Name: הפרדת immunomagnetic של שומן דיפו ספציפי Sca1 גבוה בתאי גזע שמקורם שומן (ASCs) (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-08-11T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 52 s
Description: למדו להפריד תאי גזע מזנכימליים Sca1 חיוביים מרקמת שומן עכברית באמצעות מיון תאים אימונומגנטי. שיטה זו מאפשרת העשרת ASCs ממאגרי שומן שונים למחקר ביולוגי.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכת על ידי NIH DK095137 (עד THC). אנו מודים לחברי המעבדה בהווה ובעבר אשר תרמו להתפתחות והתחכום של השיטות שתוארו.

משפט ואתיקה: אוניברסיטת מישיגן ועדת על השימוש והטיפול של בעלי חיים (UCUCA) ואישר את כל שיטות ופרוטוקולים בהתאם מדריך לטיפול ושימוש בחיות מעבדה (המכון מעבדה בבעלי חיים למחקר, המועצה הלאומית למחקר). עכברים נשמרות ביבר אוניברסיטת מישיגן מקבלים גישה חופשית למזון ומים ושמר על מחזור 12 שעות חושך / אור. 1. הכנות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כן תקשורת התרבות העיקרית עם DMEM, 10% FBS, 1x P / S / G ו- 1x אנטיביוטיקה / antifungals. זה ישמש כדי לשמור רקמות לעיכול לפני. מניח מניות aliquot באמבט מים 37 ºC. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כן חמישה מיליליטר של תמיסת collagenase Type III ב 5 מג / מיליליטר מומס HBSS (+ Ca, Mg +) עבור כל סוג של כרית שומן מבודדת, עד חמישה עכברים. לדוגמה, כאשר לבודד SQ ו VIS מ גנוטיפ יחיד, לעשות 10 מ&quot;ל, אם סוג-בר SQ מוטנטים VIS, לעשות 20 מ&quot;ל. התאם ל- pH 7.4 ו STEלהרגיז מסנן. Aliquot לתוך צינורות 50 מ&quot;ל. מניחים בצד הרחק מאור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש 70% אתנול לחיטוי בתחום כירורגית. נגב ולכסות עם כרית כחולה. לרסס קצת אתנול על כרית כחולה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש 22 מחטי G כדי להצמיד כרית ספיגה ללוח הקלקר לקצץ במספריים. תרסיס כרית עם אתנול ולאחר מכן להגדיר את הלוח על כרית כחולה ומכסים כרית כחולה אחרת עד תחילת לנתיחה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מלאו שני צינורות 50 מ&quot;ל עם אתנול ומניחים עמדה סמוך בתחום כירורגית. מניח את מספרי מלקחיים של אתנול. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מלאו אחר צינור 50 מ&quot;ל עם PBS בתוספת 1x אנטי-אנטי לשטיפה אתנול מחוץ כלים כירורגיים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ב למכסה המנוע, מנות התווית 60 מ&quot;מ לכל סוג רקמה ולמלא עם התקשורת והתרבות חימם עד 37 ºC. מניח את הצלחות סמוכות לאזור כירורגית. </li></ol> בידוד 2. של תת עורי (SQ) רפידות שומן <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים עכבר עם ממנת יתר של isoflurane ו pneumothorax. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעדינותלרסס עכבר עם 70% אתנול ושכב פרקדן. הצמד את הכפות אל קאפה עם 22 מחטים G. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ביצוע חתך קטן בעור של הבטן התחתונה. החזקת החלק העליון של החתך עם מלקחיים, לקחת את המספריים ולהפריד את העור מפני הצפק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר העור מופרד הצפק מן הבטן אל החזה, לשקף את העור הרחק הצפק לכיוון הראש על ידי ביצוע חתכים לרוחב בעור לאורך צדי הגוף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשקף את העור שנותר מחזיק את השומן מפשעתי מהגוף להצמיד ללוח עם 22 מחטים G. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Switch to מספרי מלקחיים בסדר. תפוס את כרית השומן מפשעתי עם מלקחיים בראשית הצירים ליד הצפק לגזוז בין עור ושומן מפשעתי התקדמות לקראת במפשעה הימנעות זיהום SQ עם העור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את כרית השומן מפשעתי insolated בצלחת שכותרתו 60 מ&quot;מ. </li></ol> 3. בידוד של הקרביים (VIS) רפידות שומן <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באופן דומה לשלב 2.5, לחתוך הצפק פתוח לחשוף את רפידות ובמעיים שומן הקרביים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הזז את הבטן משם לכיוון בית החזה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תפוס את כרית השומן VIS בקצה הדיסטלי ולמשוך בעדינות. לנתח את כרית שומן VIS תוך הקפדה שלא לכלול epididymal (או רחם, אם באמצעות נקבת עכברים) רקמות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מקום בצלחת שכותרתו וחזור על שלב 3.3 עבור כרית VIS הנותרים. </li></ol> 4. עיכול Collagenase של רפידות שומן <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הזז 60 מ&quot;מ צלחות למכסה המנוע בתרבית רקמה ו לשאוב את התקשורת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לרכך את רפידות שומן עם מספריים מעוקל מכן להוסיף לפתרון collagenase. הקפידו לשטוף את המספריים מלקחיים בין סוגי רקמות עם אתנול PBS. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Shake ב 300 סל&quot;ד ו -37 ºC עבור 10-20 דקות עד רקמות מתעכלות. מקובל אם כמה חתיכות של SQ עדיין גלויות. זה יטופל בשלב מאוחר יותר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 25 מ&quot;ל של התקשורת בתרבות לפתרון collagenase לעצור את collagטיפול enase, ו פיפטה למעלה ולמטה 10 פעמים עם טפטף סרולוגיות 10 מיליליטר לפזר את הרקמות המעוכלות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תאי זנים באמצעות מסננת תא 100 מיקרומטר. צנטריפוגה במשך 10 דקות ב g 300 x. