Name: מליחות תלויות Assay הרעילה של הכסף Nanocolloids שימוש Medaka ביצים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-03-18T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 29 s
Description: חקור שיטה לבדיקת רעילות תלוית מליחות בננוקולואידי כסף באמצעות ביצי מדקה. טכניקה זו מאפשרת הערכת השפעות כימיקלים על אורגניזמים מימיים בסביבות שונות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

אנו אסירי תודה לגב' קאורי שימיזו ולמר מסאקי טקאסו מבית הספר לתארים מתקדמים למדעי החיים, אוניברסיטת טויו, על תמיכתם הטכנית. פרויקט זה נתמך על ידי מענקי מחקר מקרן המחקר המיוחדת ומרכז המחקר לאלקטרוניקה ביו-ננו של אוניברסיטת טויו (ל-SK); על ידי הקרן לקידום מחקר מדעי של התאגיד לקידום ועזרה הדדית לבתי ספר פרטיים ביפן (ל-SK); על ידי קרן הפרויקטים החדשה להערכות סיכונים, ממשרד הכלכלה, המסחר והתעשייה (ל-SK); על ידי מענק סיוע למחקר גישוש מאתגר (פרס 23651028 ל-SK); על ידי מענק סיוע למחקר מדעי (B) ו-(C) (הענקת 23310026 ו-26340030 ל-SK); ועל ידי מענק סיוע לפרויקט בסיס מחקר אסטרטגי לאוניברסיטאות פרטיות (פרס S1411016 ל-SK) ממשרד החינוך, התרבות, הספורט, המדע והטכנולוגיה של יפן.

