תחייה וצמיחה של חיידקי חומצה לקטית

התחל עם מלאי גליצרול קפוא של חיידקי חומצה לקטית, חיידקים אנאירוביים הגדלים ללא חמצן.

הקפאה חושפת את החיידקים ללחץ הנגרם על ידי קור, ומפחיתה את תפקודם התאי.

מערבל את הצינור כדי להשעות מחדש את התאים, ולהעביר אליקוט למרק מזין. דגירה בתנאים אנאירוביים.

בסביבה זו, החיידקים מייצרים אנרגיה באמצעות חילוף חומרים אנאירובי, התומך בהתאוששותם ומחזיר את הפעילות התאית.

העבירו את התרבית למרק טרי כדי לספק חומרים מזינים מחודשים לחלוקת תאים מהירה.

תאים הגדלים באופן פעיל מחמצים את המדיום, מה שמעיד על התאוששותם וצמיחתם.

פס את התרבות על צלחות אגר. דגירה בתנאים אנאירוביים כדי לתמוך בצמיחת חיידקים.

תאים פעילים מטבולית יוצרים מושבות גלויות, בעוד שתאים פגומים או לא פעילים אינם מצליחים לצמוח.

העבירו את המושבות המבודדות למרק טרי, מערבולת ודגרו בצורה אנאירובית כדי להשיג תרבות טהורה ובעלת ביצועים גבוהים.

שיטה זו משחזרת תאים ברי קיימא עבור יישומים במורד הזרם.

קח את מלאי הגליצרול המוכן של חיידקי חומצה לקטית, או זני LAB, בשני צינורות צנטריפוגה מיליליטר מהמקפיא האולטרה-נמוך של מינוס 80 מעלות צלזיוס.

אל תאפשר להם להפשיר לפני השימוש. יש לנקות ולחטא את פתח צינורות הצנטריפוגה ב-70% אלכוהול ומערבולת עדינה לפני השימוש. פיפטה כ-250 מיקרוליטר מתרבית ה-LAB מהמלאי מצינורות הצנטריפוגה למבחנות MRS טריות של שני מיליליטר.

מערבל בעדינות את המבחנות, פרפילם אותן ודגירה אנאירובית למשך הלילה בטמפרטורה של 42 מעלות צלזיוס למשך 12 עד 16 שעות. לאחר מכן, קחו כ-500 מיקרוליטר מהתרביות שגודלו במהלך הלילה ממבחנות MRS של שני מיליליטר למבחנות MRS טריות של שבעה מיליליטר, מערבלים אותן ומדגרים אותן באופן אנאירובי למשך הלילה בטמפרטורה של 42 מעלות צלזיוס למשך 12 עד 16 שעות. העריכו את הגידול המיקרוביאלי על ידי מדידת הצפיפות האופטית או הצמיחה של התרביות ב-610 ננומטר עם ספקטרופוטומטר גלוי UV ורשמו תוצאות מקובלות בין 0.7 ל-0.9.

פס את תרביות הלילה משבעת צינורות ה-MRS של מיליליטר על לוחות אגר MRS ו-MRCMPYR ודגירה אותם באופן אנאירובי במשך 72 שעות ב-42 מעלות צלזיוס. בחרו את המושבות המבודדות מצלחות האגר, העבירו אותן למבחנות MRS טריות של שבעה מיליליטר, מערבולת עדינה ודגרו אותן באופן אנאירובי למשך הלילה בטמפרטורה של 42 מעלות צלזיוס למשך 12 עד 16 שעות. אחסן את צלחות האגר המכילות את הזנים המבודדים בארבע מעלות צלזיוס במקרר למשך שבוע.

לאחר מכן, מדוד ואשר את הצפיפות האופטית משבעה מיליליטר MRS של תרביות ה-LAB שבודדו מהלוחות המפוספסים ב-610 ננומטר והשתמש בהם כתרביות עבודה לכל הניסויים הקשורים.