תאים אפיתל עכבר החלב טופס Mammospheres במהלך התמיינות Lactogenic
October 6th, 2009
HC11 בידול lactogenic יכול להיות מאופיין על ידי היווצרות של מבנים כיפה המכונה mammospheres. מבנים ניתן המנויים על ידי מיקרוסקופ לעומת שלב כדי לסייע לכימות בידול lactogenic.
היי, אני בת'אני מוריסון מהמעבדה של ד"ר מרי לו קאטלר במחלקה לפתולוגיה באוניברסיטה למדעי הבריאות. היום נראה לכם הליך להתפתחות כדורי ממו מתאי אפיתל של עכברים HC 11. אנו משתמשים בהליך זה במעבדה שלנו כדי לחקור התמיינות לקטו.
אז בואו נתחיל להתחיל את הפרוטוקול הזה. תאי HC 11 גדלים למפגש במשך שישה ימים במדיום RPMI 1640, המתווסף ל-10% סרום עגל עוברי חמישה מיקרוגרם למיליליטר אינסולין, 10 מיקרו-מולרי הייס ו-10 ננוגרם למיליליטר. גורם גדילה אפידרמיס EGF כדי לבסס כשירות.
תאים אלה שימשו רבות על ידי המעבדות של ננסי היינס וברנרד גרונר כדי לחקור את ויסות ההתמיינות הגנטית במכסה המנוע של תרבית הרקמה. לאחר מכן נשטפים התאים עם PBS ונשמרים במצע גידול ללא EGF למשך 24 שעות. לאחר דגירה זו, התאים מודגרים במצע התמיינות המורכב מ-RPMI בתוספת אינסולין דקסמתזון ופרולקטין על מנת לגרום להתמיינות לקטו לאחר הדגירה.
במדיית הבידול משתמשים במיקרוסקופ אולימפוס IX 71 המצויד במצלמה דיגיטלית לצילום וספירת כדורי הממו. במיקרוסקופ ניגודיות פאזה כדורי מאמו מצולמים ונספרים מספר פעמים עד 120 שעות לאחר האינדוקציה. תמונה זו מציגה הגדלה בהספק נמוך של זיכרון רגיל.
יש לשמור על תאים חד-שכבתיים של תאי אפיתל במפגש במשך כשלושה ימים לפני גירוי עם הורמונים גנטיים. הנה מבט על כדורי ממו חדשים שנוצרו שלושה ימים לאחר האינדוקציה בהגדלה בעוצמה נמוכה. הם מתחילים להופיע כמבנים דמויי כיפה קטנים המרווחים באופן אקראי בכל תאי האפיתל.
שוב בהספק נמוך. הנה מבט על מספר כדורי ממו שהתפתחו חמישה ימים לאחר האינדוקציה. כדורי המאמו המשיכו לגדול הן בגודלם והן במספרם כאן בהגדלה גבוהה, ניתן לראות בבירור את הבועה או הכיפה האופיינית לכדור המאמוס.
זה עתה הראינו לכם כיצד לגרום לתאי אפיתל זיכרון, כך שהם ייצרו כדורי ממו, המשמשים כסמנים של התמיינות גנטית. בעת ביצוע הליך זה, חשוב לזכור לשמור על תאי המפגש לפני האינדוקציה מכיוון שבמהלך תקופה זו, התאים מייצרים חלבוני מטריצה איתם הם צריכים לקיים אינטראקציה על מנת להיות בטוחים לחלוטין להגיב להורמונים גנטיים. חשוב גם לזכור להסיר את ה-EGF מהמדיה לפני הטיפול מכיוון שה-EGF יעכב את תהליך ההתמיינות.
אז זהו. תודה על הצפייה ובהצלחה בניסויים שלך.
View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos
סקירה
מאמר זה מציג נוהל לפיתוח ממוספירות מתאי אפיתל מבלוטות החלב של עכבר HC11, המשמשים לחקר דיפרנציאציה לקטוגנית. ניתן לכמת את היווצרות המבנים הללו באמצעות מיקרוסקופיית ניגודיות פאזה.
רכיבי מחקר עיקריים
תחום המדע
- ביולוגיית תאים
- מדעי המוח
- ביולוגיה התפתחותית
רקע
- תאי HC11 הם מודל לחקר ביולוגיה של בלוטת החלב.
- ממוספירות מצביעות על דיפרנציאציה לקטוגנית.
- מיקרוסקופיית ניגודיות פאזה משמשת לכימות.
- הבנת הדיפרנציאציה הלקטוגנית היא חיונית להבנה של התפתחות בלוטת החלב.
מטרת המחקר
- להדגים את התפתחות הממוספירות מתאי HC11.
- לספק פרוטוקול לחקר דיפרנציאציה לקטוגנית.
- להעמיק את ההבנה של התנהגות תאי האפיתל של בלוטת החלב.
שיטות ששימשו
- תאי HC11 מתורבתים במדיום RPMI 1640.
- המדיום מועשר בסרום עגל עוברי, אינסולין, Heiss ו-EGF.
- התאים גדלים עד לקונפלונציה לאורך שישה ימים.
- מיקרוסקופיית ניגודיות פאזה משמשת לספירת הממוספירות.
תוצאות עיקריות
- ממוספירות נוצרות בהצלחה מתאי HC11.
- כימות הממוספירות מסייע בהערכת הדיפרנציאציה הלקטוגנית.
- הפרוטוקול מספק תוצאות ניתנות לשחזור למחקרים נוספים.
- התובנות שנרכשו יכולות להעיד על מחקרים בנושא התפתחות בלוטת החלב.
מסקנות
- הנוהל מדגים ביעילות את הדיפרנציאציה הלקטוגנית.
- ממוספירות משמשות כמודל חשוב למחקר נוסף.
- מחקרים עתידיים יכולים לבנות על מתודולוגיה זו כדי לחקור את ביולוגיה של בלוטת החלב.
