Reazione quantitativa della polimerasi a catena per enumerare i batteriofagi

Preparare la premiscela qPCR per 10 campioni di fagi biopannati di concentrazione sconosciuta e 7 campioni di concentrazioni standard in triplicato, ottenendo una premiscela per 51 campioni contenente 255 microlitri di qPCR Master Mix, 51 microlitri di primer e 102 microlitri di acqua.

Aliquotare 8 microlitri della miscela PCR preparata in 51 pozzetti di una piastra qPCR a 96 pozzetti. Quindi, aggiungere due microlitri di campioni di fagi T7 trattati termicamente a ciascuno di questi pozzetti, dispensandoli sotto la superficie della premiscela qPCR. Utilizzando una pellicola adesiva, sigillare la piastra.

Avvolgere la piastra in un foglio di alluminio per ridurre al minimo il fotosbiancamento a fluorescenza, quindi procedere con l'esecuzione della piastra sull'apparecchiatura qPCR. Configurare le condizioni di ciclo e le impostazioni della curva di fusione come indicato nel protocollo di testo.