Summary
Kanser kök hücreleri (rulmanları) nedeniyle kemoterapi direncinin tümör nüks sorumlu tutulmaktadır. Biz seçimi ve yumurtalık kanseri hücre hatları CSCS genişlemesi için bir protokol optimize ettik. Kemoterapötik Sisplatin ile hücrelerin tedavisi ve biz yapışmayan CSC kültürler için zenginleştirmek medyayı teşvik kök hücre kültürleme tarafından.
Abstract
Kanser kök hücreler (rulmanları) yavaş bisiklet ve yüksek ölçüde proliferatif invaziv oluşturmak için asimetrik olarak bölmek farklılaşmamış hücreleri ve Kemorezistans tümör hücrelerinin bir alt kümesi olarak tanımlanmaktadır. Bu nedenle, CSCS terapötik hedef hücrelerin çekici bir nüfus vardır. CSCS kan, beyin, akciğer, sindirim yolu, prostat ve yumurtalık da dahil olmak üzere habis türde bir dizi katkı tahmin edilmektedir. Yalıtımlı ve CSCS için bir tümör hücre popülasyonu CSCS özellikleri, genetik ve tedavi yanıtı çalışma için araştırmacılar sağlayacaktır zenginleştirmek. Bu yeniden üretilebilir bir yumurtalık kanseri hücre hatları (SKOV3 ve OVCA429) yumurtalık kanseri için CSCS zenginleştiren bir protokol oluşturulur. Hücre hatları, 3 gün boyunca 20 uM Sisplatin ile tedavi edilir. Canlı kalan hücreler sitokinleri ve büyüme faktörlerini içeren bir serumsuz ortam içinde kök hücre izole edilir ve kültürlenmiştir. Biz k izole hücreler analiz ederek bu saflaştırılmış CSCS bir zenginleştirme göstermeknown hücre işaretçilerini Eki4, Nanog ve Prom1 (CD133) ve CD177 ve CD133 hücre yüzey ifadesine kaynaklanıyor. CSCS sergi kemoterapi direncinin artmıştır. CSCS izolasyonu için bu yöntem, kemoterapi ve tümör relaps CSCS rolü üzerinde çalışılması için yararlı bir araçtır.
Protocol
1. Hücre Yumurtalık Kanseri Hücre Hatları Kültür ve Floresan Etiketleme
- SKOV3 ortamı hazırlayın:% 10 fetal sığır serumu (FBS) ile desteklenmiş McCoy ortam, 0.1 mM L-glutamin, 50 U / ml penisilin ve 50 ug / ml streptomisin. % 10 FBS, 1 mM sodyum piruvat, 0.1 mM L-glutamin, 50 U / ml penisilin ile takviye edilmiş minimum gerekli ortamında (MEM) olarak OVCA429 hücreler ve 50 ug / ml streptomisin koruyun.
- % 5 CO2 ile 37 ° C de, nemlendirilmiş bir kuluçka makinesi içinde SKOV3 ve OVCA429 hücre çizgileri yayar. % 40-50 confluency hücreleri büyümek.
- In vitro ve in vivo olarak yaşamı sürdürme kabiliyetini izlemek amacıyla kırmızı flöresanlı proteinin (RFP) ifade eden hücreleri oluşturur.
- , RFP'yi tanımlayan SKOV3 hücreleri 72 saat boyunca oluşturmak üzere penisilin ve streptomisin yokluğunda SKOV3 ortama RFP ve 10 ug / ml polybrene ifade lentiviral parçacıkları ekleyin.
- 72 saat sonra, RFP flöresanla aktive edilen hücre Sorti pozitif hücreleri seçmekng (FACS) aşağıdaki gibi: tripsinize TTT TTT olmayan ifade eden hücreler, 5 dakika boyunca 125 x g'de santrifüj,% 0.1 BSA içeren PBS içinde 10 7 hücre / ml 'de tekrar süspansiyon hücreleri. Bir hücre sıralayıcı, sıralama parametrelerini belirlemek için non-RFP hücreleri kullanır. Sonra 561 nm lazer kullanarak yüksek RFP ifade hücreleri toplamak.