Medaka היפני השתמש במחקר זה טופל באופן הומאני בהתאם להנחיות המוסדיות של Toyo אונ&#39; ובשים לב להקלה של מצוקה ואי נוחות. 1. כסף Nanocolloids (SNCs) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לרכוש SNCs המטוהר (20 מ&quot;ג / ל -1, טוהר% 99.99, חלקיקים מתכוונים בקוטר כ ננומטר 28.4 ± 8.5 המרחפים במים מזוקקים). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אמת את הטוהר וריכוז של הכסף על ידי ספקטרומטריית מסת פלזמה מצמידה אינדוקטיבי (ICP-MS) מנתח על פי הפעלה במדריך 8. השיטה המקדימה עבור ICP-MS הניתוחי מתוארת בסעיף 7. </li></ol> 2. הכנת פתרונות SNC (תערובות של קולואידים סילבר Ag +) עם המליחות שונים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן 60 × ERM בהיקף של 60 גרם NaCl, KCl 1.8 גרם, 2.4 גרם CaCl 2 · 2H 2 O, ו 9.78 גרם MgSO 4 · 7H 2 O ב 1 ליטר של ultמי rapure; להתאים את ה- pH ל 7.0 עם 1.25% NaHCO 3 במים ultrapure. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מערבבים את הפתרון ERM ב 25 מעלות צלזיוס למשך הלילה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מערבבים SNCs עם ERM מדולל. הכן 40 מ&quot;ל של כל פתרון מעורב SNC-ERM. הריכוז הסופי הוא 10 מ&quot;ג / ל -1 של SNCs בריכוזים שונים של ERM (1x, 5x, 10x, 15x, 20x, 30x או). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> התאם את ה- pH של הפתרון המעורב SNC-ERM ל -7.0 עם 0.625% NaHCO 3 במי ultrapure. התאמת pH חשובה מאוד בהכנת פתרון SNC, כי שחרור Ag + בהנחייתם בתנאים חומציים 9. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש אגנו 3 כמתחם התייחסות SNCs. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מערבבים אגנו 3 עם מדולל ERM. הכן 40 מ&quot;ל של אגנו 3 -ERM פתרון מעורב לעבר ריכוז אגנו 3 של 15.7 מ&quot;ג / ל -1 (10 מ&quot;ג / ל -1 כסף) בריכוזים שונים של ERM (1x, 5x, 10x, 15x, 20x, 30x או) . הערה: כדי לבדוק רעילות קולואיד כסף, אגנו 3פתרון, אשר מהווה מקור של כסף מסיס, משמש כמתחם התייחסות SNCs, שהם תערובת של קולואידים כסף וכסף מסיס. </li></ol></li></ol> תרבות ביצה קציר 3. Medaka <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השג את medaka (O. latipes) (זן כתום-אדום) (60 גברים ו -60 נשים). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Medaka תרבות כקבוצות (20 זכרים ו -20 נקבות כקבוצה אחת) ב ERM 1x ב 3 טנקים L באמצעות מערכת culturing זרימה דרך medaka. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תרבות על התנאים הבאים: טווח ה- pH של מדיום התרבות: 6.2 כדי 6.5 מחזור כהה:: אור 16: 8 שעות טמפרטורה של מדיום התרבות: 24 ± 0.5 ° C הלחץ האוסמוטי של המדיום תרבות: 257 mOsm </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Feed medaka על Nauplii Salina הארטמיה בשעה 10:00 (פעם ביום) ולהאכיל דיאטה דגים יבש מלאכותית בשעה 09:00, 11:00, 13:00, 15:00, 17:00 (חמש פעמים ביום). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השג א Salina Nauplii. </li> &lt;li&gt; כן 5 ליטר של תמיסת מלח 3.0% בכוס פלסטיק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להוסיף 30 גרם של ביצים ארטמיה לפתרון מלח בכוס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירת הביצים על 25 מעלות צלזיוס במשך 48 שעות עם המבעבעים (4 L / min -1) באמצעות משאבת אוורור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר 48 שעות, לעצור את המבעבע. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אפשר הפתרון לעמוד במשך 5 עד 10 דקות כדי להפריד את א בקע Salina Nauplii (חלק תחתון של הפתרון) מן הביצים וקליפות ביצים שלא נולדו (חלק עליון של הפתרון). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את השכבה העליונה של הפתרון על ידי decantation. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סנן את החלק התחתון של הפתרון דרך מסננת עם פתחים של 283 מיקרומטר, לאסוף את Nauplii העוברות על רשת עם פתחים של 198 מיקרומטר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להאכיל את Nauplii אל medaka בתוך 6 שעות. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר Medaka הנקבה הולידה, להסיר את אשכולות ביצה החיצוניים בעדינות מהגופים &#39;הנקבות או לאסוף את הביצים מהתחתיות האקווריום באמצעות SMהכל בניכוי (גודל נטו 5 ס&quot;מ x 5 ס&quot;מ, גודל החור 0.2 מ&quot;מ x 0.2 מ&quot;מ). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שוטפים את אשכול ביצה עם מים זורמים מהברז במשך 5 שניות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף את כל אשכולות ביצת השטופה 30x פתרון ERM. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את האשכולות מהפתרון לאחר 1 דקות ומניחים אשכולות הביצה בין מגבות נייר היבשות אנד רול בעדינות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מכניסים את הביצים בחזרה ERM 30x. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בחר ביצים מופרות תחת מיקרוסקופ לנתח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מקום שנבחר 810 ביצי ERM 1x בשש-גם צלחות פלסטיק באמצעות מלקחיים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לדגור על הביצים של 25 ± 0.1 ° C באינקובטור עד לשלב ההתפתחותי 21. (שלבי ההתפתחות של עוברי medaka הוגדרו מהעבודה של Iwamatsu 10.) