Ablazione epatica mirata: induzione della morte degli epatociti con metronidazolo nelle larve di pesce zebra transgenico

- Sciogliere il metronidazolo in acqua d'uovo contenente DMSO, un solvente, e aggiungere feniltiourea, che previene la formazione di pigmenti negli embrioni. Trasferire alcune larve dell'età appropriata su piastre di trattamento e controllo. Quindi, aggiungere la concentrazione desiderata della soluzione di metronidazolo alla piastra di prova e dell'acqua d'uovo contenente DMSO alla piastra di controllo.

Lascia che le larve in entrambe le piastre crescano a 28 gradi Celsius. Le larve transgeniche producono nitroreduttasi solo negli epatociti, che converte il metronidazolo in un farmaco citotossico, provocando la morte solo degli epatociti bersaglio. Dopo il trattamento, rimuovere la soluzione di metronidazolo dalla piastra di trattamento e lavare gli embrioni con acqua d'uovo.

Aggiungere tricaina per anestetizzare le larve ed esaminarle al microscopio a epifluorescenza per verificare la presenza di una grave ablazione degli epatociti, la distruzione delle cellule epatiche. Osserverai un fegato molto più piccolo negli individui trattati rispetto agli individui del gruppo di controllo. Nel protocollo di esempio, utilizzeremo il metronidazolo per l'ablazione degli epatociti nelle larv