Name: Rifiuto di fluorescenza di fondo in risonanza e spontanea microspettroscopia Raman (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-05-18T12:00:00.000+00:00
Duration: 15 min 4 s
Description: Scopri come costruire un sistema ottico per isolare i segnali Raman dal rumore di fluorescenza in campioni biologici. Questa tecnica di commutazione ottica ultraveloce consente analisi biochimiche precise con elevati rapporti segnale-rumore.

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Questo lavoro è stato finanziato dalla NSF premio DBI 0852891. Parte di questo lavoro è stato anche finanziato dal Centro per Biofotonica Scienza e della Tecnologia, un designato NSF Science and Technology Center gestito dalla University of California, Davis, ai sensi del Contratto Cooperative n. PHY0120999.

1. Alcuni bisogna fare attenzione nella preparazione e l'immissione di un campione Raman all'interno di questo sistema. <ol><li> Poiché il sistema fa uso di solito molto alti obiettivi apertura numerica con distanze di lavoro molto brevi, i campioni sono posti su un vetrino. I campioni biologici sono generalmente posto su un vetrino n ° 1 spessore montato in una camera cellula Attofluor (Invitrogen, Carlsbad, CA). </li><li> Campioni liquidi, in particolare quelli tossici per l'uomo, vengono inseriti in una piccola bottiglia di vetro con un coprioggetto cementato l'apertura per mezzo di una resina di silicone. La bottiglia viene poi invertito per la misurazione. </li><li> Perché il nostro sistema dipende dalla tempistica precisa della pompa e gli impulsi del segnale, siamo costretti a non usare la regolazione convenzionale centro del nostro microscopio, che traduce l'obiettivo su e giù. Questa somma e sottrae percorso ottico dal nostro sistema. Invece, abbiamo posto i nostri campioni su un palco secondario montato sulla parte superiore del palco microscopio che ha un proprio controllo messa a fuoco indipendente. </li></ol> 2. Al fine di prendere tempo-dipendenti spettri Raman, il fascio di eccitazione deve essere adeguatamente preparato. <ol><li> Si comincia con la luce che emerge da una W 2,4 sintonizzabile pulsata Ti: Sapph laser (Chameleon, sistemi coerenti, Santa Clara, CA). Ogni impulso del treno di impulsi 80 MHz ha 30 nj di energia, ha una larghezza temporale di 140 fs, ed ha uno spettro centrata a 808 nm con una larghezza di banda spettrale di ~ 6 nm. </li><li> Per evitare di back-riflessioni di rientrare nella cavità laser, la luce passa attraverso un isolatore Faraday. Un semionda piatto posto davanti l'isolatore di Faraday permette la sintonizzazione continua della potenza totale inviato nel sistema. </li><li> Perché 6 nm è troppo ampia larghezza di banda per risolvere i modi di trasporto più Raman, il fascio viene inviato attraverso un molto stretto (0,8 nm FWHM, Andover Corporation, Salem, NH), filtro passa-banda centrata a 808 nm. </li><li> La luce è poi focalizzata da un doppietto acromatico (f = 100 mm) su un 5 millimetri β-borato di bario (BBO) cristallo (CASIX, Fuzhou, Fujian, Cina) di dimezzare la lunghezza d'onda da 808-404 nm nm. Il cristallo BBO è posto in un monte con controlli punta e inclinazione, ed anche montato su un palcoscenico di traduzione. Per massimizzare l'efficienza della conversione lunghezza d'onda, il cristallo deve essere posta esattamente simmetriche rispetto al centro del doppietto, e con il suo asse di cristallo allineato alla polarizzazione del fascio in entrata. </li><li> Perché l'efficienza della conversione lunghezza d'onda è la polarizzazione-dipendente, il controllo della quantità di luce inviata al campione può essere ottenuta con piazzando una seconda semionda piatto dopo l'isolatore di Faraday. Ruotando questo waveplate, l'intensità della luce inviata al campione può essere regolata in