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בחרו ביצים וטופחו על השלב ההתפתחותי 21 תחת מיקרוסקופ לנתח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשטוף ביצים שנבחרו עם ERM 1x. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נושא את הביצים שטופות לניסויי חשיפה (סעיף 4). </li></ol> 4. בדיקת רעילות של SNCs או אגנו 3 </sub&gt; ב למליחות ERM השונה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשטוף ביצים Medaka (שלב 21) שלוש פעמים עם פתרון המבחן [SNCs (10 מ&quot;ג / ל -1) או אגנו 3 (15.7 מ&quot;ג / ל -1 ל -10 מ&quot;ג / ל -1 כסף) בכל ריכוז של ERM (1x, 5x , 10x, 15x, 20x, 30x או) ב- pH 7]. כפי שולט, להשתמש ביצי 1 × 30 × ERM ב- pH 7. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 15 ביצים שטפו עד 5 מיליליטר של כל פתרון מבחן בצלחות פלסטיק שש היטב. (בצע את ניסויי החשיפה שלוש פעמים במשך SNC או אגנו רעיל 3 בדיקות באמצעות כל פתרון מבחן.) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעטוף את הצלחות בנייר אלומיניום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירת הצלחות העטופות ב 25 ° C בחושך עד בקיעה או במשך 14 ימים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שים את הביצים החשופות כל 24 שעות עבור שינויים ביולוגיים וביצים מתות (איורים 1 ו -2). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להחליף את פתרונות בדיקה כל 24 שעות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצעו תצפיות כדלקמן. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ביום 6 של חשיפה, לספור את קצב הלב (מחיר 15 שניות) oעוברים Medaka f תחת מיקרוסקופ לנתח באמצעות סטופר (איור 3 א). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ביום 6 של חשיפה, למדוד את גודל העין (קוטר) של עוברים medaka תחת מיקרוסקופ לנתח באמצעות מיקרומטר (איור 3B). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ביום הבקיעה, למדוד את אורכי גוף מלא של הזחלים תחת מיקרוסקופ לנתח באמצעות מיקרומטר (איור 3c). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לספור את המספר הכולל של ביצים חשופות שבוקעות במשך 14 הימים (איור 3D). </li></ol></li></ol> בידוד 5. של כסף מסיס מפתרון SNC, וניתוח כסף <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבודד כסף מסיס מכל פתרון SNC (תערובת של קולואידים כסף וכסף מסיס) על ידי סינון דרך פילטר קרום 3 kDa ב 14,000 x ז ו -4 מעלות צלזיוס למשך 10 דקות. שימוש במסנן קרום 3 kDa לבודד כסף מסיס מן SNCs, משום בקוטר הממוצע המדווחים של SNCs מצטבר ב ERM 1x הוא 67.8 ננומטר 11 אnd כי של Ag + הוא 0.162 ננומטר 12; קרום 3 kDa כולל חלקיקים בקוטר של 2 ננומטר או יותר 13. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> למדוד את ריכוז הכסף ב 50 μl של פתרון מסונן (= ריכוז הכסף המסיס) על ידי (3E איור) ניתוח ICP-MS בהתאם למדריך 8 פועלי ICP-MS. השיטה המקדימה עבור ICP-MS הניתוחי מתוארת בסעיף 7. </li></ol> 6. מדידת כסף פגיעה מתמשכת ב Medaka עוברים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחשוף ביצים Medaka (שלב 21) כדי SNCs או אגנו 3 כמפורט בסעיף 4. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ביום 6 של חשיפה, להסיר סיסי מן הביצה (כלומר, dechorion) באמצעות medaka בקיעת אנזים לפי הפרוטוקול המתואר בספר Medaka 14. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> למדוד את ריכוז הכסף של ביצי dechorioned ניתוח ICP-MS פי (3F איור) ידני 8 פועלי ICP-MS. המקדיםשיטת ICP-MS הניתוחי מתוארת בסעיף 7. </li></ol> מדידה 7. הריכוזיות כסף על ידי ICP-MS Analysis <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להוסיף דוגמאות [50 μl של פתרון כסף (עבור אימות של ריכוז כסף; סעיף 1); שלושה עוברי dechorionated (סעיף 5); או 50 μl של פתרון מסוננים (סעיף 5)] כדי מבחנה טפלון 50 מ&quot;ל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להוסיף 2.0 מ&quot;ל של חומצה חנקתית ultrapure אל מבחנה 50 מ&quot;ל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מחממים את התערובת על פלטה חשמלית ב 110 מעלות צלזיוס עד ממש לפני שהוא מתייבש (כ -3 שעות). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי לפזר את החומר האורגני לחלוטין, להוסיף 2.0 מ&quot;ל של חומצה חנקתית ultrapure ו -0.5 מ&quot;ל של מי חמצן אל מבחנה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מחממים את התערובת שוב על צלחת חמה אלא רגע לפני מתייבש (כ -3 שעות). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ממיסים את שאריות 4 מ&quot;ל של תמיסת חומצה חנקתית ultrapure 1.0%. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העברה 4 מיליליטר של תמיסה לצינור צנטריפוגות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על 7.6 כדי 7.7 פעמים (בסך הכל שלוש פעמים). ההיקף הסופי הוא 12.0מ&quot;ל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> למדוד את ריכוז כסף של המדגם (מומס חומצה חנקתית ultrapure 1.0%) באמצעות ניתוח ICP-MS בהתאם למדריך ההפעלה 8. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש פנימי פתרון סטנדרטי חיצוני (ראה רשימת חומרים) לכמת את ריכוז הכסף. הפתרון תקן פנימי וחיצוני הוא מוכר על ידי האגודה האמריקאית הלאומית להסמכת מעבדות (A2LA). גבולות איתור של כסף היו מ&quot;ל 0.0018 ng / -1 (פתרון) ו 0.016 ng מ&quot;ג משקל -1 (גוף העובר). </li></ol></li></ol>

