Visualizzazione dell'espressione proteica basata su CUBIC: una procedura per visualizzare l'espressione proteica nelle biopsie cutanee di topo a tutto spessore

- La pelle è un organo complesso costituito da varie popolazioni cellulari disposte in più strati. CUBIC, una tecnica di imaging tridimensionale basata sulla pulizia dei tessuti, aiuta a visualizzare i modelli di espressione proteica all'interno di queste cellule cutanee utilizzando biopsie dell'intera pelle. Inizia prendendo un topo soppresso e rimuovendo i peli dalla regione dorsale del collo. Eliminate un pezzo di pelle e tagliatelo a pezzetti.

Immergere i pezzi in una soluzione di chiarificazione CUBIC1 e incubarli. Le cellule della pelle non sono trasparenti, a causa della presenza di cromofori e lipidi che causano la dispersione della luce. Le sostanze chimiche nella soluzione CUBIC rimuovono queste molecole, riducendo così la dispersione della luce e rendendo il tessuto trasparente.

Successivamente, trattare il tessuto con gli anticorpi primari desiderati che si legano specificamente alle proteine intracellulari bersaglio espresse nelle cellule della pelle. Inoltre, trattare con anticorpi secondari marcati in fluorescenza che si legano ai complessi proteina-anticorpo primario. Controcolorare il tessuto con un colorante legante il DNA che colora il nucleo.

Infine, immergere i