modo indipendente l'intensità del fascio trasmesso pompa (di cui parleremo più avanti). </li><li> La lunghezza d'onda-luce è convertita recollimated da un doppietto acromatico secondo (f = 500 mm) scelto in modo che il fascio di uscita è abbastanza grande da riempire l'apertura posteriore dell'obiettivo microscopio, e diretto in un microscopio invertito (IX-71, Olympus, Center Valley, PA) per mezzo di due specchi di sterzo. </li><li> L'obiettivo microscopio, essendo l'elemento ottico ospitato all'interno del componente più monolitica del sistema, definisce l'asse ottico. Per allineare il fascio di eccitazione a questo asse, uno specchio è inserito nel piano campione del microscopio. I due specchi di sterzo sono poi iterativamente sintonizzati osservando il back-riflesso fascio laser su un CCD cam-era (μEye, IDS, Obersulm, Germania) collegato alla porta di imaging del microscopio. Supponendo che l'immagine sulla fotocamera è incentrata sul microscopio campo di vista, il raggio è in asse, quando il punto focale è centrato sul chip microscopio e la traduzione degli obiettivi lungo l'asse z non cambia il punto centrale del fascio sfocata. </li><li> Quando un campione è posto nel piano di campionamento e irradiati con luce laser scattering Raman si verifica. Un filtro dicroico posto sotto l'obiettivo microscopio separa la lunghezza d'onda in differita luce Raman sparsi (e fluorescenza) dal fascio di eccitazione, dirigendo la luce Raman sparsi per l'attacco laterale del microscopio. Il microscopio è stato modificato per rimuovere le lenti all'interno di questo percorso, in modo che la luce del segnale emerge dal microscopio collimato. </li><li> Poiché il raggio del segnale che emerge dal microscopio è più grande l'apertura chiara del Glan-Thompson polarizzatori, un telescopio 0.47x composto da due doppietti acromatici (= 75 mm f1, f2 = 35 mm) viene utilizzato per ridurre il raggio. </li><li> La luce del segnale viene poi polarizzato da un polarizzatore Glan-Thompson orientati a 0 ° rispetto alla verticale, nella cornice di laboratorio, e diretto a uno specchio dicroico dove viene ricombinato con il fascio di pompa. </li></ol> 3. Affinché il cancello ottico per operare al massimo dell'efficienza, è necessario prestare attenzione nella preparazione del fascio di pompa (Kerr fascio) pure. <ol> L'impulso di pompa viene prima amplificata da 0.35x con un telescopio costruito con due doppietti acromatici (= 35 mm f1, f2 = 100 mm) per adattarsi alle dimensioni finali del raggio del segnale. <li> Il fascio di pompa viene poi inviato in una linea di ritardo composta da un prisma ad angolo retto posto su un palco traduzione lineare che può essere regolato per garantire la sovrapposizione temporale degli impulsi di pompa e di segnale (messa a punto da discutere più avanti). </li><li> Dopo la linea di ritardo, il fascio viene inviato attraverso una semionda piastra e polarizzatore orientato a 45 ° rispetto alla verticale, nella cornice di laboratorio. In questo modo il proprio stato di polarizzazione del fascio di pompa quando raggiunge il medium non lineare. </li><li> La luce viene poi riflessa da due specchi di sterzo, uno con piezo-elettrico di controllo, che vengono utilizzati per regolare con precisione la posizione del fascio di pompa in modo tale che si sovrappone spazialmente con il raggio del segnale. La sovrapposizione si ottiene osservando la pompa e travi di segnale in due luoghi, uno vicino e uno lontano dallo specchio dicroico in cui si combinano le travi. Usando il primo specchio di sterzo a sovrapporre i due fasci nel punto vicino, e lo specchio piezo di sovrapporre i fasci nel punto lontano, il fascio di pompa può essere fatto esattamente allineati con il raggio del segnale. </li><li> Con i due fasci combinati, il cancello Kerr e