Name: Un modello di Disturbed flusso indotta aterosclerosi carotidea in Arteria mouse da legatura parziale e un semplice metodo di isolamento dellRNA da Endotelio carotidea (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-06-22T17:30:00.000+00:00
Duration: 11 min
Description: Scopri un modello chirurgico di ligatura carotidea parziale nel topo per indurre flusso disturbato e aterosclerosi rapida, con verifica ecografica e isolamento di RNA endoteliale ad alta purezza per studi di espressione genica.

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Questo lavoro è stato supportato da finanziamenti dal NIH concede HL87012 (HJ), HL75209 (HJ), UO1HL80711 (DH, DG, HJ) e una World Class University Project (HJ) da parte del Ministero di Scienza, Tecnologia e Istruzione della Corea del Sud.

1. Legatura parziale della carotide sinistra <ol><li> I topi sono utilizzati a ~ 8 settimane di età. Il peso dei topi si raccomanda di avere almeno 18 grammi. </li><li> Sterilizzare gli strumenti per 30 secondi in sterilizzatore strumento tallone e lasciare raffreddare </li><li> Indurre l'anestesia con ketamina (80mg/kg) e xilazina (10mg/kg) anestesia intraperitoneale (ip) iniezione o alternative come approvato dalla IACUC. Per l'iniezione ip, iniettare del mouse nel quadrante in basso a sinistra dell'addome. </li><li> Del mouse posto in una camera di riscaldamento fino a completa anestetizzati. Verificare profondità dell'anestesia con risposta a pizzico piedi. </li><li> Posizionare il mouse su un palco chirurgico, in posizione supina (pancia verso l'alto) posizione. Il nastro zampe anteriori palme e le zampe posteriori solo fino al palco. </li><li> Applicare quantità liberale di agente depilatorie (ad esempio Nair) al collo tra la mandibola e lo sterno. Massaggiare delicatamente fino a quando tutti i capelli è stato rimosso. </li><li> Pulire l'agente depilatorie e applicare quantità liberale di Betadine a zona depilate. </li><li> Preparare 1 pollice-lunghi tratti di 6-0 sutura seta per legature. Ogni topo avrà bisogno di due pezzi di sutura. </li><li> Utilizzando un piccolo forbici affilate, fare una 4-6mm incisione verticale al centro del collo. Sia la pelle e la fascia sottostante devono essere tagliate. </li><li> Spostare la ghiandola parotide sinistra dalla linea mediana a sinistra e cominciare senza mezzi termini dissezione appena a destra della trachea. Dovreste essere in grado di identificare il pulsante carotide comune sinistra facilmente. </li><li> Seguire la carotide comune caudalmente fino a individuare la biforcazione. </li><li> Senza mezzi termini sezionare la biforcazione per esporre i seguenti quattro rami distali al largo della sinistra arteria carotide comune: arteria carotide esterna, interna dell'arteria carotide, l'arteria occipitale e l'arteria tiroidea superiore. Questi vasi, tiroide soprattutto superiore, può essere fragile. State molto attenti con i vostri dissezione. </li><li> Legare la carotide esterna SOPRA il tiroidea superiore utilizzando 6-0 sutura di seta. Per fare questo, passare una pinza sotto l'arteria e afferrare un pezzo di sutura pretagliati con l'aiuto del vostro pinze altri. Tirare delicatamente la sutura di passare sotto l'arteria. Tie saldamente evitando qualsiasi tessuto circostante essere catturati nel nodo. Se si legano sotto il decollo dell'arteria tiroidea superiore, entro la fine della procedura si avrà effettivamente eseguito un completo legatura che è un modello sostanzialmente diverso. </li><li> Legare le arterie carotide interna e occipitale con un nodo con la stessa tecnica. </li><li> Verificare la posizione dei punti di sutura e la pervietà dell'arteria tiroidea superiore. </li><li> Approssimativa della pelle e la pelle chiudere con una piccola quantità di tessuto-Mend. </li><li> Topi posto in