- Lentiviral plasmid, bir antibiyotik direnç kasedi ifade Alternatif olarak, eğer, uygun antibiyotik ile kültürlüme suretiyle TTT ifade eden hücreler için seçim (örneğin, 10 mg / ml Blasticidin). Not: toplu ile ve hücre türüne göre değişebilir kullanılması gereken lentiviral parçacıkların miktarı. Uygun Lentiviral titre her hücre tipi için belirlenmelidir.
Kanser Kök Hücre 2. Zenginleştirme
- 72 saat Sisplatinin 20 mcM SKOV3, SKOV3-RFP veya OVCA429 hücre hatları davranın. DİKKAT: Sisplatin toksiktir. Koruyucu giysi / eldiven kullanın ve cilt ve mukoza zarlarla temasından kaçının. Sisplatin i atmayınn atıksu.
- CSC ortamı hazırlayın: serumsuz DMEM / F12 ortamı 5 ug / ml insülin, 10 ng / ml insan rekombinan epidermal büyüme faktörü (EGF), 10 ng / ml temel fibroblast büyüme faktörü (bFGF), 12 ng / ml, lösemi önleyici faktörü ile desteklenmiş ve% 0.4 sığır serum albümini (BSA).
- Hücreleri tripsinize edin. Kültür CSC medyada hücreleri hayatta.
NOT: Kültür yapışmayan küresellerde 2 gün oluşturacaktır sonra. - Ortam hücre ihtiva eden ve 5 dakika boyunca 125 x g'de santrifüj toplayarak her 2 günde bir ortam değiştirme. Sonra taze CSC medya pelletini. Hücre sayımı ve tripan mavi dışlama yaparak her 2 gün canlılığı için hücreleri kontrol ediniz.
- (: 137 mM NaCI, 2.7 mM KCI, 11.9 mM fosfat tamponu, pH 7.4 PBS) ile daha sonra 5 dakika boyunca 129 xg santrifüj ve fenol ihtiva eden guanidinyum tiyosiyanat (RNA), fosfat tamponlu tuzlu solüsyon içinde topağın tekrar askıda bırakılmasıyla, daha başka deneyler için CSCS toplamak (akış sitometri için)% 0.1 BSA, ya da CSC medya devamhücrelerin kültürlenmesi.
- 20X ve 40X büyütmede ışık mikroskobu kullanılarak CSC hücre morfolojisi izleyin.
Kök Hücre markerleri Gen İfade Analizi ile 3. CSC Karakterizasyonu
- Ortam 5 dakika boyunca 129 x g'de santrifüje tabi tutarak, hücreleri ihtiva eden, toplama ve fenol ihtiva eden guanidinyum tiyosiyanat çözeltisi içinde topağın tekrar askıda bırakılmasıyla CSCS 3 preparatlar kazan (RNA ekstraksiyonu için diğer yöntemler de kullanılabilir).
- Üreticinin protokolüne göre TRIzol kullanılarak total RNA'nın hazırlanması. Bir ticari olarak temin edilebilen bir cDNA Ters Transkripsiyon kiti kullanılarak RNA'nın 0.1-1 ug tamamlayıcı DNA (cDNA) sentezleşmesi.
- Kantitatif ters transkripsiyon polimeraz zincir reaksiyonu (qRT-PCR) gerçekleştirin.
- Örnek başına 8 ul toplam QRT-PCR karışımı, astarlar, ve su içeren bir primer her set için master mix Makyaj (farklı fluorophoresle primerler aynı kuyuda çoğaltılabilir). Örneğin, oluşturmakEki4-FAM, Nanog-Hex, ve GAPDH-CY 5 için bir master karışımı. Nestin ve Prom1 için ayrı ana karışımları oluşturun. Örnek başına cDNA şablonunun 2 ul ekleyin.