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בזהירות למזוג את התקשורת לא להפריע גלולה ולהוסיף 5 מ&quot;ל של מים סטריליים כדי גלולה ו פיפטה בעדינות להשעות תאים. חכה 2 דקות כדי lyse אריתרוציטים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 25 מ&quot;ל של התקשורת עם תאים FBS ומתח 10% דרך מסננת תא חדש 100 מיקרומטר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צנטריפוגה במשך 10 דקות ב g 300 x. התקשורת למזוג ו resuspend גלולה ב 1 מ&quot;ל של התקשורת והתרבות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ספירת תאים עם hemocytometer באמצעות 1: 1 trypan כחול. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פלייט 1 x 10 6 תאים היטב אחד על צלחת 6 באר. </li></ol> 5. הפרדת Cell מגנטית <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר כ -4 עד 6 שעות של הידבקות התא, לשטוף תאים פעמיים עם HBSS (-Ca, -Mg). לנתק תאים חסידים באמצעות טריפסין 0.05%. לדלל השעית תא טריפסין חיץ הפרדה 1 מיליליטר ספין עבור5 דקות ב g 300 x. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשאוב supernatant. תאי Resuspend במאגר 500 μl. הסרת aliquot 10 μl ולספור תאים באמצעות hemocytometer. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ספין תאים למשך 5 דקות ב 300 x גרם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשאוב supernatant לחלוטין. תאי Resuspend ב 90 חיץ μl. הוסף 10 μl נוגדן ראשוני נגד Sca1-FITC. מערבבים היטב דגירה במשך 10 דקות ב 4 מעלות צלזיוס בחושך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שטפו תאים עם 1 מ&quot;ל חיץ תאים צנטריפוגות במשך 5 דקות ב g 300 x. הסר supernatant לחלוטין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תאי Resuspend ב 80 חיץ μl. הוסף 20 μl microbeads אנטי FITC. מערבבים היטב דגירה במשך 15 דקות ב 4 מעלות צלזיוס בחושך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שטפו תאים עם 1 מ&quot;ל חיץ תאים צנטריפוגות במשך 5 דקות ב g 300 x. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר supernatant ו resuspend גלולה במאגר 500 μl. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מקום עמודה בעל מגנטית ולשטוף טור עם 500 חיץ μl. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף השעית תא לעמודה. הימנע בועות תוך pipetting. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אסוף את Sca1 ללא תווית - &lt;/ Sup&gt; תאים ולשטוף פעמים בטור 3 עם 500 חיץ μl. רק להוסיף למאגר חדש כאשר המאגר ריק. הימנע בועות תוך pipetting. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר עמודה מבעל מגנטי ומקום לתוך צינור חרוטי 15 מ&quot;ל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 1 מ&quot;ל חיץ לעמודה ו elute Sca1 + על ידי דחיפת הבוכנה המסופק באמצעות המאגר טור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ספין למטה שברי תא במשך 5 דקות ב 300 x ז. תאים Resuspend בתקשורת תרבות 1 מ&quot;ל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסרת aliquot 10 μl מן השברים שכותרתו ללא תווית ולספור תאים באמצעות hemocytometer. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פלייט כל שבריר תא 1 גם צלחת 6 באר. </li></ol> 6. אימות של הפרדת immunomagnetic של ACSs Sca1 הגבוה עם cytometry הזרימה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יש לשטוף את התאים פעמיים עם HBSS (-Ca, -Mg) ו לנתק תאים באמצעות טריפסין 0.05%. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תאי צנטריפוגה XG ב 300 במשך 5 דקות. תאים Resuspend בתקשורת תרבות 1 מ&quot;ל ולספור באמצעות hemocytometer. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השג&gt; 10 6 </sup&gt; תאים 1 מ&quot;ל התקשורת בתרבות צנטריפוגות ב XG 300 במשך 5 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר צעד supernatant וחזור 6.3 פעמיים נוספות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תאים Resuspend עם 1 מ&quot;ל של סרום עיזים 2% + 2% BSA ולחסום במשך 30 דקות ב RT. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תאי צנטריפוגה XG ב 300 במשך 5 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר חסימת פתרון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להוסיף עכברוש IgG2a אלקסה פלואוריד 647 (0.25 מיקרוגרם, 1: 400) או אנטי-Sca1 אלקסה פלואוריד 647 (0.25 מיקרוגרם, 1: 400), ב 100 μl של PBS עם 2% נסיוב עז ו -2% BSA + PBS ב 4 ° C במשך 30 דקות בחושך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 1 מ&quot;ל של קר PBS לתאים. צנטריפוגה XG 300 במשך 5 דקות ב 4 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר צעד supernatant וחזור 6.9 פעמיים נוספות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תאים Resuspend ב 1 מ&quot;ל PBS. Pass השעיות התא דרך מסננת התא 100 מיקרומטר כהכנה ניתוח תזרים cytometric. </li></ol>