una camera di riscaldamento fino al recupero. Recupero richiede in genere 30 o 60 minuti. </li><li> Una singola dose di buprenorfina (0.1mg/kg) deve essere somministrata immediatamente dopo l'intervento chirurgico se l'anestesia utilizzati non fornire sollievo prolungato dolore (es. isoflurano per via inalatoria) o se l'animale è in difficoltà nelle prime 24 ore. Nella nostra esperienza, la dose di ketamina somministrata per l'anestesia analgesia fornisce sufficiente quando la chirurgia è eseguita da chirurgo esperto e non è necessario un ulteriore analgesia. </li></ol> 2. Ecografia carotidea esame <ol><li> Per convalidare se la legatura parziale indotto disturbato il flusso, il flusso carotideo devono essere esaminati uno giorni post-legatura </li><li> Indurre l'anestesia con isoflurano - box induzione dell'anestesia potrebbero essere utilizzati in caso di necessità </li><li> Luogo topi anestetizzati sul palco di imaging, lato pancia in su </li><li> Braccia e gambe a nastro ECG sensore sul palco di imaging </li><li> Defoliare collo mediante l'applicazione liberale di Nair (questo passo è necessario solo se non già fatto per la procedura di legatura) </li><li> Inserire termometro rettale per registrare la temperatura </li><li> Applicare Echo gel al collo </li><li> Avvio in B-mode. </li><li> Aereo Imaging dovrebbe essere di 90 ° (manopola della sonda deve essere rivolto verso il naso del mouse) </li><li> Abbassare la sonda sul collo del mouse fino a quando l'immagine è ottenuta. </li><li> Manipolare stadio a destra ea sinistra fino trachea (linea mediana struttura) viene identificato </li><li> Identificare sinistra arteria carotide comune </li><li> Fase di imaging inclinazione in modo che un angolo si crea tra il piano di imaging e la carotide. Quanto maggiore è questo angolo, migliore è il segnale Doppler sarà. </li><li> Luogo di impulsi Doppler in mezzo carotide comune sinistra. </li><li> Usa correzione angolare, se necessario. </li><li> Ripetere le misurazioni sulla carotide comune destra. </li><li> Successo legatura parziale della carotide comporterà riduzione complessiva del flusso (~ 80-90%) nella carotide comune sinistra rispetto al lato destro, con inversione del flusso verso l'ingresso aortica durante la diastole. </li><li> Una volta che le immagini soddisfacenti sono stati ottenuti, spegnere l'anestesia, gel per pulire echo off topi e topi privi di res nastrotraints. Posto i topi in camera di recupero riscaldato. </li></ol> 3. Intimale carotideo isolamento dell'RNA da <ol><li> Sacrificio topi da CO 2 inalazione secondo il protocollo istituzionale IACUC </li><li> Nastro le zampe di un tovagliolo di carta. </li><li> Tagliare la pelle del mouse dall'addome alla parte superiore del torace. </li><li> Aprire la parete addominale sotto la gabbia toracica con un paio di forbici affilate. </li><li> Sollevare lo sterno con una pinza e tagliare il diaframma, poi tagliare via la gabbia toracica per esporre il cuore. </li><li> Tagliare la vena cava con le forbici. </li><li> Pressione profumato (120 mmHg) per 2 o 3 minuti con soluzione fisiologica contenente 10 Unità / ml di eparina attraverso il ventricolo sinistro fino a quando i polmoni e il fegato diventare pallido. </li><li> Tagliare la pelle del collo e togliere tutto il grasso, muscoli e tessuti connettivi fino carotidi sono esposti. </li><li> Posizionare il mouse sotto un microscopio da dissezione. </li><li> Perforare un foro proprio sotto i siti legatura nella carotide sinistra per la perfusione secondo. </li><li> Pressione profumato di nuovo per circa 1 min con soluzione fisiologica contenente 10 Unità / ml di eparina attraverso il ventricolo sinistro, assicurandosi che la carotide sinistra è ben consultato attentamente. </li><li> Utilizzando una pinza punta fine e forbici piccola