Name: שיטת מיקרו-חרוזים מגנטיים מהירה לטיהור יעיל של נויטרופילים בצפיפות נמוכה (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-11-11T14:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 14 s
Description: למד שיטה מהירה לבידוד נויטרופילים בצפיפות נמוכה באמצעות חרוזים מגנטיים וסרכוז בגרדיאנט צפיפות. הפרוטוקול מספק תאים טהורים וחיים לחקר תפקודים אימונולוגיים במחלות שונות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<table><tbody><tr><td>&nbsp; נוגדן פוליקלונלי לארנב אנטי-ציטרולין</td><td>AbCam</td><td>ab100932</td><td>דילול של 1/50</td></tr><tr><td>לוח תרבית רקמות עם 96 בארות</td><td>Costar; קורנינג, בע"מ.</td><td>3596</td><td></td></tr><tr><td>אלקסה פלואור 488 נוגדן עכבר CD11b אנטי-אנושי IgG1</td><td>ביולג'נד</td><td>301317</td><td>0.25 & mu; g/mL</td></tr><tr><td>נוגדן IgM עכבר CD66b אלקסה פלואר 647 אנטי-אנושי</td><td>ביולג'נד</td><td>305109</td><td>0.05 & mu; g/mL</td></tr><tr><td>נוגדן עז נגד עכבר IgG (H+L), Alexa Fluor 488</td><td>Invitrogen - תרמו פישר סיינטיפיק</td><td>A-11001</td><td>דילול של 1/50</td></tr><tr><td>נוגדן IgG1 מונוקלונלי של עכבר אנטי-נויטרופילי</td><td>ביוטכנולוגיה של סנטה קרוז</td><td>SC-55549</td><td>10 ומיקרו; g/mL</td></tr><tr><td>נוגדן לחמור אנטי-ארנב IgG (H+L), אלקסה פלואר 555</td><td>Invitrogen - תרמו פישר סיינטיפיק</td><td>A-31572</td><td>דילול של 1/50</td></tr><tr><td>נוגדן IgG1 עכבר CD62L אנטי-אנושי APC</td><td>ביולג'נד</td><td>304809</td><td>0.03 & mu; g/mL</td></tr><tr><td>נוגדן IgG1 עכבר CD14 אנטי-אנושי APC/Cyanine7</td><td>ביולג'נד</td><td>367107</td><td>0.25 & mu; g/mL</td></tr><tr><td>Attune NxT ציטומטר זרימה&nbsp;</td><td>תרמו פישר סיינטיפיק, בע"מ.</td><td>(לייזרים כחולים/אדומים)</td><td></td></tr><tr><td>אלבומין סרום בקר (BSA) Fraction V</td><td>ביומדיקל MP</td><td>810025</td><td></td></tr><tr><td>נוגדן IgG1 עכבר Brilliant Violet 510 אנטי-אנושי CD33</td><td>ביולג'נד</td><td>366609</td><td>0.30 & mu; g/mL</td></tr><tr><td>DAPI</td><td>קלביוכימ/EMD מיליפור</td><td>268298</td><td></td></tr><tr><td>דקסטרן T500</td><td>Pharmacosmos A/C</td><td>5.51005E+11</td><td></td></tr><tr><td>דיהידרורודמין-123</td><td>אנאספק, בע"מ.</td><td>AS-85711</td><td></td></tr><tr><td>מיון תאים של FACS</td><td>בקטון דיקינסון&nbsp;</td><td>דגם FACSAria</td><td></td></tr><tr><td>סרום בקר עוברי (FBS)</td><td>גיבקו</td><td>16000-044</td><td></td></tr><tr><td>פיקול-פאקה</td><td>מרק KG</td><td>GE 17-1440-03</td><td></td></tr><tr><td>נוגדן IgG1 לעכבר CD98 אנטי-אנושי FITC</td><td>ביולג'נד</td><td>315603</td><td>0.30 & mu; g/mL</td></tr><tr><td>FlowJo Software</td><td>בקטון דיקינסון</td><td>גרסה 10, 2019</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוסקופ הפוך עם פלואורסצנציה</td><td>אולימפוס</td><td>דגם IX-70</td><td></td></tr><tr><td>הפארין</td><td>Inhepar - PiSA Farmaceutica</td><td>3660149</td><td>5000 ממשק/מ"ל</td></tr><tr><td>הפס</td><td>סיגמא אולדריץ'</td><td>H7006</td><td></td></tr><tr><td>מיקרו-חרוזי כימריזם MACSprep CD66b</td><td>מילטני ביוטק</td><td>130-111-552</td><td></td></tr><tr><td>מגנט</td><td>מילטני ביוטק</td><td>130-042-102</td><td></td></tr><tr><td>עמודת הפרדה מגנטית</td><td>מילטני ביוטק</td><td>130-042-201</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוצנטריפוגה</td><td>אפנדורף</td><td>דגם 5415C</td><td></td></tr><tr><td>קורא מיקרופלט</td><td>ביו-טק אינסטרומנטס</td><td>Model Synergy HT</td><td></td></tr><tr><td>פאראפורמלדהיד</td><td>סיגמא אולדריץ'</td><td>158127</td><td></td></tr><tr><td>נוגדן IgG1 עכבר CD10 אנטי-אנושי PE</td><td>ביולג'נד</td><td>312203</td><td>0.05 & mu; g/mL</td></tr><tr><td>נוגדן IgG2a עכבר PE נגד אדם CD16b</td><td>BD פארמינגן</td><td>550868</td><td>דילול 1/40</td></tr><tr><td>PE/Cyanine5 נוגדן IgG1 לעכבר CD15 אנטי-אנושי</td><td>ביולג'נד</td><td>323013</td><td>0.25 & mu; g/mL</td></tr><tr><td>פורבול 12-מיריסטט 13-אצטט (PMA)</td><td>סיגמא אולדריץ'</td><td>P8139</td><td></td></tr><tr><td>פולי-אל-ליסין</td><td>סיגמא אולדריץ'</td><td>P2658</td><td></td></tr><tr><td>צנטריפוגה מקוררת</td><td>אפנדורף</td><td>דגם 5702R</td><td></td></tr><tr><td>מדיום תרבית רקמות RPMI-1640</td><td>גיבקו</td><td>23400-021</td><td></td></tr><tr><td>סיטוקס גרין</td><td>Molecular Probes, Inc.</td><td>S-7020</td><td></td></tr><tr><td>טווין-20&nbsp;</td><td>סיגמא אולדריץ'</td><td>P2287</td><td></td></tr><tr><td>וקטשילד</td><td>מעבדות וקטור</td><td>H-1000</td><td></td></tr></tbody></table>