il sistema di raccolta sono impostati per massimizzare il tempo-dipendenti raccolti segnale. </li></ol> 4. Con i due fasci combinati, il cancello Kerr e il sistema di raccolta sono impostati per massimizzare il tempo-dipendenti raccolti segnale. <ol><li> Le travi pompa e segnale vengono prima passare attraverso un filtro dicroico che ha un diametro di 6 a 404 nm per evitare qualsiasi luce residua eccitazione da emozionanti scattering Raman all'interno del mezzo non lineare. </li><li> La pompa e le travi del segnale sono poi entrambe focalizzate da un doppietto acromatico (f = 35 mm) in una cuvetta di 1 centimetro cammino ottico di quarzo contenente il materiale non lineare. Qualsiasi materiale non lineare con un alto indice opportunamente non lineare (superiore CS 2), opportunamente breve risposta temporale (&lt;2 ps), possono essere utilizzati qui. Per questi esperimenti, usiamo disolfuro di carbonio, CS 2, che ha un indice non lineare n 2 = 3.1 x 10 -18 m 2 / W. La luce viene poi recollimated da un doppietto secondo con una lunghezza focale identico al primo. </li><li> Le travi sono poi passati e Glan-Thompson analizzatore su un supporto rotante, e poi attraverso una serie di filtri di assorbimento e le interferenze che combinati hanno un diametro esterno di 10 a 808 nm. </li><li> Infine, la luce del segnale è focalizzata da un doppietto acromatico (f = 35 mm) in un micron 50 fibra ottica multimodale, in cui è montato la fibra in una fase che permette la traduzione in x, y, z. La fibra viene poi accoppiato ad uno spettrografo di imaging commerciale con annesso CCD (SP2300i e Pixis 100B, rispettivamente, sia prodotto da Princeton Instruments, Trenton, NJ). </li><li> Per allineare il sistema di raccolta per massimizzare il segnale raccolto, l'analizzatore è impostato a 0 ° e un campione di toluene viene inserito nel piano di campionamento. Regolando la x, y, z e controlli del monte fibra, il segnale raccolto Raman è ottimizzato. </li><li> Per assicurare una corretta sovrapposizione spaziale e temporale della pompa e travi di segnale, uno specchio è inserito nel piano campione del microscopio. Il filtro di 404 nm viene rimosso dal sistema. Con l'analizzatore ruotato di 90 ° il fascio retroriflessa nm 404 è inviato nel spettrografo con l'intensità regolato in modo da non saturare la fotocamera. Con il fascio pompa spenta, l'analizzatore viene ruotato per ridurre al minimo la trasmissione del segnale nm 404. Con il fascio di pompa riaccesa, la fase di ritardo è sintonizzato lentamente fino a quando la trasmissione della luce 404 nm comincia ad aumentare. Allora, per iterativamente messa a punto la fase di ritardo, il piezoelettrico specchio, e la x, y, z e controlli della fibra, si massimizza il segnale. </li><li> Poiché il retro-riflessa 404 nm e il fascio di luce Raman sparsi possono prendere strade leggermente diverse attraverso il sistema, le regolazioni finali sono realizzati mettendo una forte Raman diffusore (come il toluene) sul palco del campione e la messa a punto leggermente l'allineamento cambiando il fase di ritardo, piezeo elettrici specchio e controlli x, y, z della fibra di ottimizzare il segnale Raman. </li></ol> 5. Raccolta di un singolo time-gated spettro Raman richiede l'acquisizione di spettri diversi per correggere gli artefatti del sistema. <ol><li> Con l'analizzatore a 0 °, il fascio di eccitazione e la trave sulla pompa off, uno spettro "ungated" è tratto, che rappresenta lo spettro che sarebbero stati acquisiti senza il beneficio del tempo-gating sistema. </li><li> Con l'analizzatore impostato a 90 °, il fascio di eccitazione e il fascio di pompa ancora fuori, un back-ground spettro è presa, che rappresenta la quantità di luce parassita che cola attraverso la polarizzatori e gli altri elementi del