sorgente, rimuovere con attenzione il peri-avventiziale tessuti circostanti delle carotidi. Fare attenzione a non comprimere o allungare le carotidi durante questa fase di pulizia. </li><li> Tagliare la carotide sinistra tra l'arco aortico ed i punti di legatura al di sopra della biforcazione carotidea. </li><li> Tagliato l'arteria carotide destra tra il punto di diritto arteria succlavia ramificazione e la biforcazione carotidea. </li><li> Trasferimento delle carotidi di un piatto della cultura 35 mm, contenenti ghiacciata HBSS. Se necessario, rimuovere con cura ogni residuo peri-avventiziale tessuti. </li><li> Preparare una siringa per insulina (3 / siringa da 10 ml) con un ago 29g compilando con 150 microlitri di buffer di lisi QIAsol (Qiagen) per ogni carotide. </li><li> Inserire con cautela punta dell'ago in una fine della carotide. </li><li> Mentre si tiene la carotide e la punta dell'ago con una pinza, rapidamente (~ 1 sec) svuotare il buffer QIAsol lisi (150 microlitri) in una provetta 1,5 ml (eluato intima). </li><li> Sciacquare il rimanente carotide (media + avventizia), una volta in HBSS, mettetelo in una provetta da 1,5 ml, e snap-congelare in azoto liquido. </li><li> Eluato intima e il rimanente congelato vengono poi utilizzati per dell'intima o terreni di isolamento + avventizia RNA utilizzando il miRNeasy mini kit (Qiagen) secondo le istruzioni del produttore. </li></ol> 4. Rappresentante dei risultati: Siamo parzialmente legatura sinistro del mouse arterie carotidee e ecografia è stata effettuata il giorno successivo l'intervento. Come mostrato nella Figura 1, successo legatura parziale riduce velocità del flusso sanguigno e inverte il flusso (flusso disturbato) a sinistra, arteria carotide comune durante la diastole. Legatura parziale di ApoE knockout (KO) topi accompagnato da una dieta ricca di grassi provoca aterosclerosi robusta nella sinistra arteria carotide comune (LCA), ma non nella carotide controlaterale destro, da due settimane (Figura 2). RNA raccolti dal dell'intima carotidea contiene geni marcatori endoteliali come PECAM-1, mentre senza mediale geni marcatori delle cellule muscolari lisce come un-SMA (Figura 3). <img src="/files/ftp_upload/1861/1861fig1.jpg" alt="Figura 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 1"> Figura 1: Schema di anatomia carotidea e legature: Tre rami di sinistra dell'arteria carotide comune (LCA) [carotide esterna (ECA), arteria carotide interna (ICA), e l'arteria occipitale (OA)] sono stati legatura, lasciando l'arteria tiroidea superiore (STA) aperto. <img src="/files/ftp_upload/1861/1861fig2.jpg" alt="Figura 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 2"> Figura 2: Le immagini ecografiche mostrano profili di velocità del flusso e rivelano che la legatura parziale induce inversione del flusso (indicato dalle frecce) in LCA durante la diastole. Portata in RCA rimane invariato dopo la legatura. <img src="/files/ftp_upload/1861/1861fig3.jpg" alt="Figura 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 3"> Figura 3: la legatura parziale e dieta ricca di grassi induce rapidamente l'aterosclerosi in LCA di ApoE topi KO ApoE topi KO sono stati parzialmente legata e alimentato la dieta ricca di grassi per 1 a 3 settimane.. Sezioni congelate di LCA sono state colorate con Oil-Red-O. <img src="/files/ftp_upload/1861/1861fig4.jpg" alt="Figura 4" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 4"> Figura 4. Intimale Metodo di preparazione di RNA. Intimale RNA e mediale + avventizia (m + a) RNA sono stati ottenuti da sham-operati coronarica destra e sinistra in C57BL / 6 topi. RNA sono stati analizzati mediante semi-quantitativa RT-PCR (A) e qPCR (B, C) ​​per PECAM-1 e α-SMA utilizzando minori di 18 anni come un controllo interno. Grafici a barre sono media ± SEM, n = 3.

