Saggio di formazione di colonie di cheratinociti: un test in vitro per valutare la capacità dei cheratinociti di crescere in colonie

- Il saggio di formazione delle colonie determina la capacità delle singole cellule di proliferare e formare colonie. Inizia con una pelle dorsale di topo asportata in una piastra di coltura. Raschiare via il tessuto sottocutaneo e il grasso dal lato ventrale della pelle. Trattare il tessuto con una soluzione digestiva. Gli enzimi proteolitici nella soluzione degradano la matrice extracellulare, inducendo la dissociazione delle cellule epidermiche.

Raschiare delicatamente lo strato epidermico per rilasciare le cellule e i peli dissociati in un terreno di raccolta. Filtrare la sospensione attraverso un colino appropriato per intrappolare peli o eventuali detriti e ottenere una sospensione unicellulare di cellule epidermiche. Trasferire il volume desiderato di questa sospensione cellulare in una piastra rivestita di collagene contenente uno strato aderente di cellule alimentatrici arrestate dalla crescita. Integrare con un terreno adatto che favorisca la sopravvivenza dei cheratinociti.

Durante la coltura, i cheratinociti si attaccano allo strato di alimentazione. Inoltre, queste cellule alimentatrici secernono fattori di crescita e sintetizzano proteine della matrice extracellulare