sistema. </li><li> Con l'analizzatore rimanenti a 90 °e tutte le travi in ​​poi, lo spettro di "gated" è tratto, che rappresenta la luce Raman sparsi consentito attraverso i polarizzatori attraversato dalla presenza del fascio di pompa. </li><li> Infine, con l'analizzatore ancora a 90 °, il fascio di eccitazione fuori e il fascio di pompa, uno spettro di fondo secondo è preso, che rappresenta il contributo allo spettro di "gated" di somme residue di luce 808 nm entrare nel spettrografo. </li><li> Inoltre, uno spettro è presa con tutti i laser spento, che caratterizzano il livello di base "oscura" il segnale della telecamera ed elettronica. </li><li> Poiché gli spettri spesso richiedono lunghi tempi di integrazione, è indispensabile rompere questo tempo di integrazione in vari pezzi (fotogrammi) per consentire la correzione adeguata dei raggi cosmici - un problema comune quando l'acquisizione di dati su campate di diversi minuti. </li></ol> 6. Una volta acquisito, fasi di lavorazione diverse sono utili per migliorare la qualità e l'aspetto dei dati. <ol><li> In primo luogo, tutti gli spettri sono scure corretti sottraendo al largo spettro "dark". </li><li> Per correggere i raggi cosmici, i diversi frame che costituisce una acquisizione sono confrontate tra di loro su un pixel-by-pixel. Per ogni pixel di ogni fotogramma che cade al di fuori di 2 deviazioni mediana dal valore medio per quel pixel su tutti i fotogrammi, valore pixel è sostituito dal valore medio su tutti i fotogrammi. </li><li> Le cornici dei raggi cosmici vengono poi corretti media e levigate da un Savitzky-Golay filtro 1. </li><li> Per estrarre lo spettro di "vero" gated, sottraiamo il "eccitazione-only" e "pompa-only" spettri dallo spettro misurato gated. </li><li> Infine, gli spettri gated e ungated sono poi di fondo corretta sottraendo una 5 ° ordine polinomiale, determinato con il metodo di Lieber e Mahadevan-Jansen 2. </li></ol> 7. Rappresentante dei risultati: <img src="/files/ftp_upload/2592/2592fig1.jpg" alt="Figura 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 1"> Figura 1. Schema del sistema di gating Kerr. Il percorso del fascio pompa è mostrato in rosso, mentre il percorso SHG è mostrata in blu. Il percorso in cui si sovrappongono Raman e di fluorescenza viene evidenziato in verde, mentre il percorso in cui la fluorescenza è stata temporalmente filtrati è evidenziata in giallo. Abbreviazioni come segue: BPF, filtro passa banda, CCD, Charge-Coupled Device, DCM, specchio dicroico, FI, Faraday isolatore; λ / 2, onda piastra metà, LPF, filtro passa-tempo; NLM, non lineare media; P, polarizzatore ; SHG, cristallo generazione di seconda armonica. <img src="/files/ftp_upload/2592/2592fig2.jpg" alt="Figura 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 2"> Figura 2 Top:. Spettri gregge di cumarina disciolto in olio di immersione. Curva rossa mostra lo spettro prese con la porta tenuta aperta (analizzatore impostato per la massima trasmissione). Curva nera mostra lo spettro preso con l'analizzatore in linea per la trasmissione minima ed una pompa applicata fascio (lo spettro gated). Curva blu mostra l'spectum prese con l'analizzatore in linea per la trasmissione minimo e nessuna pompa fascio applicato (porta tenuta chiusa). Curva verde mostra lo spettro presa solo con il fascio di pompa applicata. Linee tratteggiate indicano magenta regione spettrale mostrata nel pannello in basso. Tutti gli spettri sono stati smussati con una punto 11, 3 ° ordine Savitzky-Golay filtro. In basso: spettri di cumarina disciolto in olio di immersione dopo fluorescenza di fondo sottrazione. Curva rossa è lo spettro con la porta tenuta aperta, e la curva blu è lo spettro gated. Lo spettro gated mostra chiaramente il contorto alto numero d'onda caratteristica di punta di oli.