<ol><li>Korshunov, V. A., Berk, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flow-induced+vascular+remodeling+in+the+mouse%3A+a+model+for+carotid+intima-media+thickening%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Flow-induced vascular remodeling in the mouse: a model for carotid intima-media thickening.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 23 (12), 2185-2191 (2003).</li>
<li>Sullivan, C. J., Hoying, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flow-dependent+remodeling+in+the+carotid+artery+of+fibroblast+growth+factor-2+knockout+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Flow-dependent remodeling in the carotid artery of fibroblast growth factor-2 knockout mice.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 22 (7), 1100-1105 (2002).</li>
<li>Nam, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Partial+carotid+ligation+is+a+model+of+acutely+induced+disturbed+flow%2C+leading+to+rapid+endothelial+dysfunction+and+atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Heart+Circ+Physiol%22%5BJournal%5D)">Partial carotid ligation is a model of acutely induced disturbed flow, leading to rapid endothelial dysfunction and atherosclerosis.</a> Am J Physiol Heart Circ Physiol. 297 (4), H1535-H1543 (2009).</li>
</ol>

In questa procedura, corretta identificazione di tutti i rami della carotide comune tra cui la carotide esterna, carotide interna, arteria occipitale e l&#39;arteria tiroidea superiore è essenziale. E &#39;anche importante per verificare il modello di flusso utilizzando gli ultrasuoni, come dimostrato. Nelle nostre mani esperte, il nostro tasso di successo di interventi chirurgici legatura parziale basati sugli studi ecografia di più di 500 topi è migliore del 90%. Per la preparazione di RNA intimale carotideo, è import...

<table><tbody><tr><td>Soluzione fisiologica (cloruro di sodio 0,9%)</td><td>Baxter Internationl Inc.</td><td>2B1323</td><td></td></tr><tr><td>Siringa per insulina (siringa da 3/10 ml 29g)</td><td>Tyco Healthcare, Covidien</td><td>8881600145</td><td></td></tr><tr><td>HBSS</td><td>Cellgro</td><td>21-023</td><td></td></tr><tr><td>Kit miRNeasy mini (incluso QIAzol)</td><td>Qiagen</td><td>217004</td><td></td></tr><tr><td>Sistema di micro-imaging ad alta risoluzione Vevo 770</td><td>VisualSonics, inc.</td><td>a. Sistema Visualsonics 770 b. Piastra per imaging c. Sistema a rotaia integrato Vevo d. Testina di scansione RMV per topi</td><td>o sistema simile</td></tr><tr><td>Chirurgia in seta 6-0, sterile</td><td>Covidien</td><td>s-1172 c2</td><td></td></tr><tr><td>Forbici piccole</td><td>Roboz Surgical Instruments Co.</td><td>RS-5675</td><td>o simili</td></tr><tr><td>Pinze da dissezione</td><td>Roboz Surgical Instruments Co.</td><td>RS-5005</td><td>o simili</td></tr><tr><td>Tissue Mend II</td><td>Webster Veterinary</td><td>07-856-7946</td><td></td></tr></tbody></table>

un modello di disturbed flusso indotta aterosclerosi carotidea in arteria mouse da legatura parziale e un semplice metodo di isolamento dell&#39;rna da endotelio carotidea

A Model of Disturbed Flow-Induced Atherosclerosis in Mouse Carotid Artery by Partial Ligation and a Simple Method of RNA Isolation from Carotid Endothelium

Nonostante la ben nota stretta associazione, la prova diretta che collega il flusso disturbato per l&#39;aterogenesi è mancata. Recentemente abbiamo usato una versione modificata della carotide metodi di legatura parziale [1,2] per mostrare che induce acutamente condizioni di basso flusso e oscillatori, due caratteristiche fondamentali del flusso disturbato, nel topo l&#39;arteria carotide comune. Utilizzando questo modello, abbiamo fornito la prova diretta che il flusso disturbato porta infatti allo sviluppo dell&#39;aterosclerosi rapido e robusto nel topo knockout Apolipoproteina E [3]. Abbiamo anche sviluppato un metodo di preparazione endoteliale RNA con elevata purezza dalla carotide del mouse intima [3]. Utilizzando questo modello di topo e il metodo, abbiamo scoperto che la legatura parziale le cause della disfunzione endoteliale in una settimana, seguito dalla formazione dell&#39;ateroma robusto e rapido in due settimane in un modello murino iperlipidemici oltre a funzionalità di formazione di lesioni complesse, come neovascolarizzazione intraplaque da quattro settimane. Questa rapida<em&gt; In vivo</emModello&gt; e il endoteliale metodo di preparazione di RNA potrebbero essere utilizzati per determinare i meccanismi molecolari alla base del flusso-dipendente regolazione della biologia vascolare e malattie. Inoltre, potrebbe essere usato per testare diversi interventi terapeutici targeting disfunzione endoteliale e aterosclerosi nella durata dello studio considerevolmente ridotto.