שיטת מיקרו-חרוזים מגנטיים מהירה לטיהור יעיל של נויטרופילים בצפיפות נמוכה

Rapid Magnetic-microbead Method for Efficient Purification of Low-density Neutrophils

נויטרופילים בצפיפות נמוכה (LDN) אצל אנשים בריאים מייצגים כ-5% מה-PBMC (איור 2A). הפרוטוקול המתואר כאן מספק בדרך כלל LDN טהור (&gt; 90%). התאים גם מתאוששים ביעילות (תשואה בסביבות 98%) עם כדאיות גבוהה (&gt; 95%; איור 2B). לשם השוואה, LDN טוהר גם על ידי מיון תאים המופעל על ידי פלואורסצנט כפי שתואר קודם לכן22. בקצרה, PBMC סומנו בנוגדנים נגד CD16b ומוינו בסדרן תאים המופעל על ידי פלואורסצנט. LDN מוינו במשך 3 שעו...

Neutrophils, important leukocytes of innate immunity, have traditionally been considered a homogeneous cell population. Nevertheless, recent evidence has ...

rapid-magnetic-microbead-method-for-efficient-purification-low

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

אימונולוגיה וזיהומים

נויטרופילים הם בין התאים הראשונים להגיע באתר של התגובה החיסונית דלקתיות, ואת תפקידיהם מנגנוני נחקרו רבות במבחנה. אנו מדגימים תקן צפיפות שיפוע ההפרדה שיטה לבודד נויטרופילים האדם מן הדם כולו באמצעות כלי התקשורת ההפרדה זמינים מסחרית.

נויטרופילים בידוד פרוטוקול

הסרטון מסביר דרך לטהר תאי B על ידי מיקוד אימונומגנטי והפרדה מהשעיית תאי דם חד-גרעיניים היקפיים. השיטה כוללת סימון סוגי תאים לא רצויים עם נוגדנים או ליגנדים ספציפיים (הקשורים לחלקיקים מגנטיים) המכוונים לחלבונים ספציפיים על פני התא, כדי להתרוקן מתרחיף התא ההטרוגני על ידי הפרדה מגנטית.

ברירה אימונומגנטית שלילית: שיטה לטיהור תאי B מתאים חד-גרעיניים היקפיים בדם

בסרטון זה, אנו מתארים את ההליך לבידוד נויטרופילים בצפיפות נמוכה, או LDN, מנוזל שטיפת הצפק של מטופל אנושי לאחר הניתוח. כך ניתן להשתמש ב- LDNs המתקבלים בניסויים נוספים במורד הזרם כדי להבין את תפקידם בצמיחת הגידול והתקדמותו.