NOT: Bu çalışma için, ve QRT-PCR ile Tablo 1'de listelenen primerleri kullanılarak gerçekleştirilmiştir. - Birden florofor saptayabilen gerçek zamanlı PCR termalcycler kullanılarak her numune için iki kopya halinde her ve QRT-PCR gerçekleştirin. Hiçbir şablon kontrolleri içerir.
- ΔΔC T metodunun kullanılması ile, her numune için, GAPDH ekspresyonu için kök hücre gen ekspresyonunu normalize.
- Örnek başına 8 ul toplam QRT-PCR karışımı, astarlar, ve su içeren bir primer her set için master mix Makyaj (farklı fluorophoresle primerler aynı kuyuda çoğaltılabilir). Örneğin, oluşturmakEki4-FAM, Nanog-Hex, ve GAPDH-CY 5 için bir master karışımı. Nestin ve Prom1 için ayrı ana karışımları oluşturun. Örnek başına cDNA şablonunun 2 ul ekleyin.
| Okt-4-FAM | Astar 1: 5'-CCCAAGGAATAGTCTGTAGAAGTG-3 ' |
| Astar 2: 5'-TGCATGAGTCAGTGAACAGG-3 ' | |
| FAM prob: 5'-CTTCCAAGC / ZEN / TGCCCACCTAACTTCT / 3IABkFQ -3 ' | |
| Nanog-HEX | Astar 1: 5'-CCTTCTGCGTCACACCATT-3 ' |
| Astar 2: 5'-AACTCTCCAACATCCTGAACC-3 ' | |
| HEX sistemi: 5'-CTGCCACCT / ZEN.CTTAGATTTCATTCTCTGGT / 3IABkFQ-3 ' | |
| GAPDH-CY5 | Astar 1: 5'-TGTAGTTGAGGTCAATGAAGGG-3 ' |
| Astar 2: 5'-ACATCGCTCAGACACCATG-3 ' | |
| CY 5 prob: 5'-AAGGTCGGAGTCAACGGATTTGGTC / 3IABRQSP-3 ' | |
| Nestin-FAM | Astar 1: 5'-AGGACCTGAGCGATCTGG-3 ' |
| Astar 2: 5'-CGTTGGAACAGAGGTTGGAG-3 ' | |
| FAM prob: 5'-AACTTTTCA / ZEN / GTAGCCCGCAGCC / 3IABkFQ -3 ' | |
| CD133-HEX | Astar 1: 5'-ACTCTCTCCAACAATCCATTCC-3 ' |
| Astar 2: 5'-AAACAATTCACCAGCAACGAG-3 ' | |
| HEX prob: 5'-ACAATCACT / ZEN / GAGCACTCTATACCAAAGCG / 3IABkFQ-3 |
QRT-PCR ile CSC karakterizasyonu için kullanılan Tablo 1. astarlar.
E_TITLE "> 4. Hücre Yüzeyi Etiketleri CD117 ve CD133 için analiz CSCS- Ortam hücre ihtiva eden ve 5 dakika boyunca 125 x g'de santrifüj toplayarak Hasat CSCS. Parçalamak için hücrelerin bir proteolitik-olmayan hücre ayırma çözeltisi 500 ul ilave edin. 5 dakika boyunca 125 xg'de Santrifüj hücreleri hücre dekolmanı kaldırmak için çözüm. Daha sonra, soğuk PBS ile iki kez yıkama hücreleri.
- Önce etiketleme hücrelere 1 saat boyunca normal bir büyüme ortamı içinde inkübe edin. 129 x g'de 5 dakika boyunca hücreleri aşağı Spin. Anti-CD133-PE ve anti-CD117-FITC ile% 0.1 BSA içeren PBS içinde süspansiyon hücreleri.
