Generazione di cellule dendritiche derivate dal midollo osseo: un metodo per generare cellule dendritiche dal midollo osseo di topo

- Le cellule dendritiche o DC sono cellule chiave che presentano l'antigene e attivano le cellule T. Nei pazienti leucemici, queste cellule esprimono scarsamente l'antigene associato al tumore e non riescono a suscitare una risposta immunitaria antigene specifica. Le cellule dendritiche sono abbondanti nel midollo osseo. E quindi, il midollo osseo è il sito preferito per il loro isolamento per aiutare a studiare il loro ruolo nel cancro.

Per ottenere cellule dendritiche, estrarre il midollo osseo dal femore o dall'osso della tibia di un topo soppresso utilizzando una siringa riempita di terreno per sciacquarlo. Centrifugare e risospendere il pellet in tampone ammonio-cloruro-potassio o ACK per lisi gli eritrociti. Ora aggiungere i terreni di coltura per arrestare la lisi e centrifugare. Risospendere il pellet nel terreno di coltura contenente un antibiotico. Aggiungere il fattore stimolante le colonie di granulociti-macrofagi o GM-CSF e trasferire la sospensione cellulare in una piastra di Petri.

Incubare la piastra per il tempo desiderato. GM-CSF aiuta le cellule progenitrici a differenziarsi in cellule dendritiche. Infine, attivare le cellule con lipopolisaccaridi o LPS, che si l