בידוד קריפטים במעי: שיטה לבידוד קריפטות שלמות ממודל המעי הדק של מורין

רירית המעי מכוסה בבליטות או וילי ופלישות או קריפטות. קריפטות הן בלוטות המעיים המפרישות בעיקר אנזימי עיכול.

כדי לבודד קריפטות מעיים דקים, התחל במיקום עכבר מורדם במצב שכיבה על לוח דיסקציה. בעזרת מספריים, נתחו את הצפק לאורך כדי לחשוף את מערכת העיכול.

אתר את המעי הדק ומשוך אותו בעדינות מגוף העכבר. חותכים את המעי בבסיסו. העבירו את המעי שנקטף לכלי המכיל חיץ מתאים. חותכים את המעי לאורך, חושפים את הלומן.

הניחו את המעי, עם הצד הלומינלי כלפי מעלה, על קרש חיתוך כדי לחשוף את הווילי. הזיזו מגלשת זכוכית זוויתית על פני המעי כדי לגרד את הווילי, וחשפו את כל הקריפטות.

חותכים את המעי לחתיכות זעירות, ומעבירים את החתיכות לצינור המכיל חיץ קר כקרח כדי להבטיח נזק מינימלי לקריפטות.

לאחר מכן, טפלו ב-EDTA ודגרו. EDTA גורם לכל הקריפטות להתרופף מרירית המעי. הסר את התמיסה המכילה EDTA משומשת. הוסף חיץ טרי וטריטוראט באמצעות פיפטה כדי לנתק את הקריפטות מרירית המעי.

אספו את הסופרנטנט המכיל את הקריפטות לתוך שפופרת חדשה. השלם את הצינור עם מדיום תרבית מתאים וצנטריפוגה כדי לגלול את הקריפטות.

נתח את הצפק לאורך בעזרת מספריים. החזיקו את הבטן עם המלקחיים וחתכו אותה לרוחב לשניים בעזרת מספריים מעיים מנקודה זו ואילך. שולפים את המעי ומניחים אותו בצלחת פטרי המכילה PBS. התחל בהנחת הקצה הקהה לתוך הבטן ודחף אותו בעדינות דרך הפילורו