Questo descrive un intervento parziale legatura della carotide, che causa condizioni di flusso disturbato e lo sviluppo dell&#39;aterosclerosi successivi (in due settimane) con intraplaque neo-vascolarizzazione (in quattro settimane) nel topo l&#39;arteria carotide comune. Abbiamo anche descritto un nuovo metodo di isolamento di RNA dal dell&#39;intima carotidea, fornendo RNA di elevata purezza endoteliali.

Un modello di Disturbed flusso indotta aterosclerosi carotidea in Arteria mouse da legatura parziale e un semplice metodo di isolamento dell&#39;RNA da Endotelio carotidea

Nonostante la nota stretta associazione, è mancata un'evidenza diretta che colleghi il flusso perturbato all'aterogenesi. Recentemente abbiamo utilizzato un... modificato...

In questo video viene dimostrata una chirurgia di legatura parziale della carotide, in cui l'arteria carotide esterna, l'arteria carotide interna e l'arteria occipitale vengono legate in un topo anestetizzato per indurre condizioni di flusso alterato e successivo rapido sviluppo di aterosclerosi. L'esito positivo dell'intervento viene verificato mediante ultrasuoni; successivamente, le carotidi legate e di controllo vengono prelevate dal topo sacrificato ed è ottenuto un RNA endoteliale ad alta purezza. Ciao, mi chiamo Doug Na, del laboratorio del dottor Jo della Divisione di Ingegneria Biomedica e di Cardiologia presso il Georgia Tech e l'Università Emory.Ciao, mi chiamo Amir Revan. Anch'io del JO Lab. Dimostrerò la verifica ecografica della legatura. E io sono CHI, anch'io del laboratorio di jaw.Dimostrerò oggi la preparazione dell'RNA interno. Vi mostreremo un procedimento per la legatura parziale della carotide, l'ecografia, la verifica della legatura e un metodo per l'isolamento dell'RNA intimale. Utilizziamo questo procedimento nel nostro laboratorio per studiare gli effetti dello stress tangenziale sull'aterosclerosi.Iniziamo. Prima di iniziare questa procedura, verificare la profondità dell'anestesia indotta da ketamina e xilazina in un topo di otto settimane mediante pinzatura del dito del piede. Posizionare il topo su un supporto chirurgico in posizione supina e fissare le quattro zampe al supporto, con i palmi rivolti verso l'alto.Quindi fissare con del nastro i piedi posteriori, con le piante rivolte verso il basso. Utilizzare una garza come cuscino per il collo del topo. Successivamente, applicare una quantità generosa di agente depilatorio sul collo dell'animale, tra la mandibola e lo sterno.Masseggia delicatamente la zona fino a quando tutti i peli non sono rimossi. Utilizzando un applicatore di cotone, rimuovi l'agente depilatorio. Quindi applica una quantità generosa di Betadine utilizzando un paio di forbici piccole e affilate.Eseguire un'incisione verticale di quattro-sei millimetri al centro del collo dell'animale, tagliando sia la pelle sia la fascia sottostante. Utilizzando pinze da dissezione, spostare delicatamente la ghiandola carotidea sinistra dalla linea mediana verso il lato sinistro dell'animale. Dissezionare in modo ottuso il tessuto mediante pinze da dissezione.Per evidenziare il polso carotideo comune pulsante. Seguire la carotide comune con delicatezza. Per individuare la biforcazione.Dissezionare con attenzione la biforcazione per esporre quanto segue: quattro rami distali dell'arteria carotide comune sinistra, l'arteria carotide esterna, l'arteria carotide interna, l'arteria occipitale e l'arteria tiroidea superiore. Questi vasi, in particolare l'arteria tiroidea superiore, possono essere molto fragili.Passare un paio di pinze sotto la carotide esterna al di sopra della tiroidea superiore e afferrare un