<ol><li>Chun, T. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+pericellular+collagenase+directs+the+3-dimensional+development+of+white+adipose+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">A pericellular collagenase directs the 3-dimensional development of white adipose tissue.</a> Cell. 125 (3), 577-591 (2006).</li>
<li>Chun, T. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+link+between+obesity+and+MMP14-dependent+adipogenic+collagen+turnover%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Genetic link between obesity and MMP14-dependent adipogenic collagen turnover.</a> Diabetes. 59 (10), 2484-2494 (2010).</li>
<li>Chun, T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peri-adipocyte+ECM+remodeling+in+obesity+and+adipose+tissue+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Adipocyte%22%5BJournal%5D)">Peri-adipocyte ECM remodeling in obesity and adipose tissue fibrosis.</a> Adipocyte. 1 (2), 89-95 (2012).</li>
<li>Sun, K., Tordjman, J., Clement, K., Scherer, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibrosis+and+adipose+tissue+dysfunction%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Metab%22%5BJournal%5D)">Fibrosis and adipose tissue dysfunction.</a> Cell Metab. 18 (4), 470-477 (2013).</li>
<li>Spangrude, G., Heimfeld, S., Weissman, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Purification+and+Characterization+of+Mouse+Hematopoietic+Stem+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Purification and Characterization of Mouse Hematopoietic Stem Cells.</a> Science. 241, 58-62 (1988).</li>
<li>Welm, B. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sca-1%28pos%29+cells+in+the+mouse+mammary+gland+represent+an+enriched+progenitor+cell+population%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Sca-1(pos) cells in the mouse mammary gland represent an enriched progenitor cell population.</a> Dev Biol. 245 (1), 42-56 (2002).</li>
<li>Gesta, S., Tseng, Y. H., Kahn, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developmental+origin+of+fat%3A+tracking+obesity+to+its+source%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Developmental origin of fat: tracking obesity to its source.</a> Cell. 131 (2), 242-256 (2007).</li>
<li>Tang, W., Zeve, D., Suh, J. M., Bosnakovski, D., Kyba, M., Hammer, R. E., Tallquist, M. D., Graff, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((White+fat+progenitor+cells+reside+in+the+adipose+vasculature%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">White fat progenitor cells reside in the adipose vasculature.</a> Science. 322, 583-586 (2008).</li>
<li>Rodeheffer, M. S., Birsoy, K., Friedman, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+white+adipocyte+progenitor+cells+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Identification of white adipocyte progenitor cells in vivo.</a> Cell. 135 (2), 240-249 (2008).</li>
<li>Tokunaga, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fat+depot-specific+gene+signature+and+ECM+remodeling+of+Sca1%28high%29+adipose-derived+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Matrix+Biol%22%5BJournal%5D)">Fat depot-specific gene signature and ECM remodeling of Sca1(high) adipose-derived stem cells.</a> Matrix Biol. 36, 28-38 (2014).</li>
<li>Chun, T. H., Inoue, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((3-D+adipocyte+differentiation+and+peri-adipocyte+collagen+turnover%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Enzymol%22%5BJournal%5D)">3-D adipocyte differentiation and peri-adipocyte collagen turnover.</a> Methods Enzymol. 538, 15-34 (2014).</li>
<li>Rajan, N., Habermehl, J., Cote, M. F., Doillon, C. J., Mantovani, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+ready-to-use%2C+storable+and+reconstituted+type+I+collagen+from+rat+tail+tendon+for+tissue+engineering+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Preparation of ready-to-use, storable and reconstituted type I collagen from rat tail tendon for tissue engineering applications.</a> Nat Protoc. 1 (6), 2753-2758 (2006).</li>
<li>Ma, X., Robin, C., Ottersbach, K., Dzierzak, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Ly-6A+%28Sca-1%29+GFP+Transgene+is+Expressed+in+all+Adult+Mouse+Hematopoietic+Stem+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">The Ly-6A (Sca-1) GFP Transgene is Expressed in all Adult Mouse Hematopoietic Stem Cells.</a> Stem Cells. 20 (6), 514-521 (2002).</li>
<li>Berry, R., Rodeheffer, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+the+adipocyte+cellular+lineage+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Characterization of the adipocyte cellular lineage in vivo.</a> Nat Cell Biol. 15 (3), 302-308 (2013).</li>
<li>Jeffery, E., Church, C. D., Holtrup, B., Colman, L., Rodeheffer, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+depot-specific+activation+of+adipocyte+precursor+cells+at+the+onset+of+obesity%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Rapid depot-specific activation of adipocyte precursor cells at the onset of obesity.</a> Nat Cell Biol. 17 (4), 376-385 (2015).</li>
<li>Mori, S., Kiuchi, S., Ouchi, A., Hase, T., Murase, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characteristic+Expression+of+Extracellular+Matrix+in+Subcutaneous+Adipose+Tissue+Development+and+Adipogenesis%3B+Comparison+with+Visceral+Adipose+Tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Biol+Sci%22%5BJournal%5D)">Characteristic Expression of Extracellular Matrix in Subcutaneous Adipose Tissue Development and Adipogenesis; Comparison with Visceral Adipose Tissue.</a> Int J Biol Sci. 10 (8), 825-833 (2014).</li>
<li>Ong, W. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+Specific+Cell-Surface+Markers+of+Adipose-Derived+Stem+Cells+from+Subcutaneous+and+Visceral+Fat+Depots%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">Identification of Specific Cell-Surface Markers of Adipose-Derived Stem Cells from Subcutaneous and Visceral Fat Depots.</a> Stem Cell Reports. 2 (2), 171-179 (2014).</li>
</ol>

החוקרים אין לי מה לחשוף.

