Un modèle murin pour évaluer les résultats structurels et fonctionnels à long terme après l’inversion de l’obstruction urétérale unilatérale prolongée

Mon laboratoire travaille sur les mécanismes et la thérapie permettant d’améliorer les résultats à long terme après une lésion rénale, et l’objectif spécifique de ce protocole est de développer un outil pour étudier les résultats à long terme après l’inversion de l’obstruction urinaire. Nous avons développé un modèle murin d’obstruction urétérale réversible unilatérale, qui nous permet d’évaluer les résultats fonctionnels et structurels à long terme de l’inversion de l’obstruction urinaire dans le rein. D’autres méthodes nécessitent plusieurs interventions chirurgicales ou une expertise microchirurgicale, à laquelle la plupart des laboratoires n’ont pas accès. De plus, comme il s’agit d’une obstruction unilatérale, la plupart des autres méthodes ne permettent pas d’évaluer fonctionnellement la récupération sans effectuer de tests de fonction rénale fractionnée. Il n’y en a vraiment que deux. La première est le placement cohérent de la pince vasculaire à la même position sur l’uretère proximal dans chaque expérience, et la seconde est le retrait de la pince vasculaire plusieurs jours plus tard sans causer de dommages à l’uretère ou au rein.

[Rachel] Pour commencer, préparez le côté chirurgical d’une souris anesthésiée avec des antiseptiques. Faites une incision dorsale longitudinale de 1,5 centimètre le long de la ligne médiane à travers la peau et les couches sous-cutanées à l’aide de ciseaux et de pinces. Faites une petite incision à travers le muscle du flanc gauche et le fascia au-dessus du rein. Ensuite, à l’aide d’une paire de pinces, extériorisez le rein gauche. À l’aide d’une pince émoussée. Disséquez soigneusement la graisse au pôle inférieur et un peu de tissu conjonctif près de l’uretère. Localisez la région de l’uretère. Séparez ensuite l’uretère ainsi que son tissu conjonctif du pédicule rénal pour éviter d’inclure la veine et l’artère rénales avec la pince. À l’aide d’une pince applicative, ouvrez la pince vasculaire et placez-la directement sous le bassinet du rein sur l’uretère. Utilisez les marquages sur la pince pour vous assurer qu’une pression uniforme est appliquée sur toutes les souris. Utilisez maintenant un coton-tige stérile imbibé de sérum physiologique pour repousser doucement le rein avec la pince dans l’espace rétropéritonéal. Suturez ensuite la couche musculaire à l’aide d’une suture résorbable. Utilisez des pinces pour fermer la couche de peau. Pour retirer le clamp urétéral, retirez les clips de plaie puis nettoyez la zone chirurgicale sans remodeler en utilisant les incisions d’origine pour accéder à la pince. Rouvrez la couche musculaire et exposez l’espace rétropéritonéal. À l’aide d’une pince, placez soigneusement la pince dans l’espace rétropéritonéal sans extérioriser le rein. À l’aide d’une pince applicatrice, ouvrez doucement la pince tout en retirant les tissus environnants à l’aide d’une pince pour la retirer en toute sécurité. Maintenant, extériorisez le rein pour inspecter le bassinet du rein à la recherche d’obstruction. Un gonflement du bassinet du rein confirme l’hydronéphrose. Repoussez le rein dans l’espace rétropéritonéal à l’aide d’un coton-tige stérile imbibé de sérum physiologique et suturez l’incision comme démontré. Pour effectuer une néphrectomie controlatérale, rouvrez le site dorsal en utilisant l’incision cutanée d’origine. En taille, le muscle du flanc droit et le fascia au-dessus du rein. Ensuite, extériorisez le rein droit à l’aide d’une pince. Tenez le rein droit à l’aide d’une pince lisse et incurvée et disséquez les pôles supérieur et inférieur pour les libérer des tissus environnants. Après avoir libéré le rein, attachez une suture en soie Foro autour des vaisseaux rénaux et de l’uretère à l’aide d’un double nœud chirurgical. Attendez environ 30 secondes jusqu’à ce que le rein s’assombrisse. Ensuite, tenez-le avec la pince incurvée lisse et retirez-le en le coupant distalement au nœud à l’aide de ciseaux courbes. Repoussez doucement le pédicule rénal restant dans l’espace rétropéritonéal à l’aide d’un coton-tige stérile imbibé de solution saline, puis fermez les couches musculaires et cutanées à l’aide de sutures et de clips. Les mesures typiques de la survie et de la fonction rénale ont été prises 84 jours après une obstruction urétérale unilatérale réversible. Des études fonctionnelles ont comparé l’obstruction urétérale unilatérale réversible à la néphrectomie seule pour l’azote uréique du sang, le débit de filtration glomérulaire transdermique et l’osmolarité urinaire après 18 heures de privation d’eau. Les valeurs d’osmolarité urinaire étaient nettement inférieures à celles des souris témoins de néphrectomie aux mêmes moments.