pezzo lungo un pollice di sutura di seta 6-0 da un altro paio di pinze. Tirare delicatamente la sutura per farla passare sotto l'arteria. Legare saldamente la carotide esterna evitando qualsiasi tessuto circostante.Utilizzando la stessa tecnica, legare l'arteria carotide interna e l'arteria occipitale con un singolo nodo. Dopo aver verificato la posizione dei punti e la pervietà dell'arteria tiroidea superiore mediante ispezione visiva, riposizionare la ghiandola parotide, avvicinare i lembi cutanei e utilizzare pinze da tessuto per chiudere la pelle. Al termine della procedura chirurgica, posizionare il topo in una camera riscaldata fino al suo risveglio.Di solito da 30 a 60 minuti. I topi possono quindi essere trasferiti nella loro normale area di alloggio. Posizionare del cibo sul fondo della gabbia, poiché nei primi giorni i topi potrebbero avere difficoltà ad alzarsi per raggiungere il cibo.Deve essere somministrata una singola dose di buprenorfina il giorno successivo per il controllo del dolore. Un giorno dopo la legatura. Preparare l'animale anestetizzato con isoflurano per l'ecografia posizionandolo sul piano di imaging con la pancia rivolta verso l'alto.Fissare le braccia e le gambe al sensore dell'ECG con del nastro adesivo. Applicare il gel ecografico sul collo dell'animale. La temperatura corporea dell'animale deve essere monitorata per tutta la durata della procedura.Accendere il computer e il software di imaging. Selezionare l'utente e la sonda ecografica appropriati. Impostare l'ecografo sulla modalità bee.Quindi, con la manopola della sonda rivolta verso il muso del topo, abbassare la sonda sul collo del topo fino a ottenere un'immagine. Muovere la fase della sonda a destra e a sinistra finché non si riesce a identificare la trachea. Successivamente, individuare l'arteria carotide comune sinistra e inclinare la fase di imaging in modo da creare un angolo tra il piano di imaging e la carotide.Passare l'ecografia dalla modalità B al doppler a onda pulsata mantenendo la sonda al centro della carotide comune sinistra. Utilizzare la manopola di correzione dell'angolo per regolare l'angolo in modo che la linea di correzione sia parallela all'arteria carotide comune. Acquisire un'immagine premendo il pulsante di memorizzazione dell'immagine.Il profilo di velocità del sangue nella carotide comune verrà documentato. Ci si aspetta un'inversione del profilo di velocità durante la diastole. Ripetere i passaggi descritti sulla carotide comune destra per effettuare un confronto.La velocità sarà maggiore e non si osserverà inversione nel tronco comune della carotide destra. Una volta ottenute immagini soddisfacenti, spegnere l'anestesia ed eliminare il gel ecografico dal topo. Liberare il topo dai vincoli di nastro adesivo.Posizionare l'animale in una camera di recupero riscaldata. Il recupero dall'isoflurano inalato di solito avviene in meno di cinque minuti. Fissare con del nastro il cadavere di un topo eutanasizzato con anidride carbonica a un tovagliolo di carta utilizzando delle forbici.Tagliare la pelle del topo dall'addome fino alla parte superiore del torace. Quindi, utilizzando un paio di forbici affilate, aprire la parete addominale al di sotto della gabbia toracica con l'aiuto di pinze. Sollevare lo sterno e tagliare il diaframma.Rimuovere la gabbia toracica per esporre il cuore. Successivamente, tagliare la vena della VCA e, utilizzando un kit di perfusione a farfalla, effettuare una perfusione sotto pressione per due o tre minuti con soluzione fisiologica contenente 10 unità per millilitro di eparina attraverso il ventricolo sinistro, fino a quando i polmoni e il fegato