בזאת אנו מדגימים את הבידוד והפרדה תא immunomagnetic של ASCs בעכברים מ רפידות שומן שונים והשימוש בהם לניסויים במבחנה. השיטה המוצגת היא יעילה עבור הבידוד המהיר של מספר רב של ASCs Sca1 החיובי, המהווה יתרון על FACS בתיווך מורכב ויקר טכניים הבידוד של ASCs 9,14. בניגוד FACS, הפרדת תא immunomagnetic אינה מאפשרת את השימוש של אנטיגן המרובה לאיתור אוכלוסיית תא המטרה. אף על פי כן, אם אנטיגן השטח היטב מאופיין, שימוש פרדת immunomagnetic מגדיל את מספר התאים להיות מנותח ללא ה...

תאי גזע אנטיגן 1 (Sca1, או Ly6A / E) זוהה לראשונה כסמן פני התא הביע על ידי תאים hematopoietic ו גזע mesenchymal 5,6. השבר וסקולרית סטרומה (SVF) של רקמת שומן המתקבלת מאגרי שומן עכבר הוא אוכלוסייה הטרוגנית של תאים הכוללים פיברובלסטים, מקרופאגים, תאי אנדותל של כלי דם, תאים עצביים, ועל ובתאים adipocyte 7. ובתאי adipocyte, או תאי גזע שמקורם שומן (ASCs) הם תאים שאינם שומנים-לאדן כי מתגוררים מטריקס perivascular עשיר קולגן (ECM) 8. כ -50% של SVF מורכב ASCs, המאופיינים שלילי השושלת (לין -) ו CD29 +: CD34 +: Sca1 + 9. רוב של תאים אלה הם Sca1 +: CD24 - אבות adipocyte, המסוגלים בידול adipocyte במבחנה; עם זאת, רק חלק קטן של תאים (0.08% של SVF) מהווה Sca1 <sעד&gt; +: CD24 + תאים המסוגלים מלא של מתרבים ומבדל לתוך adipocytes בתנאים vivo ב 9. למרות הסייגים הפוטנציאל של שימוש Sca1 + SVF ללא אפלית CD24 + תאי CD24 - תאים, לבודד Sca1 + ASCs מן מחסני שומן באמצעות פרדת תא immunomagnetic היא גישה יעילה ומעשית כדי לקבוע את הפנוטיפ-אוטונומי תא של ובתאים adipocyte העיקרי. בתחום השמנת יתר וסוכרת, סיסטיק לרקמות ודלקת לשחק תפקיד קריטי בפיתוח ותחזוקה של סוכרת מסוג 2 3. לאחרונה, Tokunaga et al. הראה כי תאי גבוה Sca1 המבודד מפשעתי (או תת עורית, SQ) ו perigonadal (או קרבי, VIS) מאגרי שומן C57BL6 / J להפגין חתימות גנטיות שונות שיפוץ ECM במבחנה 10. MMP14 (MT1-MMP), חבר אבטיפוס של-t הממברנהמטלו מטריקס ype (MMP) המשפחה מתווכת בפיתוח שומן לבן (WAT) דרך פעילותה collagenolytic 1. דוגמאות של ניסויים שעלולים להתנהל עם התאים מבודדים והעשירו באמצעות הפרוטוקול הבא כוללות תרבות תלת ממדים, מחקרי בידול, מבחני שפלת קולגן, ו- RNA רצף 10,11. מבחני שפלה צריכים להתנהל עם קולגן חומצת חילוץ כדי להבטיח את השימור של telopeptide 11,12. הפרוטוקול הבא יהיה להדגים את השיטות לבודדות תאי סטרומה וסקולרית ראשית ממנהל מאגרי שומן שונים ולהעשיר ובתאי adipocyte באמצעות פרדת תא immunomagnetic. תוקפו של מיון התא יוערכו עם זרימת cytometry ובאמצעות באמצעות עכברים Sca1-GFP המבטאים GFP ב Sca1 + תאים, מונע על ידי האמרגן Sca1 13.