<ol><li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22OECD+Guidelines+for+the+Testing+of+Chemicals%2C+Section+2+Effects+on+Biotic+Systems%22">OECD Guidelines for the Testing of Chemicals, Section 2 Effects on Biotic Systems</a>. , OECD. Available from:
 <a target="_blank" href="http://www.oecd-ilibrary.org/environment/oecd-guidelines-for-the-testing-of-chemicals-section-2-effects-on-biotic-systems_20745761">http://www.oecd-ilibrary.org/environment/oecd-guidelines-for-the-testing-of-chemicals-section-2-effects-on-biotic-systems_20745761</a> (2015).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22National+Coastal+Condition+Report%22">National Coastal Condition Report</a>. , Environmental Protection Agency, Office of Water and Office of Research and Development. Washington, DC. (2001).</li>
<li>Sakaizumi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+inorganic+salts+on+mercury-compound+toxicity+to+the+embryos+of+the+Medaka%2C+Oryzias+latipes%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Fac.+Sci.+Univ.+Tokyo%22%5BJournal%5D)">Effect of inorganic salts on mercury-compound toxicity to the embryos of the Medaka, Oryzias latipes.</a> J. Fac. Sci. Univ. Tokyo. 14 (4), 369-384 (1980).</li>
<li>Sumitani, K., Kashiwada, S., Osaki, K., Yamada, M., Mohri, S., Yasumasu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Medaka+%28Oryzias+latipes%29+Embryo+toxicity+of+treated+leachate+from+waste-landfill+sites%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Jpn.+Soc.+Waste+Manage.+Exp%22%5BJournal%5D)">Medaka (Oryzias latipes) Embryo toxicity of treated leachate from waste-landfill sites.</a> J. Jpn. Soc. Waste Manage. Exp. 15 (6), 472-479 (2004).</li>
<li>Kashiwada, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distribution+of+Nanoparticles+in+the+See-through+Medaka+%28Oryzias+latipes%29%5BTitle%5D)+AND+%22EHP%22%5BJournal%5D)">Distribution of Nanoparticles in the See-through Medaka (Oryzias latipes).</a> EHP. 114 (11), 1697-1702 (2006).</li>
<li>Iwamatsu, T. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aIwamatsu%2C+T+%22The+Integrated+Book+for+the+Biology+of+the+Medaka%22">The Integrated Book for the Biology of the Medaka</a>. , University Education Press. Japan. (2006).</li>
<li>Miyamoto, T., Machida, T., Kawashima, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+environmental+salinity+on+the+development+of+chloride+cells+of+freshwater+and+brackish-water+medaka%2C+Oryzias+latipes%5BTitle%5D)+AND+%22Zoo.+Sci%22%5BJournal%5D)">Influence of environmental salinity on the development of chloride cells of freshwater and brackish-water medaka, Oryzias latipes.</a> Zoo. Sci. 3 (5), 859-865 (1986).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22XSERIES+2+ICP-MS+Getting+Started+Guide+Revision+B+-+121+9590%22">XSERIES 2 ICP-MS Getting Started Guide Revision B - 121 9590</a>. , Thermo Fisher Scientific Inc.. Available from:
 <a target="_blank" href="http://202.127.146.37/eWebEditor/uploadfile/20130314161434190.pdf">http://202.127.146.37/eWebEditor/uploadfile/20130314161434190.pdf</a> (2007).</li>
<li>Kashiwada, S., Ariza, M. E., Kawaguchi, T., Nakagame, Y., Jayasinghe, B. S., Gartner, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Silver+nanocolloids+disrupt+medaka+embryogenesis+through+vital+gene+expressions%5BTitle%5D)+AND+%22ES+%26+T%22%5BJournal%5D)">Silver nanocolloids disrupt medaka embryogenesis through vital gene expressions.</a> ES & T. 46 (11), 6278-6287 (2012).</li>
<li>Iwamatsu, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stages+of+normal+development+in+the+medaka+Oryzias+latipes%5BTitle%5D)+AND+%22Mech.+Dev%22%5BJournal%5D)">Stages of normal development in the medaka Oryzias latipes.</a> Mech. Dev. 121, 605-618 (2004).</li>
<li>Kataoka, C., Ariyoshi, T., Kawaguchi, H., Nagasaka, S., Kashiwada, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Salinity+increases+the+toxicity+of+silver+nanocolloids+to+Japanese+medaka+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Environ.+Sci.%3A+Nano%22%5BJournal%5D)">Salinity increases the toxicity of silver nanocolloids to Japanese medaka embryos.</a> Environ. Sci.: Nano. 2, 94-103 (2014).</li>
<li>Shannon, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Revised+effective+ionic+radii+and+systematic+studies+of+interatomic+distances+in+halides+and+chalcogenides%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Cryst%22%5BJournal%5D)">Revised effective ionic radii and systematic studies of interatomic distances in halides and chalcogenides.</a> Acta Cryst. 32, 751-767 (1976).</li>
<li>Pore size chart. , Spectrum Laboratories, Inc.. Available from:
 <a target="_blank" href="http://jp.spectrumlabs.com/dialysis/PoreSize.html">http://jp.spectrumlabs.com/dialysis/PoreSize.html</a> (2015).</li>
<li>Wakamatsu, Y. Medaka Book, 6.1: Preparation of hatching enzyme. , National BioResource Project (NBRP) Medaka. Available from:
 [cited 2015] <a target="_blank" href="https://shigen.nig.ac.jp/medaka/medakabook/index.php?6.1%20preparation%20of%20hatching%20enzyme">https://shigen.nig.ac.jp/medaka/medakabook/index.php?6.1%20preparation%20of%20hatching%20enzyme</a> (2015).</li>
</ol>

