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Iniziare con le cellule staminali nervose coltivate su un vetrino coprioggetti rivestito di matrice extracellulare in un mezzo di differenziazione adatto.
Prendi una siringa contenente un plasma freddo, che è uno stato della materia contenente vari componenti reattivi, tra cui radiazioni UV e particelle cariche.
Posizionare l'ugello della siringa per plasma a un'altezza specifica sopra la coltura di cellule nervose.
Avvia il getto di plasma.
Il plasma interagisce con le cellule staminali nervose, attivandole.
Rimuovere il vecchio terreno di coltura. Aggiungere un terreno di coltura fresco e incubare.
Nel tempo, le cellule staminali nervose attivate producono proiezioni.
Scartare il mezzo.
Sotto un microscopio ottico a contrasto di fase invertito, la presenza di proiezioni allungate sulle cellule, simili a quelle che si trovano in una cellula nervosa, indica la differenziazione.
Per trattare al plasma le cellule staminali neurali, impostare la distanza tra l'ugello della siringa e il primo pozzetto di cellule a 15 millimetri. Sostituire i surnatanti nelle colture di cellule staminali neurali con 800 microlitri di terreno di differenziazione fresco e posizionare la piastra sotto i getti di plasma.
Assicurandosi che l'ugello della siringa sia fissato al centro di ciascun pozzetto, creare tre pozzetti con plasma per 60 secondi per trattamento e tre pozzetti con l'1% di elio e ossigeno gassoso per 60 secondi per trattamento, lasciando tre pozzetti non trattati come controlli. Quindi, sostituire i surnatanti con un millilitro di terreno di differenziazione fresco e rimettere le cellule nell'incubatore per sei giorni. Controllare quotidianamente lo stato di differenziazione dei diversi gruppi con un microscopio ottico a contrasto di fase invertito.
Dopo il trattamento, lasciare che le cellule si equilibrino completamente nel terreno condizionato per circa un'ora prima di sostituire il surnatante con un terreno di differenziazione fresco.