- 1% paraformaldehitte gecede hücreleri saptamak. Dikkat: Paraformaldehit toksik (şüpheli kanserojen) 'dir. Davlumbaz yapın ve bir hafta içinde kullanın.
- (PE konjüge edilmiş bir anti-CD133) ile ve CD133 bir akış sitometre üzerinde hücre yüzey ifadesi (bir FITC konjüge edilmiş bir anti-CD117) ile CD117 analiz etmek için akış sitometrisi gerçekleştirin. Kanalları (PE için) (FITC'ye için) FL1 ve FL3 hücreleri hakkında veri toplamak. Her iki ifade eden hücreler için geçitler oluşturmakFITC ve PE'nin. 4 kadranda (FITC- ve Beden, FITC + ardmdan PE-, FITC- PE + ve FITC + ve PE +) ile bir nokta arsa üretmek ve her çeyrekte hücrelerin sayısını belirlemek.
5. Tedavi Tepki için CSCS Analiz
- Plaka, gece boyunca 96 oyuklu plakalar üzerinde 5000 hücreleri, çukur başına (SKOV3, SKOV3-RFP SKOV3 CSC ve SKOV3-TTT rulmanları).
- 96 saat boyunca sisplatin (0, 1, 10, 100 ve 1000 uM) ya da paklitaksel (0, 0.01, 0.1, 1, 10 ve 100 uM) ile tedavi edilir.
- MTT (3 (4,5-dimetiltiazol-2-il) -2,5-difeniltetrazolyum bromür) hücre canlılığı deneyi gerçekleştirin.
- 96 oyuklu bir plaka üzerinde oyuk başına 100 ul başına levhalar 5000 hücreleri (kopya halinde levha hücreler ve ortam, sadece kontrol yuvalarına dahil).
- 24 saat sonra 10 mg / ml MTT 10 ul ekle. (Çökelti oluşana kadar) 2-4 saat boyunca 37 ° C'de inkübe edilir.
- MTT çözücü 4 mM HCI 100 ul izopropanol içinde% 0.1 NP-40 ekleyin. Karanlıkta 15 dakika boyunca inkübe edin.
- R, bir plaka üzerinde, 570 nm de TabaklareaDeR.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Biz sisplatin tedavisi ile epitelyal yumurtalık kanseri hücre çizgilerinden CSCS izole edilmiş olduğunu göstermek için, ilk olarak, tedaviden önce ve sonra seçim hücre çizgilerinin görüntüleri elde. Biz yapışmış (işlenmemiş) SKOV3 ve OVCA429 hücreleri ve SKOV3 ve OVCA429 CSCS (Şekil 1) görüntüleri yakalamak için ışık mikroskobu kullanılmaktadır. CSCS doku kültürü plakalarına bağlı yuvarlak olup görünen (Şekil 1 ve 2). Biz ayrıca RFP ile transduse SKOV3 hücreleri hücreleri (Şekil 2B) uygulanabilir olduğunu gösteren CSCS izolasyonundan sonra, floresans tuttuğunu göstermektedir.