diventano pallidi. Dopo la perfusione con soluzione fisiologica, tagliare la pelle del collo ed eliminare tutti i muscoli adiposi e i tessuti connettivi fino a esporre le arterie carotidi.Ora posizionare il mouse sotto un microscopio stereoscopico utilizzando un ago da 29 gauge per praticare un foro puntiforme appena al di sotto dei siti di legatura nella carotide sinistra per la seconda perfusione. Eseguire nuovamente la perfusione sotto pressione per circa un minuto attraverso il ventricolo sinistro, assicurandosi che la carotide sinistra sia adeguatamente perfusa al termine della seconda perfusione. Utilizzare pinze a punta fine e piccole forbici a molla per rimuovere con attenzione i tessuti periavventiziali che circondano le carotidi.Attenzione a non comprimere o stirare le carotidi durante questa fase di pulizia, che si trova ora tra l'arco aortico e i punti di legatura al di sopra della biforcazione carotidea. Recidere l'arteria carotidea sinistra tra il punto di biforcazione dell'arteria sottoclavia destra e la biforcazione carotidea. Recidere l'arteria carotidea destra.Trasferire le carotidi in una piastra per colture da 35 millimetri contenente HBSS freddo su ghiaccio. Rimuovere con attenzione qualsiasi tessuto periavventiziale residuo. Inserire una siringa per insulina con un ago da 29 gauge in una delle estremità di una carotide e afferrare contemporaneamente la carotide e la punta dell'ago con una pinzetta.Velocemente e con attenzione. Lavare ogni arteria carotidea con 150 microlitri di buffer di lisi cazo, raccogliendo il buffer in un tubo da 1,5 millilitri etichettato intima eit. Infine, risciacquare ogni arteria carotidea una volta in HBSS.Quindi posizionarlo in una provetta microcentrifuga da 1,5 millilitri etichettata come media più avventizia e congeliare rapidamente in azoto liquido. L'RNA può quindi essere estratto dai campioni congelati utilizzando gin.Kit mini Micro RZ. L'esame ecografico di un topo è stato eseguito un giorno dopo la legatura parziale dell'arteria carotide sinistra, come mostrato in questa figura. Una legatura parziale di successo riduce la velocità del flusso ematico e inverte il flusso nell'arteria carotide comune sinistra durante la diastole. La legatura parziale di topi knockout per APOE a dieta ricca di grassi induce un'aterosclerosi marcata nell'arteria carotide comune sinistra, ma non nella carotide destra controlaterale, entro due settimane. L'aterosclerosi è mostrata mediante colorazione con rosso olio per i lipidi e controcolorazione con ematossilina per i nuclei.L'RNA raccolto dall'intima carotidea contiene geni marcatore endoteliali come pcam e un marcatore delle cellule muscolari lisce mediali. Geni come alpha SMA sono assenti nell'RNA raccolto dal resto dell'arteria, indicato con m più A per media più avventizia; il marcatore delle cellule muscolari lisce è presente mentre il marcatore endoteliale è assente. Vi abbiamo appena mostrato come eseguire una legatura parziale della carotide.Utilizzare l'ultrasuono per verificare la legatura e anche come metodo per l'isolamento dell'RNA dell'intima. Quando si esegue questa procedura, è essenziale identificare correttamente i rami dell'arteria comune corretta e assicurarsi che il ramo dell'arteria tiroidea superiore rimanga pervio mentre gli altri rami vengono legati accuratamente. È importante verificare il risultato della legatura mediante ultrasuono durante la procedura; in una preparazione semplice, prestare attenzione affinché l'iLet lavato non venga a contatto con alcuna altra parte dell'arteria eccetto il lume. Detto ciò, grazie per aver guardato e buona fortuna con i vostri esperimenti.

