Modello di ansa ileale del topo: un modello chirurgico per studiare la permeabilità intestinale nel topo

In condizioni patologiche, la disintegrazione delle barriere epiteliali ed endoteliali aumenta la permeabilità intestinale, provocando la fuoriuscita del contenuto intestinale nel sistema vascolare circostante e nella cavità addominale. La permeabilità intestinale può essere simulata utilizzando un modello dell'ansa ileale.

Per iniziare, preparare un topo anestetizzato in posizione supina. Fai un'incisione sulla linea mediana nell'addome. Posizionare una garza di cotone sterile inumidita con un tampone adatto sull'area chirurgica per mantenere gli organi idratati durante l'intervento chirurgico.

Esteriorizzare l'ileo, la parte distale dell'intestino, e stenderlo sulla garza per esporre il mesentere. Identificare due siti di legatura nell'ileo che siano adeguatamente distanziati nel mesentere e siano privi di vasi sanguigni critici. Quindi, forare il mesentere per aggiungere legature nei siti identificati.

Successivamente, sezionare l'ileo per generare un'ansa ileale isolata con un afflusso di sangue intatto e una membrana mesenterica. Successivamente, iniettare un tampone adatto nel circuito per eliminare il contenuto dei rifiuti.

Ora, lega le estremità aperte dell'ansa ileale. Usa una siringa per iniettare la chemochina, una sospensione proteica chemiotattica, nell'ansa, provocandone il gonfiaggio. Riportare gli organi nell'addome.

Sutura l'incisione. Consenti al mouse di riprendersi. Alla fine, le molecole di chemochine passano attraverso la parete ileale nei vasi sanguigni adiacenti, causando infiammazione e afflusso di leucociti.

Dopo aver raggiunto un piano chirurgico di anestesia, inizia strofinando il pelo della linea mediana addominale con tamponi imbevuti di alcol o una spugna di garza imbevuta di etanolo al 70%. Non bagnare un'ampia area di pelo con alcol per prevenire l'ipotermia. Usando le forbici, eseguire una laparotomia della linea mediana. Praticare un'incisione orizzontale al centro dell'addome ed esporre il peritoneo, facendo attenzione a non ferire gli organi intra-addominali.

Posizionare una garza di cotone bagnata pretagliata sulla cavità intra-addominale esposta. Utilizzare tamponi di cotone bagnati per mobilizzare ed esteriorizzare il cieco e posizionarlo con cura su una garza di cotone bagnata. Quindi, mobilizzare ed esteriorizzare delicatamente l'ileo. Distribuire almeno 6 centimetri di ileo terminale sulla garza di cotone bagnata senza interrompere i vasi mesenterici e l'afflusso di sangue.

Mantieni sempre umidi i tessuti esposti con HBSS caldo. Identificare l'arteria principale che irrora l'ileo nel mesentere vicino al cieco. Quindi, individua due siti di legatura nel mesentere che sono privi di vasi sanguigni critici. Afferrare saldamente l'ileo terminale con una pinza per tessuti smussati e utilizzare una pinza a punta sottile per fenestrare il mesentere, evitando i vasi sanguigni.

Posizionare la sutura di seta attraverso la perforazione e fare un nodo chirurgico per creare la prima legatura. Usa il righello per misurare a 4 centimetri di distanza dalla prima legatura e crea la seconda legatura. Tagliare con cura accanto a ciascuna legatura con forbici sottili per isolare l'ansa ileale di 4 centimetri, mantenendo intatto l'afflusso di sangue e la membrana mesenterica.

Sciacquare delicatamente il contenuto del segmento dell'ansa ileale con HBSS caldo utilizzando un tubo di alimentazione giallo flessibile collegato a una siringa da 10 millilitri. Assicurati di sciacquare il contenuto luminale dalla cavità addominale per mantenere pulito il sito chirurgico. Legare le due estremità tagliate dell'ansa ileale arrossata con sutura di seta.

Utilizzare una siringa da 1 millilitro con un ago calibro 30 per iniettare lentamente 250 microlitri di reagente, come FITC-dextrans o chemochina nel lume intestinale. L'ansa ileale si gonfierà, provocando una moderata distensione della mucosa.

Chiudere la parete addominale utilizzando un portaaghi, una pinza anatomica e suture di seta 3.0 non assorbibili con un ago da taglio inverso. Dopo aver asciugato l'animale per prevenire l'ipotermia, metterlo in una camera di anestesia a temperatura regolata per il periodo di incubazione.