GluA2 et une régulation à la hausse pour GluA3 dans les deux cochlées, ce qui est en accord avec notre étude précédente.

Lors de la tentative de chirurgie, il est important de se rappeler trois choses : percer l’os temporal à la vitesse la plus basse avec une pression minimale, retirer soigneusement les méninges pour éviter de briser les vaisseaux sanguins et limiter l’aspiration à la matière grise. Une fois maîtrisée, l’exposition chirurgicale et l’ablation du cortex auditif peuvent être réalisées en 45 minutes si elle est réalisée correctement. À la suite de cette procédure, des méthodes physiologiques, comportementales et/ou immunocytochimiques peuvent être effectuées afin de répondre à des questions supplémentaires, comme comment l’absence de cortex auditif affecte le fonctionnement d’autres systèmes sensoriels.