Using High Content Imaging to Quantify Target Engagement in Adherent Cells

Hanna Axelsson; Helena Almqvist; Brinton Seashore-Ludlow

doi:10.3791/58670

À l’aide de contenu élevé d’imagerie afin de quantifier l’Engagement de cibles en cellules adhére...

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Biochemistry

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Using High Content Imaging to Quantify Target Engagement in Adherent Cells

À l’aide de contenu élevé d’imagerie afin de quantifier l’Engagement de cibles en cellules adhérentes

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07:23 min

November 29, 2018

DOI: 10.3791/58670-v

Hanna Axelsson^1,2, Helena Almqvist^1,2, Brinton Seashore-Ludlow^1,3

¹Chemical Biology Consortium Sweden, Science for Life Laboratory,Karolinska Institutet, Solna, ²Department of Medical Biochemistry and Biophysics,Karolinska Institutet, Solna, ³Science for Life Laboratory, Department of Oncology-Pathology,Karolinska Institutet, Stockholm

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Overview

This article details a protocol for measuring drug-target engagement using high content imaging in a microplate-compatible adaptation of the cellular thermal shift assay (CETSA). This method is crucial for answering key questions in chemical biology and drug discovery.

Key Study Components

Area of Science

Chemical Biology
Drug Discovery
Imaging Techniques

Background

Drug target engagement is essential for effective drug development.
The cellular thermal shift assay (CETSA) is a valuable tool in this context.
This method allows for spatial localization through imaging.
It can be applied to various cell systems, including primary cultures and cocultures.

Purpose of Study

To determine if a compound binds to the target protein.
To validate chemical probes in drug development.
To enhance understanding of drug-target interactions.

Methods Used

High content imaging in microplate format.
Preparation of black 384-well imaging assay plates.
Use of aluminum foil to cover plates during cell seeding.
Drilling holes in plates for proper handling.

Main Results

The method allows for effective measurement of drug-target engagement.
It provides spatial localization of drug interactions.
Applicable to various cell types beyond cell lines.
Facilitates the validation of chemical probes.

Conclusions

This protocol is a significant advancement in drug discovery techniques.
It offers a reliable method for assessing drug-target interactions.
Future applications may extend to more complex biological systems.

Frequently Asked Questions

What is the cellular thermal shift assay (CETSA)?

CETSA is a method used to measure drug-target engagement by assessing the thermal stability of target proteins in the presence of compounds.

Can this method be used with primary cultures?

Yes, the method is applicable to primary cultures and cocultures, in addition to standard cell lines.

What are the advantages of using high content imaging?

High content imaging allows for detailed spatial localization of drug interactions without detaching adherent cells.

How are the assay plates prepared?

The plates are covered with aluminum foil and drilled with holes for proper handling before cell seeding.

What key questions does this method help answer?

It helps determine whether a compound binds to a target protein, which is crucial for drug development.

Is this method suitable for high-throughput screening?

Yes, the microplate-compatible format makes it suitable for high-throughput screening applications.

Mesures de l’engagement de cibles de drogue sont au cœur de développement des médicaments efficaces et validation de la sonde chimique. Ici, nous détaillons un protocole permettant de mesurer l’engagement de drogue-cible à l’aide de l’imagerie contenu élevé dans une adaptation de microplaques compatibles de l’analyse de cellulaire décalage thermique (CETSA).

Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés en biologie chimique et la découverte de médicaments. Par exemple, votre composé se lie-t-il à la protéine cible? Les principaux avantages de cette technique sont qu’il n’y a pas besoin de détachement des cellules adhérentes.

Et la localisation spatiale peut être déterminée par imagerie. Bien que nous ayons appliqué cette méthode dans les lignées cellulaires, il est également possible d’appliquer cette méthode à d’autres systèmes cellulaires tels que les cultures primaires et les cocultures. Avant d’ensemencer les cellules, placez des plaques noires d’analyse d’imagerie de 384 puits dans un capot de culture tissulaire et recouvrez les plaques de papier d’aluminium avant d’utiliser une perceuse standard pour faire trois trous de 3,5 millimètres de diamètre aux deux extrémités de chaque plaque.

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