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</ol>

Nessun conflitto di interessi dichiarati.

Il campo della ricerca biomedica spettroscopia Raman ha visto un crescente interesse negli ultimi anni come risultato del suo potenziale dimostrata per risolvere diverse sfide difficili nella diagnostica biologica. Per esempio, spettri Raman hanno dimostrato di avere valore diagnostico nel cancro della rilevazione 3, 4, 5, 6. Spettroscopia Raman è stata utilizzata anche nella quantificazione batterica 7, 8 e risposta ai farmaci dei batteri 9. Inoltre ha trovato applicazione in una vasta ...

<table border="1"><tbody><tr><th> Nome </th><th> Azienda </th><th> Numero di catalogo </th><th> Commenti </th></tr><tr><td> Lenti </td><td> Thorlabs </td><td> Vari </td><td> Tutte le lenti rivestiti di avere perdite di trasmissione massima di 1% ciascuno </td></tr><tr><td> Ti sintonizzabile: Sapph laser </td><td> Coerente </td><td> Camaleonte </td><td> NJ 30, 200 fs, 80 MHz </td></tr><tr><td> 40X olio obiettivo ad immersione </td><td> Olimpo </td><td> UApo/340 </td><td> NA = 1,35 </td></tr><tr><td> Microscopio invertito </td><td> Olimpo </td><td> IX-71 </td><td> Modificato per rimuovere tutti gli obiettivi a babordo </td></tr><tr><td> Mezza onda piastra </td><td> Thorlabs </td><td> AHWP05M-600 </td><td></td></tr><tr><td> Glan-Thompson polarizzatore </td><td> Thorlabs </td><td> GTH10M </td><td> ~ Perdita di trasmissione del 10% </td></tr><tr><td> Spettrometro </td><td> PI Acton </td><td> SP2300i </td><td></td></tr><tr><td> CCD </td><td> PI Acton </td><td> Pixis 100B </td><td></td></tr><tr><td> Software Mathmatical </td><td> The MathWorks </td><td> MATLAB </td><td> versione 2008a </td></tr><tr><td> Faraday isolatore </td><td> EOT </td><td> BB8-5I </td><td></td></tr><tr><td> Piezoelettrico specchio </td><td> Newport </td><td> AG-M100 </td><td></td></tr><tr><td> BBO cristallo </td><td> CASIX </td><td> costume </td><td> 1 millimetro di spessore </td></tr><tr><td> Passabanda filtro 1 </td><td> Andover </td><td> 008FC14 </td><td> 808 ± 0,4 nm </td></tr><tr><td> Specchio dicroico </td><td> Semrock </td><td> FF662-FDI01 </td><td> limite di banda a 662 nm </td></tr><tr><td> Lungo filtro passa- </td><td> Semrock </td><td> BLP01-405R </td><td> limite di banda a 417 nm </td></tr><tr><td> Passabanda filtro 2 </td><td> Semrock </td><td> FF02-447/60 </td><td> 417-447 nm </td></tr><tr><td> CS 2 </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 335266 </td><td> 99% di purezza </td></tr><tr><td> Cumarina 30 </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 546127 </td><td> 99% di purezza </td></tr><tr><td> Olio di immersione </td><td> Cargille </td><td> 16242 </td><td> Tipo di DF </td></tr></tbody></table>

rifiuto di fluorescenza di fondo in risonanza e spontanea microspettroscopia raman

Rejection of Fluorescence Background in Resonance and Spontaneous Raman Microspectroscopy

