הערכה מבוססת מערך מיקרואלקטרודות של רשתות עצביות בפרוסות חוט השדרה של עכבר

קח מערך מיקרואלקטרודות, או MEA, המכיל aCSF. מקם פרוסת חוט שדרה של עכבר בבאר ואבטח אותה ברשת משוקללת.

הנח את ה-MEA היטב במערכת הקלטה. תחת מיקרוסקופ, הקפידו על מגע מקסימלי בין אלקטרודות MEA לבין קרן הגב השטחית או SDH, אזור עשיר באינטרנוירונים.

שמור על זרימת aCSF רציפה כדי לאזן את הרקמה.

נוירונים מתקשרים באמצעות פוטנציאל פעולה. זרם יוני נתרן מפריד את הממברנה, ואחריו יציאת יוני אשלגן הגורמת לרפולריזציה. הממברנה עוברת היפרפולריזציה לזמן קצר, ומונעת פוטנציאל פעולה חדש עד לשחזור פוטנציאל המנוחה.

רשום פעילות עצבית ספונטנית מאלקטרודות MEA. אותות המתרחשים במקביל על פני אלקטרודות מרובות מצביעים על רשת של נוירונים המקושרים סינפטית.

הציגו מעכב תעלת אשלגן כדי להאריך את הדפולריזציה שמובילה לעלייה בתדירות פוטנציאל הפעולה ולפעילות קצבית סינכרונית ברחבי הרשת.

אלקטרודות נוספות המציגות אותות מקריים מצביעות על פעילות סינכרונית בתיווך מעכב.

כדי להתחיל לתעד את פעילות קרן הגב, העבירו את הפרוסה מהחממה לבאר MEA באמצעות פיפטת פסטר בעלת קצה גדול ממולאת ב-CSF מלאכותי, והוסיפו CSF מלאכותי נוסף.

השתמש במברשת צבע עדינה וקצרת שיער כדי למקם את הפרוסה מעל מערך ההקלטה של 60 האלקטרודות. לאחר מכן, הנח רשת משוקללת מעל הרקמה כדי להחזיק אותה במקומה ולקדם מגע טוב עם אלקטרודות MEA.

הנח את ה-MEA בראש ההקלטה stage. בדוק את מיקום הרקמה מעל האלקטרודות באמצעות מיקרוסקופ הפוך כדי לוודא שכמה שיותר אלקטרודות נמצאות מתחת ל-DH השטחי. ודא שלפחות שתיים עד שש אלקטרודות אינן נוגעות בפרוסה.

לאחר חיבור המצלמה למכשיר, צלם תמונת ייחוס של הפרוסה ביחס ל-MEA לשימוש במהלך הניתוח. לאחר מכן, לחץ על התחל DAQ בתוכנת ההקלטה ואשר שכל האלקטרודות מקבלות אות ברור.

לאחר מכן, חבר את קווי הכניסה והיציאה של הזלוף לבאר MEA המלאה ב-CSF מלאכותי, והפעל את מערכת הזלוף. בדוק את קצב הזרימה וודא שהזרימה מספיקה כדי למנוע הצפת הסופר-פוסאט. לאחר איזון הרקמה למשך חמש דקות, רשום את נתוני הבסיס הגולמיים למשך חמש דקות.

העבר את קו כניסת הזלוף מ-CSF מלאכותי לתמיסה של 4-אמינופירידין, והמתן 12 דקות עד שהפעילות הקצבית הנגרמת על ידי 4-אמינופירידין תגיע למצב יציב. לאחר מכן, הקלט חמש דקות של פעילות הנגרמת על ידי 4-אמינופירידין, והיה מוכן להקלטות הבאות כדי לבדוק את התרופות או לבדוק את היציבות של 4-אמינופירידין.