Encyclopedia of Experiments: Biology
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- एक ट्राइकेन एनेस्थेटाइज्ड मछली को एक गीले स्पंज पर स्थानांतरित करें जिसमें पृष्ठीय पक्ष का सामना करना पड़ रहा है। मछली को माइक्रोस्कोप के नीचे ले जाने वाले स्पंज को रखें। पृष्ठीय मांसपेशी के पास शरीर की धुरी से 45 डिग्री कोण पर एक माइक्रो इंजेक्शन सुई रखें।
इसके बाद, पृष्ठीय पंख के सामने उस स्थान का पता लगाएं जो तराजू से ढका हुआ नहीं है जहां आप महान बल लागू किए बिना सुई डाल सकते हैं। फिर धीरे-धीरे सुई डालें और धीरे-धीरे मांसपेशियों में फिनोल लाल जैसे मार्कर के साथ ब्याज के यौगिक को इंजेक्ट करें।
यदि ब्याज के यौगिक में आनुवंशिक सामग्री होती है, तो इंजेक्शन साइट के दोनों ओर इलेक्ट्रोड रखकर कोशिकाओं को इलेक्ट्रोलेट करें और वर्तमान का प्रशासन करें। वर्तमान मांसपेशियों की कोशिकाओं को पारगम्य बनाता है और आनुवंशिक सामग्री को कुशलतापूर्वक लेने में सक्षम होता है । प्रक्रिया के बाद, तुरंत एक वसूली टैंक में मछली हस्तांतरण । निम्नलिखित प्रोटोकॉल में, हम एक वयस्क जेब्राफिश पर एक इंट्रामस्कुलर इंजेक्शन प्रदर्शन करने के लिए mycoacteriosis के खिलाफ एक डीएनए टीका वितरित करेंगे ।
इंजेक्शन के दौरान मछली को एक निश्चित स्थिति में रखने के लिए, पैडिंग के रूप में बीच में एक नाली कट के साथ स्पंज के एक टुकड़े का उपयोग करें। स्पंज को सिस्टम के पानी में अच्छी तरह से भिगोकर पेट्री डिश में सेट करें प्लास्टिक के चम्मच का इस्तेमाल करते हुए गीले स्पंज में एनेस्थेटाइज्ड जेब्राफिश को नाली में नीचे की ओर ट्रांसफर करें माइक्रोस्कोप के नीचे, सुई को जेब्राफिश की पृष्ठीय मांसपेशी के करीब 45 डिग्री कोण पर रखें। इसके बाद छोटे स्थान पर बिना तराजू के पाया जाए और सुई को मांसपेशियों में धकेल दें।
यदि कोई प्रतिरोध महसूस किया जाता है, तो एक आसन्न स्थान की कोशिश करें। एक फुट स्विच का उपयोग धीरे-धीरे मांसपेशियों में प्लाज्मिड समाधान इंजेक्ट करने के लिए करें। माइक्रोस्कोप के नीचे, फिनोल लाल दिखाई देना चाहिए क्योंकि यह मांसपेशियों के ऊतकों में प्रवेश करता है।
इंजेक्शन साइट के हर तरफ चिमटी टाइप इलेक्ट्रोड रखकर इंजेक्शन के तुरंत बाद मछली को इलेक्ट्रोपोरेट करें इलेक्ट्रोपोरेटर पर स्टार्ट बटन दबाएं और उसे छह 40 वोल्ट, 50 मिलीसेकंड दालें दें। इसके बाद धीरे-धीरे मछली को रिकवरी टैंक में ट्रांसफर करें अंत में टेक्स्ट प्रोटोकॉल के अनुसार मछली को एनेस्थेटाइज करने के बाद इंजेक्शन साइट के पास ईजीएफपी एक्सप्रेशन देखने के लिए यूवी लाइट का इस्तेमाल करें।