<table><tbody><tr><td>סוג 3 קולגנאז</td><td>וורת'ינגטון ביוכימי</td><td></td><td>LS004182 עיכול רקמות</td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Gibco</td><td>11965-092</td><td>תרבית גלוקוז גבוהה</td></tr><tr><td>בינוני עט/סטרפטוקוקוקוק/גלוטמין (100x)</td><td>Gibco</td><td>10378-016</td><td>אנטיביוטיקה מדיה</td></tr><tr><td>אנטי אנטי (100x)</td><td>Gibco</td><td>15240-062</td><td>מדיה אנטי פטרייתית</td></tr><tr><td>FBS</td><td>Gibco</td><td>16000-044</td><td></td></tr><tr><td>PBS (1x, pH 7.4)</td><td>Gibco</td><td>10010-023</td><td></td></tr><tr><td>טריפסין (0.05%)</td><td>Gibco</td><td>25300-054</td><td></td></tr><tr><td>מסננת תאים</td><td>BD Bioscience</td><td>352360</td><td>100-&mu; m מסננת תאים</td></tr><tr><td>60 מ"מ צלחות</td><td>BD Falcon</td><td>353004</td><td></td></tr><tr><td>מספריים</td><td>FST</td><td>14001-12</td><td></td></tr><tr><td>מספריים גדולות</td><td>FST</td><td>14091-11</td><td>קצה עדין ומעוקל</td></tr><tr><td>מלקחיים גדולים</td><td>FST</td><td>11000-12</td><td></td></tr><tr><td>מלקחיים עדינים</td><td>כל ספק</td><td></td><td></td></tr><tr><td>25 גרם 5/8 אינץ' מחטים</td><td>BD</td><td>305122</td><td></td></tr><tr><td>מחטים 22 גרם 1.5 אינץ'</td><td>BD</td><td>305159</td><td></td></tr><tr><td>צינורות חרוטיים 15 מ"ל</td><td>BD Falcon</td><td>352097</td><td></td></tr><tr><td>צינורות חרוטיים 50 מ"ל</td><td>BD Falcon</td><td>352098</td><td></td></tr><tr><td>MACS עמודות הפרדה</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-201</td><td></td></tr><tr><td>ערכת מיקרו-חרוזים Anti-Sca1 (FITC)</td> <td>Miltenyi Biotec</td><td>130-092-529</td><td>FITC-anti-Sca1 1&ordm; מיקרו-חרוזים בטן ואנטי FITC 2&ordm; Ab</td></tr><tr><td>AutoMACS מאגר ריצה</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-091-221</td><td></td></tr><tr><td>מפריד MiniMACS</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-102</td><td></td></tr><tr><td>MACS MultiStand</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-303</td><td></td></tr><tr><td>רפידות צ'וקס כחולות</td><td>פישר</td><td>276-12424</td><td></td></tr><tr><td>רפידות סופגות</td><td>פישר</td><td>19-165-621</td><td></td></tr><tr><td>לוח קלקר</td><td></td><td></td><td>השתמש משפופרות 50 מ"ל</td></tr><tr><td>70% אתנול</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>איזופלורן</td><td>כל ספק</td><td></td><td></td></tr><tr><td>עכברוש IgG2a Alexa Fluor 647</td><td>Invitrogen</td><td>R2a21</td><td></td></tr><tr><td>עכברוש IgG2a נגד עכבר Sca1 Alexa Fluor 647</td><td>Invitrogen</td><td>MSCA21</td><td></td></tr><tr><td>R-PE</td><td>Invitrogen</td><td>R2a04</td><td></td></tr><tr><td>Rat IgG2a נגד עכבר F4/80 R-PE</td><td>Invitrogen</td><td>MF48004</td><td></td></tr><tr><td>צינור תחתון עגול</td><td>BD Falcon</td><td>352058</td><td></td></tr><tr><td>HBSS (&ndash; Ca, &ndash; Mg)</td> <td>Gibco</td><td>14175-095</td><td></td></tr><tr><td>HBSS (+Ca, +Mg)</td> <td>Gibco</td><td>14025-092</td><td>לתמיסת קולגנאז</td></tr><tr><td>קולגן מסוג I (2.7 מ"ג/מ"ל בחומצה אצטית 37 מ"מ</td><td>הכנה בבית12</td><td></td><td></td></tr><tr><td>10x MEM</td><td>Gibco</td><td>11430-030</td><td></td></tr><tr><td>1 M HEPES</td><td>Gibco</td><td>15630-080</td><td></td></tr><tr><td>0.34 N NaOH</td><td>הכנה בבית</td><td></td><td></td></tr><tr><td>פתקי כיסוי</td><td>Corning</td><td>2870-22</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 594 חומצה קרבוקסילית, אסתר סוקסינימידיל, איזומרים מעורבים</td><td>Invitrogen</td><td>A-20004</td><td></td></tr><tr><td>0.89 M NaHCO3&nbsp; </td><td>Gibco</td><td>25080-094</td><td></td></tr></tbody></table>

הפרדת immunomagnetic של שומן דיפו ספציפי sca1<sup&gt; גבוה</sup&gt; בתאי גזע שמקורם שומן (ascs)

Immunomagnetic Separation of Fat Depot-specific Sca1high Adipose-derived Stem Cells (ASCs)

בידוד תאי גזע שמקורם בשומן (ASCs) הוא שיטה חשובה בתחום הביולוגיה של רקמת השומן, אדיפוגנזה ושיפוץ מטריצה חוץ-תאית (ECM). in vivo, סביבה עשירה ב-ECM המורכבת מקולגנים פיברילריים מספקת תמיכה מבנית לרקמות השומן במהלך התקדמות ורגרסיה של השמנת יתר. שיפוץ ECM פיזיולוגי בתיווך מטריצות מטאלופרוטאינאזות (MMPs) ממלא תפקיד מרכזי בוויסות גודל ותפקוד רקמת השומן1,2. אובדן שיפוץ ECM קולגנוליטי פיזיולוגי עלול להוביל להצטברות מוגזמת של קולגן (פיברוזיס רקמות), חדירת מקרופאגים, ובסופו של דבר, אובדן הומאוסטזיס מטבולי כולל עמידות לאינסולין3,4. כאשר נצפה שינוי פנוטיפי של רקמת השומן במודלים של עכברים ממוקדי גנים, בידוד ASCs ראשוניים ממאגרי שומן למחקרי מבחנה הוא גישה יעילה להגדרת תפקידו של הגן הספציפי בוויסות תפקודם של ASCs. בהמשך, אנו מגדירים הפרדה אימונומגנטית של ASCsגבוהים Sca1.

העשרה של ASCs הגבוהה Sca1 מ רפידות שומן שונות. תאי סטרומה וסקולרית המבודדים תצוגת שומן SQ פיברובלסטים דמויים, נמתחו צורת תא ללא קשר לרמת ביטוי Sca1 (איור 1 א). מצד השני, VIS (eWAT נגזרת) תאי נמוך Sca1 גבוה Sca1 להדגים הבדל מובהק בצורת התא שלהם. כמו SQ (iWAT נגזרת) תאים גבוהים Sca1, VIS (e...