Canlı CSC kültürler ilaç tedavisine verdikleri yanıt açısından değerlendirildi. CSCS sisplatin (özellikle de 100 uM) ve paklitaksel (10 uM) (Şekil 3) bağlı olarak artan bir direnç göstermişlerdir. CSCS genellikle kök hücre genlerin kendi ekspresyonu ile karakterize edilir. CD133 sentezlenmesi (aynı şekilde bilinmektedir Prom1), Nestin, Nanog ve Eki4 incelenmiştir. CD133 önemli tedavi edilmemiş (kontrol) hücreleri (Şekil 4A) ile karşılaştırıldığında SKOV3 CSC kültürleri oluşturuldu. CD133 ayrıca 16 kat ve OVCA429 ve OVCA429-TTT hücrelerinde 13 kat muamele edilmemiş kontroller ile karşılaştırıldığında CSC kültürlerde görülmüş oldu (veriler gösterilmemiştir). İlk deneylerde Eki4, Nanog ve Nestin işlenmemiş göre SKOV3 CSC kültürlerde yükseldi ancak sonuçlar istatistiksel olarak anlamlı (Şekil 4A) değildi. Bu deneyler sırasında tekrar Eki4 ve Nanog ebeveyn kontrolü hücreleri (Şekil 4B) ile karşılaştırıldığında SKOV3 CSCS artmıştır. Eki4 4.7-kat ve CSC zenginleştirme protokolü takip OVCA429 ve OVCA429-TTT hücrelerinde 8-kat artmıştır (gösterilmemiştir). Son olarak, SKOV3 CSCS sergiler (Şekil 5) CSC işaretleyici CD117 hücre yüzey ekspresyonunu artırmıştır. Sonuç olarak, bu yöntem, yumurtalık kanserinde canlı küremsi CSCS ifade (kök hücre işaretleyicileri) seçilmesine izin verirkök hücre medya sisplatin ve büyüme ile seçilmesi ile hücre çizgileri dahildir.
SKOV3 ve OVCA429 hücreler. Faz kontrast mikroskobu SKOV3 ve OVCA429 hücrelerini tedavi edilmemiş ve CSCS (sfero) için seçilmiştir (yapışık) tasvir seçilen SKOV3 ve OVCA429 hücrelerin ve kanser kök hücreleri Şekil 1. Morfoloji (rulmanları).
CSCS Şekil 2. zenginleştirilmesi yapışmayan sferoidler elde edilir. (A), SKOV3 hücreleri (60x büyütme). (B), muamele edilmemiş olan SKOV3-TTT hücreleri, işlemden geçirilmemiş ve CSCS için zenginleştirilmiş bir (a ve b) veya CSCS için zenginleştirilmiş bir (C d). Sol paneller faz kontrast görüntüleri tasvir ve sağ panelleri floresan betimliyor. Orijinal büyütme 40X. Ölçü bar = 400 mikron.
Şekil 3. CSCS sergi muamele edilmemiş hücre kuşakları ile karşılaştırıldığında kemoterapi direncinin yükselmiştir. SKOV3 (A ve B) ve SKOV3-TTT (C ve D), SKOV3 CSCS (A ve B) ve SKOV3-TTT CSCS (C ve D) ile muamele edildi, çeşitli sisplatin (A ve C) veya paclitaxel (Taxol) ve (B ve D) konsantrasyonları. 96 saat sonrası tedavi MTT deneyi yapıldı. Deneyler n≥3 yapıldı ve istatistik İki Yönlü ANOVA kullanılarak hesaplanmıştır; * P <0.05, *** p < ,. 0,0005 , bu rakamın büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayınız.
Muamele edilmemiş hücreler ile karşılaştırıldığında CSCS Şekil 4. Kök hücre markör ifade. Ve QRT-PCR analizi, (A), CD133 (Prom1), Nestin, Nanog. SKOV3 (kontrol) ve SKOV3 CSCS uygulandı ve Oct4 (GAPDH normalize edilmiştir). ( B) SKOV3-TTT CSCS muamele edilmemiş hücreler ile karşılaştırıldığında artmış Oct4 ve Nanog'un bu protokol verim hücrelerden elde edilen gösteren ek bir deney. Sonuçlar GAPDH ifade ile normalize edildi. N = 3 ve istatistik öğrencileri T-testi kullanılarak hesaplanmıştır; ** P <0.02, *** p <0.002.