המחברים מצהירים שאין להם אינטרסים פיננסיים מתחרים.

Medaka הוא דג מים מתוקים, שהינו סובלני מי ים; זה לא ידוע היטב כי הגידול הטבעי המקורי של הדג הזה היה מים מלוחים מול חופי היפני 6. לפיכך, דגי medaka יש מפותח תאי כלוריד 7. מאפיין ייחודי זה מספק למדענים דרך חדשה לבדוק את רעילות של כימיקלים בסביבה כפונקציה של מליחות (מים מתוקים מי ים) באמצעות מין יחיד רק של דגים. כדי להשיג ביצי Medaka בשלב 21, ביצים חייבות להיות שנקטפו כל בוקר שנבחרו בשלב 20. בד...

מאז הקמתה של הארגון לשיתוף פעולה ולפיתוח כלכלי (OECD) הנחיות הבדיקה לכימיקלים בדיקות בשנת 1979, 38 הנחיות הבדיקה פורסמו בסעיף 2 של הנחיות, השפעות על ביוטי מערכות 1. כל אורגניזמים הימיים נבדקו כבר מן בתי גידול של מים מתוקים, צמחי מים מתוקים כלומר; אַצוֹת; חסרי חוליות כגון דפניות ו chironomids; ודגים כגון medaka, דג זברה, ו פורל קשת. בהשוואה לסביבות מים מלוחות, מים מתוקי סביבות מושפעות באופן ישיר יותר על ידי פעילות כלכלית ותעשייתית אדם. לכן, בסביבות מים מתוקים כבר עדיפות לבדיקה משום שהם נמצאים בסיכון גבוה יותר מזיהום. באזורי החוף, כולל שפכי נהרות, למליחות להשתנות בין תנאי מים מליחים ומי ים, ואזורים אלה מזוהמים לעיתים קרובות על ידי פעילות תעשייתית 2. באזורי החוף ביצות הקשורים בהם מאופיינים high מגוון ביולוגי ופריון אקולוגי. מערכות אקולוגיות החוף ולכן צריך להיות מוגן מפני זיהום כימי. עם זאת, יש הוגבל מחקר ecotoxicological בבתי גידול מים מליחים ומי ים. Sakaizumi 3 בחן את האינטראקציות רעילים בין מתיל-כספית ומליחות בביצים Medaka היפני ומצא כי להגביר את הלחץ האוסמוטי של פתרון המבחן משופרת הרעילות של מתיל-כספית. . Sumitani ואח 4 בשימוש ביצים Medaka לחקור את הרעילות של התשטיפים הטמנה; הם מצאו כי השקילות האוסמוטי של התשטיפים אל הביצים היו המפתח גרימת מומים במהלך embryogenesis. בנוסף, Kashiwada 5 דיווחה כי חלקיקי פלסטיק (39.4 ננומטר בקוטר) חלחלו בקלות הדרך הסיסית medaka הביצה בתנאים מליחים (15x הבינוני גידול העובר (ERM)). דגם דגים קטן טיפוסי, Medaka היפני (latipes Oryzias </em&gt;) נעשה שימוש בביולוגיה בסיסית ecotoxicology 6. Medaka היפני יכול לחיות בתנאים החל מים מתוקים מי ים בגלל תאי כלוריד המפותחים ביותר שלהם 7. לכן הם עשויים להיות שימושיים לבדיקה בתנאים עם מגוון רחב של למליחות.

<table><tbody><tr><td>ננו-קולואידים כסף</td><td>אוטופיה תוספי</td><td></td><td></td>כסף</tr><tr><td>NaCl</td><td>Nacalai Tesque, Inc.</td><td>31319-45</td><td>לייצור ERM</td></tr><tr><td>KCl</td><td>Nacalai Tesque, Inc.</td><td>28513-85</td><td>לייצור ERM</td></tr><tr><td>CaCl2&middot; 2H2O</td><td>Nacalai Tesque, Inc.</td><td>06730-15</td><td>להכנת ERM</td></tr><tr><td>MgSO4&middot; 7H2O</td><td>Nacalai Tesque, Inc.</td><td>21002-85</td><td>לייצור ERM</td></tr><tr><td>NaHCO3&nbsp;</td><td>נקלאי טסקה, בע"מ</td><td>31212-25</td><td>לייצור ERM</td></tr><tr><td>AgNO3</td><td>Nacalai Tesque, Inc.</td><td>31018-72</td><td></td></tr><tr><td>מד pH</td><td>HORIBA, בע"מ</td><td>F-51S</td><td></td></tr><tr><td>באלאנס</td><td>מטלר-טולדו אינטרנשיונל בע"מ</td><td>MS204S</td><td></td></tr><tr><td>medaka (Oryzias latipes) זן כתום-אדום</td><td>המכון הלאומי ללימודי</td><td></td><td></td>סביבה</tr><tr><td>medaka מערכת תרבית זרימה</td><td>Meito Suien Co.</td><td>MEITOsystem</td><td></td></tr><tr><td>Artemia salina nauplii ביצים</td><td>יפן חיות מחמד עיצוב ושות' בע"מ</td><td>4975677033759</td><td></td></tr><tr><td>משאבת אוורור</td><td>יפן חיות מחמד עיצוב ושות' בע"מ</td><td>ללא רעש w300</td><td></td></tr><tr><td>Otohime זחל & beta;-1</td><td>Marubeni Nissin הזנה ושות' בע"מ</td><td>Otohime זחל &beta;-1</td><td>מלאכותי דגים יבשים דיאטה</td></tr><tr><td>ניתוח מיקרוסקופ</td><td>Leica microsystems</td><td>M165FC</td><td></td></tr><tr><td>מיקרומטר</td><td>פוג'יקוגאקו בע"מ</td><td></td><td></td></tr><tr><td>חממת</td><td>10450023 Nksystem</td><td>TG-180-5LB</td><td></td></tr><tr><td>שייקר</td><td>ELMI בע"מ</td><td>Aizkraukles 21-136</td><td></td></tr><tr><td>צלחות פלסטיק 6 בארות</td><td>גריינר CELLSTAR</td><td>M8562-100EA</td><td></td></tr><tr><td>רדיד אלומיניום</td><td>AS ONE Co.</td><td>6-713-02</td><td></td></tr><tr><td>שעון עצר</td><td>DRETEC בע"מ</td><td>SW-111YE</td><td></td></tr><tr><td>3 kDa ממברנה מסנן</td><td>EMD Millipore Corporation</td><td>0.5 מ"ל מסנן</td><td></td>צנטריפוגלי</tr><tr><td>50 מ"ל טפלון</td><td>AS ONE Co.</td><td></td><td></td>33431097</tr><tr><td>תקן קלריטות מותאם אישית</td><td>SPEXertificate</td><td>ZSTC-538</td><td>לתקן</td></tr><tr><td>פנימי תקן קלריטות מותאם אישית</td><td>תקן SPEXertificate</td><td>ZSTC-622</td><td>לתקן חיצוני</td></tr><tr><td>חומצה חנקתית טהורה</td><td>במיוחד Kanto Chemical Co.</td><td>28163-5B</td><td></td></tr><tr><td>מי חמצן&nbsp;</td><td>קאנטו כימיקלים ושות'</td><td>18084-1B</td><td>לספקטרומטריית ספיגה אטומית</td></tr><tr><td>ICP-MS</td><td>Thermo Scientific</td><td>Thermo Scientific X סדרה 2&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>פלטה חמה</td><td>טייגר ושות'</td><td>CRC-A300</td><td></td></tr></tbody></table>