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Il bracciale costrizione presentate in questo articolo è stato progettato per indurre l'aterosclerosi nel topo arteria carotide comune. Grazie alla forma conica del suo lume interno del bracciale impiantato genera regioni ben definite della bassa, la tensione alta e oscillatorio taglio innescare lo sviluppo di lesioni aterosclerotiche dei diversi fenotipi infiammatori.

Impianto di un bracciale carotidea per innescare Shear-stress aterosclerosi indotta in topi

Un modello di impianto dello stent nel topo carotidea è descritto. Rispetto ad altri metodi simili, questa procedura è molto rapida, semplice ed accessibile, che offre la possibilità di studiare in un modo conveniente la reazione parete vascolare a diversi stent medicati e dei meccanismi molecolari di restenosi.

Un modello murino di impianto di stent a livello dell&#39;arteria carotidea per lo Studio della restenosi

Descriviamo una tecnica chirurgica che produce lesioni a filo nell'arteria femorale dei topi per indurre l'iperplasia neointimale per fungere da sistema di test modello per la somministrazione perivascolare di composti terapeutici per l'inibizione della restenosi.

Modello murino di dall&#39;arteria femorale Wire Injury con impianto di una Perivascolare Drug Delivery Patch

Questo studio descrive una procedura invasiva per l'induzione dell'aterosclerosi accelerata nei topi. Rispetto ad altri metodi che utilizzano lesioni indotte da elettricità o crioindotti, la lesione indotta dalla meccanica imita la condizione umana di mentonosi dopo le terapie di revascolazione ed è ideale per lo studio dei meccanismi molecolari coinvolti.

Induzione di aterosclerosi accelerata nei topi: il modello "Wire-Injury"

La comprensione dei meccanismi cellulari e molecolari di ri-endothelialization a seguito di infortunio denudazione arteriosa è di fondamentale importanza nella prevenzione della trombosi e ristenosi delle arterie. Qui si descrive un protocollo per riproducibili lesione arteriosa denudazione dell'aorta addominale sottorenale. La procedura è stata sviluppata per studiare i meccanismi di base che regolano la rigenerazione endoteliale utilizzando modelli murini.

Riproducibile arteriosa Denudation Lesioni da infrarenale aortico addominale di serraggio in un modello murino

Presentiamo un metodo per isolare cellule e nuclei endoteliali dal lume delle arterie carotidi di topo esposte a condizioni di flusso stabili o disturbate per eseguire esperimenti omici a singola cellula.

Isolamento delle cellule endoteliali dal lume delle arterie carotidi di topo per esperimenti multi-omici a singola cellula

Il presente protocollo descrive una nuova tecnica di bendaggio aortico nei topi per indurre l'ipertrofia cardiaca da sovraccarico di pressione. Per le fascette, viene utilizzato un anello di gomma con un diametro interno fisso. Questa nuova tecnica promette meno varianza e dati più riproducibili per esperimenti futuri.

Bendaggio aortico O-ring rispetto alla costrizione aortica trasversale tradizionale per modellare l'ipertrofia cardiaca indotta da sovraccarico pressorio

Qui descriviamo un protocollo di digestione cellulare in due fasi per la preparazione di una sospensione unicellulare delle arterie carotidi di topo.

Preparazione di una sospensione unicellulare da arterie carotidi di topo per il sequenziamento di singole cellule

Il presente protocollo descrive un metodo chirurgico standardizzato per l'induzione di aneurismi carotidei in un modello murino attraverso un singolo intervento chirurgico.

Un modello murino di formazione dell'aneurisma carotideo

Questo studio mira a sviluppare un metodo efficace per raggiungere l'emostasi nelle arterie del topo.

Procedura semplice ed efficace per l'emostasi nelle arterie del topo

Scopri un modello chirurgico di ligatura carotidea parziale nel topo per indurre flusso disturbato e aterosclerosi rapida, con verifica ecografica e isolamento di RNA endoteliale ad alta purezza per studi di espressione genica.

Un modello di Disturbed flusso indotta aterosclerosi carotidea in Arteria mouse da legatura parziale e un semplice metodo di isolamento dellRNA da Endotelio carotidea (Video) | JoVE Journal

Un modello di Disturbed flusso indotta aterosclerosi carotidea in Arteria mouse da legatura parziale e un semplice metodo di isolamento dell'RNA da Endotelio carotidea

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