Spettroscopia Raman è spesso afflitto da un forte background fluorescente, in particolare per i campioni biologici. Se un campione viene eccitato con un treno di impulsi ultraveloci, un sistema che può separare spettralmente temporalmente sovrapposti segnali su una scala temporale picosecondo possibile isolare tempestivamente arriva Raman luce diffusa dal tardo arrivo luce di fluorescenza. Qui si discute la costruzione e gestione di un complesso sistema ottico non lineare che utilizza tutte le ottiche di commutazione nella forma di una bassa potenza ottica Kerr porta per isolare i segnali Raman e di fluorescenza. Un singolo laser 808 nm con 2,4 W di potenza media e 80 MHz, frequenza di ripetizione è diviso, con circa 200 mW di luce 808 nm di essere convertito in &lt;5 mW luce di 404 nm inviato il campione di eccitare scattering Raman. I restanti non convertito luce 808 nm viene poi inviato ad un mezzo non lineare, dove funge da pompa per il tutto-ottica dell&#39;otturatore. L&#39;otturatore si apre e si chiude in 800 fs con un&#39;efficienza di picco di circa il 5%. Utilizzando questo sistema siamo in grado di separare con successo segnali Raman e di fluorescenza ad un tasso di ripetizione 80 MHz utilizzando energie del polso e medie potenze che rimangono biologicamente sicuri. Poiché il sistema non ha alcuna capacità di ricambio in termini di potenza ottica, abbiamo dettaglio diverse considerazioni di progettazione e di allineamento che aiutano nella massimizzare il throughput del sistema. Discutiamo anche nostro protocollo per ottenere la sovrapposizione spaziale e temporale del segnale e travi pompa all&#39;interno del mezzo Kerr, nonché un protocollo dettagliato per l&#39;acquisizione dello spettro. Infine, si segnala un paio di risultati rappresentativi degli spettri Raman ottenuti in presenza di una forte fluorescenza utilizzando il nostro tempo-gating sistema.

Discutiamo la costruzione e gestione di un complesso sistema ottico non lineare che utilizza ultraveloci tutto-ottici di commutazione per isolare Raman da segnali di fluorescenza. Utilizzando questo sistema siamo in grado di separare con successo segnali Raman e di fluorescenza utilizzando le energie del polso e medie potenze che rimangono biologicamente sicuri.

Rifiuto di fluorescenza di fondo in risonanza e spontanea microspettroscopia Raman

La spettroscopia Raman è spesso ostacolata da un forte background fluorescente, in particolare per i campioni biologici. Se un campione viene eccitato con un treno di...

Lo scopo di questa procedura è costruire un gate ottico che trasmetta la luce diffusa Raman reiettando al contempo i segnali fluorescenti. Questo risultato si ottiene innanzitutto eccitando e polarizzando la diffusione Raman. Il secondo passaggio della procedura consiste nel preparare il fascio pompa per attivare il gate.In terzo luogo, è necessario regolare la pompa, il raggio e gli impulsi in modo che si sovrappongano. L'ultimo passaggio della procedura consiste nell'acquisire spettri temporizzati. Infine, è possibile ottenere risultati che mostrano la quantificazione e la classificazione biochimica attraverso l'analisi dei segnali Raman con elevati rapporti segnale-rumore.Il principale vantaggio di questa tecnica rispetto ai metodi esistenti, come la rimozione software dello sfondo fluorescente, consiste nella significativa riduzione del rumore di conteggio prodotto dalla fluorescenza. Questo metodo può contribuire a rispondere a domande fondamentali nei settori biologico e biomedico, ad esempio nella caratterizzazione non invasiva della composizione chimica di fluorocromi endogeni in cellule batteriche e tessuti, nella comprensione di processi cellulari e malattie come il cancr

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Spettroscopia Raman è una tecnica adatta per il non-contatto, label-free analisi di cellule viventi, dell'ingegneria tissutale costrutti e tessuti nativi. Fonte specifici per le impronte digitali spettrali possono essere generati ed analizzati utilizzando l'analisi multivariata.

Senza contatto, Label-free monitoraggio delle cellule e matrice extracellulare mediante Spettroscopia Raman

L'articolo descrive un metodo per la produzione di nanofili estremi mediante infiltrazione di fusione in nanotubi di carbonio e come i sistemi 1D possono essere caratterizzati e studiati utilizzando la spettroscopia Raman di risonanza per determinare le energie di eccitazione vibrazionale e ottica.

Risonanza Spettroscopia Raman di estrema nanofili e altri sistemi 1D

Il manoscritto descrive un metodo di spettroscopia di fluorescenza quasi risonante assistita da fononi che incorpora sia la spettroscopia a risoluzione limitata dal laser che la spettroscopia di fotoluminescenza (PL). Questo metodo utilizza fononi ottici per fornire spettri di risoluzione a larghezza limitata di linee di strutture semiconduttrici simili ad atomi nel dominio dell'energia. Il metodo è anche facilmente realizzabile con una configurazione di spettroscopia ottica a spettrometro...