מליחות תלויות assay הרעילה של הכסף nanocolloids שימוש medaka ביצים

Salinity-dependent Toxicity Assay of Silver Nanocolloids Using Medaka Eggs

מליחות היא מאפיין חשוב של הסביבה המימית. לאורגניזמים מימיים הוא מגדיר את בתי הגידול של מים מתוקים, מים מליחים, ומי ים. בדיקות הרעילות של חומרים כימיים והערכות הסיכונים האקולוגיים שלהם לאורגניזמים מימיים מבוצעות לעתים קרובות במים מתוקים, אך הרעיל של כימיקלים לאורגניזמים מימיים תלוי pH, טמפרטורה, ומליחויות. אין שיטה, עם זאת, לבדיקת התלות המליחה רעילה לאורגניזמים מימיים. הנה, השתמשנו medaka (Oryzias latipes) כי הם יכולים להסתגל מים מתוקים, מים מליחים, ומי ים. ריכוזים שונים של המדיום העובר לגידול (ERM) (1x, 5x, 10x, 15x, 20x, ו- 30x) הועסקו כדי לבדוק את רעילות של חלקיקים nanocolloidal כסף (SNCs) כדי Medaka ביצים (ERM 1x ו 30x ERM יש מקבילה לחץ אוסמוטי כדי מים מתוקים ומי ים, בהתאמה). בשש-גם צלחות פלסטיק, 15 ביצי Medaka בשלושה עותקים נחשפו SNCs ב 10 מ&quot;ג / L &amp;# 8722; 1 בריכוזים שונים של ERM ב- pH 7 ו -25 ° C בחושך. אנו השתמשנו במיקרוסקופ לנתח מיקרומטר למדוד את קצב לב לכל 15 קוטר שניות ועין ביום 6 ואורך גוף מלא של הזחלים על בקיעת יום (סעיף 4). עובר נצפו עד בקיעה או יום 14; אז אנחנו נספר שיעור הבקיעה כל יום במשך 14 ימים (סעיף 4). כדי לראות הצטברות כסף בעוברים, השתמשנו מצמידים אינדוקטיבי ספקטרומטריית מסה פלזמה למדוד את ריכוז כסף של פתרונות בדיקה (סעיף 5) ועוברים dechorionated (סעיף 6) .the רעילות של SNCs עוברי medaka ברור גדל עם הגדלת המליחות. שיטה חדשה זו מאפשרת לנו לבדוק את הרעילות של כימיקלים במליחות שונה.

השפעת המליחות על רעילות SNC היה מאוד ברור: אינדוקציה של מום או מוות היה מליחות תלויים (איורים 1 ו -2). מדדנו סמנים פנוטיפי (קצב לב, גודל עין, אורך גוף מלא, וקצב בקיעה) ב SNC (10 מ&quot;ג / ל -1) עובר -exposed. הסמנים פנוטיפי הללו גילו רעילות SNC תלויות מליחות. קצב הלב נע בין 29.6 ל 32.2 פעימות / 15 שניות...

שלבים עובריים הם הרגישים ביותר לקסנוביוטיקה. למרות שרעילות כימית תלויה במליחות, לא קיימת שיטה לבדיקת תלות המליחות של רעילות לאורגניזמים מימיים. כאן, אנו מתארים שיטה חדשה ובעלת תפוקה גבוהה לקביעת תלות המליחות של רעילות לעוברים מימיים.

מליחות תלויות Assay הרעילה של הכסף Nanocolloids שימוש Medaka ביצים

Salinity is an important characteristic of the aquatic environment. For aquatic organisms it defines the habitats of freshwater, brackish water, and ...