בידוד נויטרופילים בצפיפות נמוכה בצפק: טכניקה להשגת נויטרופילים בצפיפות נמוכה מנוזל שטיפת הצפק באמצעות מיון תאים מופעלים מגנטיים

אנו מתארים פרוטוקול לבידוד וטיהור של נויטרופילים ממח עצם בעכבר על ידי צנטריפוגה שיפוע הצפיפות ותיוג באמצעות צבעי CellTracker נויטרופילים. זה מייצג שיטה פשוטה, מהירה, לשחזור וחסכוני להשגת מספר גדול של נויטרופילים למחקרים תפקודיים במורד הזרם או ניסויי העברה ומעקב מאמצים.

בידוד, טיהור וסימון של נויטרופילים מח עצם עכבר ללימודים פונקציונליים וניסויי העברת מאמצת

נויטרופילים ממלאים תפקיד חשוב לא רק בהגנה על המארח מפני מיקרואורגניזמים פולשים, אלא גם מעורבים במעקב חיסוני אחר תאי גידול. כאן, אנו מתארים טכניקות הקשורות לבידוד נויטרופילים בעלי תכונות אנטי-גידוליות ושיטות לניטור תפקוד נויטרופילים נגד גידול במבחנה וב-vivo.

בידוד ואפיון של נויטרופילים עם תכונות אנטי-סרטניים

נויטרופילים הם הסוג הנפוץ ביותר של תאי דם לבנים. בידוד הנויטרופילים מדם אנושי בשיטת הפרדת שיפוע צפיפות והתמיינות של תאים פרומילוציטיים אנושיים (HL60) לאורך המסלול הגרנולוציטי מתוארים כאן; לבחון את תפקידם ברגישות של תאי לימפומה לחומרים אנטי-לימפומה.

בידוד נויטרופילים וניתוח כדי לקבוע את תפקידם רגישות תאים לימפומה לסוכנים טיפוליים

מוטציות ב לאוצין העשיר חזרה לחזור 2 גנים (LRRK2) לגרום למחלת פרקינסון תורשתית. פיתחנו שיטה קלה ואיתנה להערכת זרחון LRRK2 נשלט של Rab10 בדם היקפי הדם נויטרופילים. הדבר עשוי לסייע בזיהוי אנשים עם פעילות מסלול מוגברת של LRRK2 קינאז.

דם היקפי הדם נויטרופילים בידוד עבור חקירת פרקינסון הקשורים LRRK2 קינאז מסלול על ידי הערכת Rab10 זירחון

פרוטוקול זה מפרט שיטה לבידוד של נויטרופילים מדם שלם, מעילי באפי או ממברנות לויקפרזיס, השגת תשואה טובה, טוהר גבוה, והפעלת תאים מינימלית. אנו משתמשים טיהור הדרגתי, משקעים בתאי דם אדומים (RBC), ותסיסת RBC כדי לקבל הכנה נויטרופיל באיכות גבוהה / טוהר.

בידוד של נויטרופילים אנושיים מדמם שלם ומעילי באפי

מחקר זה מתאר שתי טכניקות לבידוד מלכודות נויטרופילים חוץ-תאיות (NETs) בשפע ממח עצם של חולדה. שיטה אחת משלבת ערכת בידוד נויטרופילים מסחרית עם צנטריפוגת שיפוע צפיפות, ואילו השנייה משתמשת רק בצנטריפוגה שיפוע צפיפות. שתי הגישות מניבות NETs פונקציונליים העולים על אלה של נויטרופילים היקפיים בדם.

גישה ייחודית לבידוד נויטרופילים ממח עצם של חולדה עם קיבולת דומה

פרוטוקול זה מפרט שיטה תואמת אוטומציה בתפוקה גבוהה לבידוד תאי דם חד-גרעיניים היקפיים אנושיים למטרות ביו-בנקאות ולמטרות אחרות.

בידוד תאי דם חד-גרעיניים היקפיים אנושיים ממעילי באפי באמצעות הפרדת חרוזים אימונומגנטית בתפוקה גבוהה

כאן, אנו מספקים גישה אמינה לבידוד נויטרופילים בצפיפות נמוכה ונורמלית מדם מלא באמצעות בידוד מגנטי (ברירה שלילית) ומדיום שיפוע צפיפות לא רציף. הוא מבטיח בידוד ללא נגיעה של תאים בעלי טוהר גבוה (≥93%), מה שמקל על ניתוח מדויק במורד הזרם של תת-אוכלוסיות נויטרופילים, חיוני להבנת תפקידיהם בבריאות ובמחלות.

בידוד ואפיון של נויטרופילים בצפיפות נמוכה ונורמלית מדם מלא

למד שיטה מהירה לבידוד נויטרופילים בצפיפות נמוכה באמצעות חרוזים מגנטיים וסרכוז בגרדיאנט צפיפות. הפרוטוקול מספק תאים טהורים וחיים לחקר תפקודים אימונולוגיים במחלות שונות.

שיטת מיקרו-חרוזים מגנטיים מהירה לטיהור יעיל של נויטרופילים בצפיפות נמוכה

גלה סרטונים נוספים