אנו מציגים את הטכניקות הנדרשות לבידוד מקטע כלי הדם הסטרומלי (SVF) ממאגרי רקמות שומן מפשעתיים (תת עוריים) ופריגונדלים (קרביים) של עכברים כדי להעריך את ביטוי הגנים והפעילות הקולגנוליטית שלהם. שיטה זו כוללת העשרה של תאי גזעשמקורם בשומן גבוה Sca1 (ASCs) באמצעות הפרדת תאים אימונומגנטיים.

הפרדת immunomagnetic של שומן דיפו ספציפי Sca1<sup&gt; גבוה</sup&gt; בתאי גזע שמקורם שומן (ASCs)

The isolation of adipose-derived stem cells (ASCs) is an important method in the field of adipose tissue biology, adipogenesis, and extracellular matrix ...

המטרה הכללית של הליך זה היא לבודד תאי גזע מזנכימליים חיוביים ל-Sca1 מרכיסות שומן שונות של עכבר. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שבאמצעות מיון תאים המבוסס על חרוזי אימונומגנטים, ניתן להעשיר ביעילות תאי גזע ממקור שומני ממאגרי שומן שונים עבור ניסויים המשך. בדרך כלל, חוקרים שאינם מכירים את השיטה יתקלו בקושי, שכן יש לאפטמי את עוצמתו ומשך הזמן של עיכול הרקמה המתוּוך על ידי קולגנאז כדי להשיג מספר תאים מספיק למיון.כדי לבודד את כריות השומן התת-עוריות, התחילו בהנחת העכבר על לוח ניתוח מספוג במצב שכיבה על הגב (supine) והתיז את החיה ב-70% ethanol. לאחר קיבוע הכפות ללוח, בצעו חתך קטן בעור הבטן התחתונה. לאחר מכן, אחזו בראש החתך בעזרת פינצטה, והשתמשו במספריים כדי להפריד את העור ואת הצפק (peritoneum) מהבטן ועד לחזה.בצעו חיתוכים לטרליים בעור, לאורך צד הגוף, וקלפו את העור מהפריטונאום לכיוון הראש. לאחר מכן, משכו לאחור את שארית העור תוך החזקת השומן האינגווינלי הרחק מהגוף, והשתמשו במחטים בכיל 22 gauge כדי להצמיד את העור ללוח. בשלב הבא, השתמשו בפינצטה כדי לתפוס כרית שומן אינגווינלית אחת במקור שלה סמוך לפריטונאום, והשתמשו במספריים עדינים כדי לגזור בין העור לשומן האינגווינלי, תוך התקדמות לעבר המפשעה ומניעת זיהום של כרית השומן התת-עורית בעור.לאחר מכן, העבירו את רקמת השומן המפשית (inguinal fat pad) המבודדת לצלחית של 60 מילימטר המסומנת כ-SQ ומכילה מצע תרבית בטמפרטורה של 37 degrees Celsius, ואספו את רקמת השומן המפשית מהצד השני של בעל החיים באופן דומה. כדי לבודד את רקמות השומן הוויסרליות (visceral fat pads), חתכו את הפריטונאום כדי לחשוף את רקמות השומן הוויסרליות ואת המעיים. לאחר מכן, הזיזו את המעיים הצידה, לכיוון בית החזה.תפסו את כרית השומן הוויסרלי (שומן פנימי) בקצה הדיסטלי, משכו בעדינות כלפי מעלה את רקמת השומן, והוציאו אותה תוך הקפדה להשמיט את רקמת האפידידימיס. לאחר מכן, הניחו את כרית השומן בצלחת של 60 מילימטר המסומנת ב-VIS ומכילה מצע גידול בטמפרטורה של 37 degrees Celsius. לאחר איסוף כל כריות השומן, העבירו את הצלחות למCב תרביות רקמה, ושאבו את המצע.השתמשו במספריים מעוקלים כדי לקצץ את הרפידות. לאחר מכן, העבירו את חתיכות השומן למבחנות בנפח 50 milliliter המכילות קולגנז freshly prepared. לאחר מכן, נערה את המבחנות במהירות של 300 RPM ובטמפרטורה של 37 degrees Celsius למשך 10 עד 20 דקות, עד לעיכול הרקמות.ייתכן שחלקים מרקמת כרית השומן התת-עורית עדיין יהיו גלויים. הוסף 20 milliliters של מצע תרבית לתמיסת הקולגנאז כדי להפסיק את העיכול, והשתמש בפיפטה סרולוגית של 10 milliliter כדי לשאוב ולהעביר את תערובת הרקמה 10 פעמים כדי לפרק לחלוטין את הרקמות שעברו עיכול. סנן את התאים דרך מסנני תאים של 100 micron, וסבב את הרקמות בצנטריפוגה.לאחר מכן, שפכו בזהירות את המצע, תוך הקפדה שלא להפריע למשקעים, והשעו בעדינות את שתי קבוצות התאים בחמישה מיליליטרים של מים סטריליים. המתינו שתי דקות עד להליסת האריתרוציטים. לאחר מכן, עצרו את התגובה בכל מבחנה באמצעות 25 מיליליטרים של מצע מועשר ב-FBS.סננו את שתי אוכלוסיות האדיפוציטים דרך מסנני תאים חדשים של 100 מיקרון, צנטריפוגו אותם שוב, ולאחר מכן השעיקו את המשקעים ב-1 עד 3 מיליליטר של מצע גידול. לאחר ספירה בשיטת הדחה של trypan blue, זרעו בנפרד 1x10⁶ תאים מרפיד שומן תת-עורי ותאים ויסרליים לבארים נפרדות של פלטת תרבית תאים בעלת שש בארות. לאחר טריפסינציה של התאים, דללו את הטריפסין ב-1 מיליליטר של בופר הפרדה, ולאחר מכן צנטריפוגו את פלטות התרבית.