Alta Risoluzione Phonon-assisted Quasi-risonanza spettroscopia di fluorescenza

Presentiamo una tecnica per Raman analisi spettroscopica di campioni altamente radioattivi compatibili con qualsiasi spettrometro standard di micro-Raman, senza alcuna contaminazione radioattiva dello strumento. Mostriamo anche alcune applicazioni che utilizzano composti attinidi e materiali combustibili irradiati.

Una tecnica innovativa per l&#39;analisi Raman di campioni altamente radioattivo Uso di qualsiasi standard Micro-Raman Spectrometer

Un protocollo di analisi dettagliata di Spettroelettrochimica IR e Raman è presentato.

Raman e IR Spettroelettrochimica metodi come strumenti per analizzare composti organici coniugati

La microscopia a dispersione Raman stimolata (SRS) consente l'imaging selettivo e privo di etichette di specifiche moieties chimiche ed è stata efficacemente utilizzata per l'immagine di molecole lipidiche in vivo. Qui, forniamo una breve introduzione al principio della microscopia SRS e descriviamo i metodi per il suo uso nella conservazione lipidica di imaging in Caenorhabditis elegans.

Imaging privo di etichette delle dinamiche di conservazione lipidica negli elegani di caenorhabditis utilizzando la microscopia a dispersione Raman stimolata

Questo documento confronta direttamente la risoluzione, la sensibilità e i contrasti di imaging dello scattering Raman stimolato (SRS) e dello scattering Raman anti-Stokes coerente (CARS) integrati nella stessa piattaforma del microscopio. I risultati mostrano che CARS ha una migliore risoluzione spaziale, SRS offre migliori contrasti e risoluzione spettrale ed entrambi i metodi hanno una sensibilità simile.

Confronto diretto tra lo scattering Raman stimolato iperspettrale e la microscopia a dispersione raman coerente anti-Stokes per l'imaging chimico

Presentiamo un protocollo per acquisire immagini chimiche con microscopia a diffusione Raman stimolata a banda larga (SRS). Basato su un microscopio SRS che opera con rilevamento differenziale multicanale-lock-in, il protocollo descrive la preparazione del campione, la regolazione dell'apparato SRS e la chemiometria per districare diversi costituenti di campioni chimicamente eterogenei.

Imaging chimico multiplex basato sulla microscopia a dispersione Raman stimolata a banda larga

Un microscopio a trasformata di Fourier a campo ampio, basato su un interferometro birifrigento compatto e ultra-stabile, consente l'acquisizione parallela degli spettri per tutti i pixel di un rivelatore 2D. L'approccio nel dominio del tempo consente il disintreccio tra fotoluminescenza e segnali Raman, e consente una mappatura Raman rapida (~5 ms/pixel) con una risoluzione spaziale di ~1 μm e uno spettro di 23 cm-1 .

Un microscopio Raman a trasformata di Fourier a campo ampio multimodale

Preciso, a base di causalità-quantificazione della funzione diastolica globale è stato raggiunto cinematica analisi basato sulla modellazione del flusso transmitralico tramite il parametrizzate diastolica di riempimento (PDF) formalismo. PDF genera rigidità, relax, e parametri di carico unici e delucida 'nuovo' fisiologia, fornendo indici sensibili e specifici di disfunzione.

Quantificazione di Global Funzione diastolica da Analisi basata su modellazione cinematica del flusso transmitralico tramite il formalismo di riempimento parametrizzate diastolica

Scopri come costruire un sistema ottico per isolare i segnali Raman dal rumore di fluorescenza in campioni biologici. Questa tecnica di commutazione ottica ultraveloce consente analisi biochimiche precise con elevati rapporti segnale-rumore.

Rifiuto di fluorescenza di fondo in risonanza e spontanea microspettroscopia Raman

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