5 "fo: İçerik-width =" 5in "src =" / files / ftp_upload / 51891 / 51891fig5highres.jpg "width =" 500 "/>
SKOV3 hücreleri kök hücresi belirleyicilerinin Şekil 5. Akış Sitometri Analizi ve SKOV3 CSCS tek başına ya da transduse edilmiş veya RFP yoktur., CD133, CD117, CD133 ve (A) 'de SKOV3 / sentezleme CD117 (muamele edilmemiş / kontrol) hücreleri (B) SKOV3 CSCS, (C)-TTT işlenmemiş SKOV3 hücreleri, ve (D)-SKOV3 RFP CSCS. Deneyler üç nüsha olarak yapılmıştır. , bu rakamın büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayınız.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Tedavisine dirençli CSCS primer tümörün tedavisi sonrası nüks sorumlu olabilir. CSCS karakterizasyonu yumurtalık kanseri gelişmiş terapi yöntemlerine yol açabilir. Yukarıdaki protokol kullanılarak Kemorezistans CSCS kurulmasında önemli parametreler kemoterapi ile tedavi uzunluğu ve kemoterapi konsantrasyonunu zamanlama. Ma ve arkadaşları protokolünü kullanırken. Bu sisplatin ve paklitaksel ile tedaviden 7 gün sonra canlı hücre kalmamıştır 4 kaldığı tespit edildi. (20 uM sisplatin yerine 40 uM ve 10 uM sisplatin paklitaksel) 3 gün tedavi azaltarak, canlı hücreler ve Kemorezistans CSCS geliştirdi. Uzunluğu ve doz, farklı tedavi yumurtalık kanseri hücre çizgileri için değiştirilmesi gerekebilir.
Bu protokolün önemli kısıtlılığı CSCS canlı kalır uzunluğudur. Bu protokolü kullanarak, CSCS bir haftadan az süre canlı kalır. Bu nedenle, THCSCS için deney ve analizler e tür dikkatli bir şekilde zamanlandığında gerekir.
CSCS başka karakterizasyonu gerçekleştirilmesi gerekmektedir. Bu hücre türleri arasındaki benzerlik ve farklılıklarını belirlemek için CSC nesil diğer yöntemlere CSCS bu yöntemi karşılaştırmak yararlı olacaktır. In vivo analizi için kök hücre belirteçleri, tedaviye yanıtın ve en iyi sistemin karşılaştırılması CSCS Üreten / seçimi için farklı yöntemler arasında yürütülen gerekmektedir. Bu kök hücre belirteçlerinin farklı ifade kalıpları ve hastalar 10-12 farklı prognoz, yardımcı olabilir bu protokol tarafından oluşturulan CSCS ne tür böylece daha fazla tanımı ile CSCS farklı türleri insan malignite ilişki nasıl belirlemek olduğu ileri sürülmüştür . Son olarak, sırayla titizlikle hücreler, sınırlayıcı seyreltme deneyinde, immün sistemi zayıf farelere enjekte edilmesi gerekir, bu protokol izole CSCS kesin CSCS olduklarını göstermek için. BuDeney CSCS, düşük yoğunlukta over tümörlerini oluşturmak mümkün olduğunu göstermektedir.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| McCoy | Life Technologies | 16600-108 | Warm to 37 °C prior to use |
| DMEM / F12 serum free | Life Technologies | 11320-033 | Warm to 37 °C prior to use |
| Minimal Essential Media | Life Technologies | 42360032 | Warm to 37 °C prior to use |
| Sodium pyruvate | Life Technologies | 11360070 | |
| Polybrene | Millipore | TR-1003-G | |
| Blasticidin | Life Technologies | R21001 | |
| Fetal Bovine Serum | Atlas Biologicals | F-0500-A | |
| Penicillin-streptomycin | Life Technologies | 15070-063 | |
| Cisplatin | Sigma-Aldrich | T7402-5MG | Caution: Toxic. Use precautions |
| pLenti-suCMV-Rsv | Gentarget | LVP023 | BSL2 approval needed |
| Insulin | Sigma-Aldrich | I-1882 | |
| Human Recombinant EGF | Cell Signaling Technology | 8916LC | |