אנו תולה את התאים ב-500 microliters למבחנה של תמיסת הפרדה, וסובב את התאים שוב בצנטריפוגה. כעת, השהה מחדש את התאים ב-90 microliters למבחנה של תמיסת הפרדה, ומערבב 10 microliters של נוגדן ראשוני anti-Sca1 FITC לתוך תרחיף התאים. לאחר 10 דקות של דגירה בטמפרטורה של ארבעה מעלות צלזיוס בחשיכה, שוטפים את התאים במיליליטר אחד של תמיסת הפרדה למבחנה.לאחר הצנטריפוגה, יש לרספנדות את התאים ב-80 µL של תמיצת הפרדה לכל סספנסיית תאים. לאחר מכן, ערבבו 20 µL של Anti-FITC Microbeads לתוך כל באר, והניחו את הפלטות בטמפרטורה של 4 °C, בהגנה מאור, למשך 15 דקות. בסיום הדגירה, שטפו את התאים ב-1 mL של תמיצת הפרדה, ורספנדו את התאים ב-500 µL של תמיסה רעננה לכל מבחנה.כעת, הניחו עמודה במחזיק המגנטי, ושטפו את העמודה עם 500 µl של תמיסת הפרדה. העבירו את התאים מתרבית הרקמה של פדי השומן התת-עורי אל העמודה, תוך הקפדה להימנע מבועות, ואספו את התאים הבלתי-מסומנים השליליים ל-Sca1 לשפופרת קונית של 15 ml. לאחר שכל התאים עברו, שטפו את העמודה שלוש פעמים עם 500 µl של תמיסת הפרדה.לאחר מכן, העבירו את העמודה מהמגנט לשפופרת קונית חדשה בנפח 15 מיליליטר, והעבירו מיליליטר אחד של תמיסת הפרדה טרייה דרך העמודה כדי להדיף את התאים החיוביים ל-Sca1. לבסוף, סבבו במערבל צנטריפוגי את שתי פראקציית התאים, החיוביים והשליליים ל-Sca1, ותלו את המשקעים במיליליטר אחד של מצע גידול. לאחר מכן, ספרו את מספר התאים בכל פראקציה, והעבירו אותם לבאריים נפרדים בתוך פלטת תרבית תאים חדשה בעלת שישה בארים.תאי סטרומה וסקולריים שבודדו משומן תת-עורי מציגים צורה תאית מתוחה דמוית פיברובלסט, ללא קשר לרמת הביטוי של Sca1 שבהם. בדומה לתאים בעלי ביטוי גבוה של Sca1 המופקים משומן מותני תת-עורי, תאים בעלי ביטוי גבוה של Sca1 המופקים משומן ויסרלי של האפידידימיס מציגים צורה תאית מתוחה דמוית פיברובלסט. זאת בעוד שתאי VIS בעלי ביטוי נמוך של Sca1 מציגים צורה אפיתלואידית.תאי Sca1 high שבודדו מעכברי Sca1-GFP מבודדים מזוהים בקלות כתאים חיוביים ל-GFP בתרבית רקמה. למעשה, כאשר תאים אלו נבחנים באמצעות ציטומטריית זרימה, נמצא כי רוב התאים החיוביים ל-GFP מקודדים כבעלי ביטוי של חלבוני Sca1 על פני השטח של התא, כפי שהזוהו על ידי נוגדן anti-Sca1. בשילוב עם ניתוחי real-time PCR, ניתן להוכיח את הביטוי הדיפרנציאלי של מטאלופרוטיאנזות מטריקס קולגנוליטיות בין תאי גזע ממקור אדיפוציטרי עם ביטוי Sca1 high שבודדו משומן מפשעי (inguinal) לעומת שומן מהאפידידימיס (epididymal).בנוסף, כאשר נעשה שימוש בג'לים של קולגן מסוג I המסומנים בפיב Lorentz-פלואורסצאין להערכת פעילות פירוק פרי-צלולרית, נצפית פעילות משמעותית מוגברת של עיצוב מחדש של קולגן המתווכת על ידי תאי גזע מודרמיים מהרקמה השומנית של האיברים הפנימיים עם ביטוי גבוה של Sca1. לאחר רכישת המיומנות, ניתן להשלים את בידוד התאים מרפידת השומן תוך שעתיים אם הפעולה מבוצעת כראוי. במהלך ביצוע פרוצדורה זו, חשוב לזכור לשמור על שדה ניתוח נקי ומאורגן כדי להבטיח בידוד יעיל של רפידת השומן.בעקבות הליך זה, ניתן לבצע שיטות אחרות, כגון בדיקת פירוק קולגן, כדי לענות על שאלות נוספות בנוגע לשחזור רקמה המתווך על ידי תאי גזע מהרקמה השומנית. לאחר פיתחו, סללה טכניקה זו את הדרך עבור חוקרים בתחום ההשמנה וביולוגיית המטריקס לבחון את תפקידם של תאי גזע מהרקמה השומנית בשחזור ובבקיאות של רקמה שומנית בעכברים ובבני אדם. לאחר צפייה בסרטון זה, תהיו בעלי הבנה טובה כיצד להשיג ולהעשיר תאי Sca1 חיוביים ראשוניים ממאגרי רקמה שומנית.

immunomagnetic-separation-fat-depot-specific-sca1high-adipose-derived

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

ביולוגיה התפתחותית

סרטון זה מדגים טכניקה לבידוד וטיפוח תאי גזע שמקורם בשומן (ADSCs) המסומנים באופן פלואורסצנטי מרקמת השומן של קשת פריאורטית. לאחר הבידוד, NCADSCs מזוהים, ממוינים באמצעות מיון תאים המופעלים על ידי פלואורסצנטיות, ולאחר מכן תרבית על צלחת, קידום התפשטות תאים.