המטרה הכללית של ניסוי זה היא לבחון את הרעילות של כימיקלים לאורגניזמים מימיים כתלות במליחות. שיטה זו יכולה לסייע במתן מענה לשאלות מפתח בתחום האקוטוקסיקולוגיה, כגון הערכת רעילות בתנאים של מים מתוקים, מים מליחים ומי ים. היתרון המרכזי של טכניקה זו הוא שדגי מדיקה (medaka) מעולם לא שימשו לבדיקת רעילות של כימיקלים במליחויות שונות.בנוסף, השלכות טכניקה זו חלות על טיפולים או אבחונים אחרים של רעילות כימית. הכנת ננו-קולואידים מסחריים של כסף בתמיסה, במליחות שונות, מפורטת בפרוטוקול הטקסט. כך גם לגבי גידול דגי medaka ואיסוף ביצים.התחילו בשטיפה של שש קבוצות של ביצי medaka משלב 21, שלוש פעמים בתמיסת הבדיקה. בצעו זאת באמצעות ERMs, בריכוז שונה עבור כל קבוצת ביצים. כעת, מכל קבוצה שנשטפה, העבירו 15 ביצים לבאר נפרדת המכילה תמיסת בדיקה, בתוך פלטת פלסטיק בעלת שש בארות.הכינו את הניסוי זה בשלוש חזרות, כאשר שוטפים כל קבוצה בנפרד. עטפו את הצלחות בנייר אלומיניום, והדגרירו אותן בטמפרטורה של 25 °C, בחושך. המשיכו כך עד לבקיעת הביצים, או למשך 14 ימים, לפי הגורם שיקרה קודם.במהלך הדגירה, עקבו מדי יום אחרי הביצים כדי לזהות שינויים ביולוגיים כלשהם, וכן ביצים מתות. החליפו את תמיסת הבדיקה מדי יום, במקביל לביצוע התצפיות.ביום השישי של התצפית, ספרו את קצב הלב של כל עובר במשך 15 שניות. כמו כן, ביום השישי, מדדו בעזרת מיקרומטר את קוטר העיניים של כל עובר, בכל תנאי ניסויי. עם בקיעת העוברים לזחלים, מדדו בעזרת מיקרומטר את אורך גופם המלא.בנוסף, לאורך 14 הימים, יש לספור את סך הביצים שבקעו. כדי למדוד ביו-אקומולציה של כסף, ביום השישי, אספו את הקוריון של הביצים בשיטה הסטנדרטית. ניתן לנתח את הביצים לאחר הסרת הקוריון, בדיוק כפי שמנתחים את תמיסת ה-SNC, כפי שמתואר בסעיף הבא.כדי לבודד את הכסף המסיס מכל תמיסת SNC, ראשית, סננו את תערובת הקולואידים והכסף המסיס באמצעות ממברנה של 3 kilodalton. לאחר מכן, סובבו את המסנן הטעון ב-14,000 Gs, למשך 10 דקות, בצנטריפוגה מקוררת.מתוך 50 µL של התסנין, מדוד את ריכוז הכסף באמצעות אנליזת ICP-MS. העבר את המנה לכלי בקר של Teflon בנפח 50 mL, והוסף לכלי שני מיליליטר של חומצה חנקתית ultrapure. לאחר מכן, חמם את התערובת על פלטה מחממת, בטמפרטורה של 110 °C.במהלך חימום של כשלוש שעות, הניחו לתמיסה להתייבש כמעט לחלוטין. לאחר שהכלי התקרר, המיסו לחלוטין את המוצקים האורגניים. הוסיפו לכלי 2 mL של חומצה חנקית ultrapure ו-0.5 mL של מי חמצן.לאחר מכן, חממו את התערובת שוב, עד שהיא כמעט תתייבש שוב. כעת, המיסו את השאריות שנותרו ב-4 mL של חומצה חנקית ultrapure בריכוז 1%, שהוכנה במים ultrapure. העבירו את התמיסה לשפופרת צנטריפוגה של 15 mL.חזור על תהליך המסת המוצקים שנותרו בכלי הטפלון פעמיים נוספות, תוך קירור שלושת האספויות לתוך מבחנה אחת. כעת, מדוד את ריכוז הכסף בדגימה באמצעות ICP-MS. השתמש בפרוטוקול המומלץ של היצרן כדי לנתח את הדגימות.יש להקפיד להשתמש בסטנדרטים פנימיים וחיצוניים. השפעת המליחות על רעילות ה-SNC הייתה ניכרת בקלות. השראת העיוותים או המוות הייתה תלויה בבירור במליחות.בוצעו מדידות פיזיולוגיות שונות. קצב הלב לא הושפע עד שהמליחות הגיעה ל-30 X ERM. אורך הגוף היה קצר באופן משמעותי ברמות מליחות של 15 ו-30 X ERM.גם קוטר העין פחת, בדומה לאורך הגוף. הסיכוי לבקיעה היה נמוך יותר ב-15 X ERM, והיא התרחשה רק עבור שני אחוזים מהביצים ב-30 X ERM. תחת התמיסות הניסוייות, קומפלקסים של מתכות מסיסות במים נוצרו בקלות רבה יותר ככל שריכוז המלח עלה.בדיקה של קומפלקסי המתכת בעוברים לאחר שישה ימים הראתה כי ריכוזם בעוברים עלה ככל שעלה ריכוזם בתמיסה. בעת ביצוע נוהל זה, חשוב לזכור להתאים את ה-pH של תנאי הבדיקה, מכיוון שתנאים חומציים מקלים על שחרור יוני כסף.

salinity-dependent-toxicity-assay-silver-nanocolloids-using-medaka

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

ביולוגיה התפתחותית

תרכובות לשבש האנדוקרינית (EDC) להוות סיכון ממשי של הסביבה המימית. מתקני טיהור שפכים עירוניים הם תורמים עיקריים העצמה אסטרוגניים של מים עיליים. המתודולוגיה הניתן במאמר זה מאפשר הערכה של היעילות וההתאמה של תהליכי טיפול בשפכים ביחס להסרת EDC.

