Un test in vitro per studiare l'interazione tra neutrofili e biofilm

Un biofilm è una comunità di batteri aderenti alla superficie incorporati all'interno di una matrice di sostanze polimeriche extracellulari, EPS, di origine microbica.

Per studiare le interazioni cellula immunitaria-biofilm in vitro, prendere un vetrino con un canale contenente un biofilm di Staphylococcus aureus, un patogeno opportunista. I batteri ingegnerizzati esprimono una proteina fluorescente per la rilevazione microscopica. Il canale si collega a serbatoi riempiti di terreno per fornire sostanze nutritive ai batteri.

Aggiungere una sospensione di neutrofili marcati con un colorante fluorescente per il tracciamento delle cellule. Il terreno contiene anche un omodidimero di etidio, che colora il DNA delle cellule morte. Incubare in condizioni fisiologiche.

I recettori di riconoscimento dei modelli sui neutrofili si legano ai modelli molecolari associati ai patogeni sui batteri. Il legame induce i neutrofili a fagocitare i batteri e a produrre specie reattive extracellulari dell'ossigeno o ROS, uccidendo i batteri.

Per eludere la risposta immunitaria, i batteri rilasciano enzimi disintossicanti che diminuiscono i ROS e la tossina leucocidina che causa la morte cellulare. La le