| bFGF | BD biosciences | 354060 | |
| LIF | Santa Cruz | sc-4988A | |
| Bovine Serum Albumin | Roche | 03 116 956 001 | |
| TRIzol | Life Technologies | 15596-018 | |
| High Capacity cDNA Reverse Transcription Kit | Applied Biosystems | 4368813 | |
| IQ Multiplex Powermix | BioRad | 1725849 | |
| Accumax | Millipore | ||
| Primers | Integrated DNA Technology | individually designed and ordered (see protocol for sequnces) | |
| Anti-CD133 PE | Milenyl | 130-098-826 | Primer/probe sets are light sensitive |
| CD117-Biotin | Miltenly | 130-098-570 | |
| AntiBiotin-FITC | Miltenly | 130-098-796 | |
| Paraformaldehyde | Sigma-Aldrich | P6148-1KG | Caution: Toxic. Always prepare in hood and make fresh. |
| Trypsin | Life Technologies | 25300062 | |
| MTT (3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide) | Sigma-Aldrich | 25200-072 | |
| EVOS Fl Epifluorescence and Transmitted Light Microscope | Advanced Microscopy Group | ||
| Biorad CFX96 C1000 System | Biorad | ||
| Beckman Coulter FC500 Flow Cytometer | Beckman Coulter | ||
| Spectramax 340PC384 | Molecular Devices |
References
- Pennington, K., Pulaski, H., Pennington, M., Liu, J. R. Too Much of a Good Thing: Suicide Prevention Promotes Chemoresistance in Ovarian Carcinoma. Curr Cancer Drug Targets. 10, 575-583 (2010).
- Thigpen, T. A rational approach to the management of recurrent or persistent ovarian carcinoma. Clin Obstet Gynecol. 55, 114-130 (2012).
- Burgos-Ojeda, D., Rueda, B. R., Buckanovich, R. J. Ovarian cancer stem cell markers: prognostic and therapeutic implications. Cancer letters. 322, 1-7 (2012).
- Ma, L., Lai, D., Liu, T., Cheng, W., Guo, L. Cancer stem-like cells can be isolated with drug selection in human ovarian cancer cell line SKOV3. Acta Biochim Biophys Sin (Shanghai). 42, 593-602 (2010).
- Bonnet, D., Dick, J. E. Human acute myeloid leukemia is organized as a hierarchy that originates from a primitive hematopoietic cell. Nature Medicine. 3, 730-737 (1997).
- Alison, M. R., Lim, S. M., Nicholson, L. J. Cancer stem cells: problems for therapy. The Journal of pathology. 223, 147-161 (2011).
- Luo, X., Dong, Z., Chen, Y., Yang, L., Lai, D. Enrichment of ovarian cancer stem-like cells is associated with epithelial to mesenchymal transition through an miRNA-activated AKT pathway. Cell proliferation. 46, 436-446 (2013).
- Wang, L., Mezencev, R., Bowen, N. J., Matyunina, L. V., McDonald, J. F. Isolation and characterization of stem-like cells from a human ovarian cancer cell line. Molecular and cellular biochemistry. 363, 257-268 (2012).
- Abubaker, K., et al. Short-term single treatment of chemotherapy results in the enrichment of ovarian cancer stem cell-like cells leading to an increased tumor burden. Molecular cancer. 12, 24 (2013).
- Conic, I., Dimov, I., Tasic-Dimov, D., Djordjevic, B., Stefanovic, V. Ovarian epithelial cancer stem cells. ScientificWorldJournal. 11, 1243-1269 (2011).
- Liu, K. C., et al. Ovarian cancer stem-like cells show induced translineage-differentiation capacity and are suppressed by alkaline phosphatase inhibitor. Oncotarget. 4 (12), 2366-2382 (2013).
- Liu, T., Cheng, W., Lai, D., Huang, Y., Guo, L. Characterization of primary ovarian cancer cells in different culture systems. Oncology reports. 23, 1277-1284 (2010).