שימוש בסוללה של שיטות כימיות Ecotoxicological עבור הערכת היעילות של תהליכי טיפול בשפכים להסיר אסטרוגניים און

דגי מעבדה קטנים הפכו למודלים פופולריים לחקר עצמות על המנגנונים העומדים בבסיס הפרעות בעצמות אנושיות ולסינון תרופות מווסתות עצם. בדוח זה, אנו מתארים פרוטוקול להערכת ההשפעה של אלנדרונאט על תאי עצם בזחלי מדקה עם נגעים אוסטאופורוטיים.

ותרופות טיפול<em&gt; In vivo</em&gt; הדמיה של אוסטאובלסטים-osteoclast אינטראקציות במודל אוסטאופורוזיס Medaka דגים

פרוטוקול מוצג כדי להתאים לשפה Ag ברקמות כבד וכליות נושפים על-ידי autometallography. יתר על כן, וזמינותו חדש, בשם וזמינותו Ag היסטולוגית (צ'ה) נושפים מפותחת כדי להעריך את ריכוזי Ag ברקמות הללו.

השימוש Autometallography כדי להתאים לשפה וכסף למחצה לכמת ברקמות נושפים

עוברי דג משמשים להערכת הרעילות של תרכובות כימיות. הם מפתחים מבחוץ ורגישים לכימיקלים, ומאפשרים זיהוי של שינויי פנופאיות עדינים. הניסוי דורש רק כמות קטנה של תרכובת, אשר מתווסף ישירות לצלחת המכילה עוברים, מה שהופך את מערכת הבדיקה יעילה וחסכונית.

הערכה מהירה של רעילות של תרכובות כימיות באמצעות עוברי הדגים Zebrafish

אנו מדגימים בדיקות רעילות אצות לחומרים קשים (למשל, חומרים צבעוניים או ננו חומרים) באמצעות התקנה מוארת אנכית עם LED.

התקנה בקנה מידה קטן לבדיקת רעילות אצות של ננו חומרים וחומרים קשים אחרים

מאמר זה מתאר שתי שיטות מהירות ויעילות לאיסוף זרע מדאקה דג מודל קטן (Oryzias latipes), כמו גם פרוטוקול להערכה אמינה של איכות הזרע באמצעות ניתוח זרע בעזרת מחשב (CASA).

איסוף זרע וניתוח זרע בעזרת מחשב במודל הטלוסט מדאקה היפנית (Oryzias latipes)

עבודה זו נועדה להעריך ולסקור את הליך הבדיקה הביולוגית של Artemia salina קטלניות, המזוהה גם כבדיקת קטלניות של שרימפס מלח. שיטה פשוטה וזולה זו נותנת מידע על הרעילות הכללית (הנחשבת להערכת רעילות ראשונית) של דגימות, כלומר, מוצרים טבעיים.

קטלניות ביואסאי באמצעות ארטמיה סלינה L.

כאן, אנו מציגים סוללת בדיקות התנהגותית מקיפה, כולל מיכל חדשני, Shoaling ומבחני העדפה חברתית, כדי לקבוע ביעילות את ההשפעות הנוירוטוקסיות האפשריות של כימיקלים (למשל, מתאמפטמין וגלייפוסט) על דגי זברה בוגרים באמצעות מכל יחיד. שיטה זו רלוונטית לנוירוטוקסיות ולמחקר סביבתי.

הערכת רעילות עצבית אצל מבוגרים Danio rerio באמצעות סוללה של מבחנים התנהגותיים במיכל יחיד

אנו מתארים את זרימת העבודה וניתוח הנתונים של מערכת סינון להערכת רעילות של תרכובות כימיות בהתבסס על תגובת הבהלה של רטט עובר דג הזברה. המערכת מתעדת את תנועותיהם של עוברי דגי זברה בחשיפה לגירוי רטט ומאפשרת הערכה משולבת של רעילות/קטלניות כללית ורעילות עצבית-שרירית.

הערכת רעילות של כימיקלים באמצעות מערכת סינון תגובת בהלה לרטט של דגי זברה

המאמר מציע שיטה חדשה במבחנה להערכה מהירה ורגישה של הרעילות והרעילות האקולוגית של מזהמים, המבוססת על התנועתיות של המוציטים Mytilus galloprovincialis . השיטה נועדה לתרום לפיתוח בדיקות חשיפה טוקסיקולוגיות ואקוטוקסיקולוגיות אתיות ורגישות יותר.

בדיקה טוקסיקולוגית ואקוטוקסיקולוגית המבוססת על תנועתיות המוציטים של מולים (Mytilus galloprovincialis)

חקור שיטה לבדיקת רעילות תלוית מליחות בננוקולואידי כסף באמצעות ביצי מדקה. טכניקה זו מאפשרת הערכת השפעות כימיקלים על אורגניזמים מימיים בסביבות שונות.

מליחות תלויות Assay הרעילה של הכסף Nanocolloids שימוש Medaka ביצים

גלה סרטונים נוספים