בידוד תאי גזע שמקורם בשומן מרקמת שומן פריאורטית מורין

ב2001, חוקרים באוניברסיטת UCLA תאר את בידודה של אוכלוסייה של תאי גזע בוגרים, המכונה תאי גזע שמקורם בשומן או ASCs, מרקמת שומן. מאמר זה מתאר את הבידוד של ASCs מlipoaspirates באמצעות פרוטוקול עיכול ידני, האנזימטית באמצעות collagenase.

בידוד ידני של תאי גזע שמקורם בשומן מLipoaspirates האדם

ניתן להגדיר את הטרוגניות השעתוק בתוך תאי סטרומה שמקורם בשומן אנושי ברמת התא הבודד באמצעות סמני פני התא וגנים אוסטאוגניים.  אנו מתארים פרוטוקול המשתמש בזרימה ציטומטרית לבידוד תת-אוכלוסיות תאים עם פוטנציאל אוסטאוגני מוגבר, אשר עשוי לשמש לשיפור שחזור השלד הגולגולתי.

בידוד וההעשרה של אדם שומן המופק מתאי סטרומה לOsteogenesis משופר

פרוטוקול זה מספק שיטה נטולת אנזימים לבידוד תאי גזע mesenchymal מ מתיחת בטן ודגימות ליפוף באמצעות שיטת החקור. העדר אנזימים קשים או צעדים צנטריפוגה מספק תאי גזע רלוונטיים קלינית שניתן להשתמש בהם למחקרים בתוך מבחנה או להעביר חזרה למרפאה.

שיטה נטולת אנזימים לבידוד והתרחבות של אדיפוז האנושית-תאי גזע נגזרים

פרוטוקול זה מתאר את הגישה הטכנית לבידוד תת-אוכלוסיות תאי סטרומה אדיפוגניים ופיברו-דלקתיים ממחסני רקמת שומן לבן תוך בטני (WAT) על ידי מיון תאים המופעלים על ידי פלואורסצנטיות או הפרדת חרוזים אימונומגנטית.

בידוד תת-אוכלוסיות תאי סטרומה אדיפוגניים ופיברו-דלקתיים ממחסני שומן תוך-בטניים של מורין

אנו מציגים שיטה פשוטה לבודד תאי אב שומן קיימא מאוד מרפידות שומן אפידיליות עכבר באמצעות מיון תאים המופעלים פלואורסצנטיות.

הכנת תאי אדיפוס אבות מרקמות שומן אפידימליות עכבר

הפרוטוקול הנוכחי מתאר מתודולוגיה משופרת לבידוד ADSC וכתוצאה מכך תפוקה תאית אדירה עם רווח בזמן בהשוואה לספרות. מחקר זה מספק גם שיטה פשוטה להשגת מספר גדול יחסית של תאים בני קיימא לאחר שימור בהקפאה לטווח ארוך.

טכניקה לקבלת תאי גזע מזנכימליים מרקמת שומן ואפיון שבר כלי דם סטרומלי בשימור בהקפאה ארוכת טווח

מוצרים קסנוגניים (כימיים או מן החי) שהוכנסו בשלבי ההכנה/מניפולציה של הטיפול התא קשורים לסיכון מוגבר לתגובתיות חיסונית ולהעברה פתוגנית בחולים מארחים. כאן מתוארת שיטה שלמה נטולת קסנוגנים לבידוד והרחבה חוץ גופית של תאי גזע שמקורם בשומן אנושי.

בידוד ותרבית של תאי גזע שמקורם בשומן אנושי בשיטה חדשנית נטולת קסנוגניות לטיפול בבני אדם

פרוטוקול זה מתאר מתודולוגיה לבידוד וזיהוי תאי גזע מזנכימליים (MSC) שמקורם ברקמת שומן מחולדות Sprague Dawley.

בידוד וזיהוי תאי גזע מזנכימליים שמקורם ברקמת שומן של חולדות Sprague Dawley

פרוטוקול זה מתאר את כל ההליכים, החל מגידול תאי גזע מזנכימליים שמקורם בשומן אנושי (ADSCs) ואיסוף סופרנאטנט ועד לחילוץ בועיות חוץ-תאיות (EVs) באמצעות אולטרה-צנטריפוגה.

טיהור ואפיון שלפוחיות חוץ-תאיות מתאי גזע מזנכימליים שמקורם בשומן אנושי

כאן אנו מציגים שיטה סטנדרטית לבידוד יעיל של תאי גזע ומגדלי שומן שמקורם בשומן, המאופיינת בהפחתה של &gt;90% בזמן העיבוד, חיוניות תאית גבוהה ותאימות רחבה.

בידוד יעיל של תאי גזע ושומנים שמקורם בשומן מרקמת שומן חזיר

למדו להפריד תאי גזע מזנכימליים Sca1 חיוביים מרקמת שומן עכברית באמצעות מיון תאים אימונומגנטי. שיטה זו מאפשרת העשרת ASCs ממאגרי שומן שונים למחקר ביולוגי.

הפרדת immunomagnetic של שומן דיפו ספציפי Sca1

גלה סרטונים נוספים