Name: Protocollo per la differenziazione delle cellule staminali pluripotenti indotte dalluomo in culture miste di neuroni e glia per la sperimentazione della neurotossicità (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-06-09T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 2 s
Description: Scopri il protocollo per differenziare le cellule staminali pluripotenti indotte umane in culture miste di neuroni e glia. Questo metodo consente di valutare la neurotossicità e testare farmaci in un modello umano alternativo alle linee tumorali.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Gli autori vorrebbero ringraziare il dottor Marc Peschanski (I-Stem, Évry, Francia), per la fornitura di IMR90-hiPSCs; Dr. Giovanna Lazzari e Dr. Silvia Colleoni (Avantea srl, Cremona, Italia); Dr. Simone Haupt (Università di Bonn, Germania); Dott.ssa Tiziana Santini (Istituto Italiano di Tecnologia, Roma), per la consulenza sulla valutazione delle macchie di immunofluorescenza; Dr. Benedetta Accordi, Dr. Elena Rampazzo e Dr. Luca Persano (Università di Padova, Italia), per i loro contributi all&#39;analisi della RPPA e alla convalida dell&#39;anticorpo. Finanziamenti: questo lavoro è stato sostenuto dal progetto &quot;SCR &amp; Tox&quot; finanziato dall&#39;UE (accordo di sovvenzione n. 266753).

<ol><li>NRC. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Toxicity+Testing+in+the+21st+Century%3A+A+Vision+and+a+Strategy%22">Toxicity Testing in the 21st Century: A Vision and a Strategy</a>. , National Academy Press. Washington, DC. (2007).</li>
<li>Drews, K., Jozefczuk, J., Prigione, A., Adjaye, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+induced+pluripotent+stem+cells--from+mechanisms+to+clinical+applications%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mol+Med+%28Berl%29%22%5BJournal%5D)">Human induced pluripotent stem cells--from mechanisms to clinical applications.</a> J Mol Med (Berl). 90 (7), 735-745 (2012).</li>
<li>Ho, P. J., Yen, M. L., Yet, S. F., Yen, B. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+applications+of+human+pluripotent+stem+cells%3A+possibilities+and+challenges%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Transplant%22%5BJournal%5D)">Current applications of human pluripotent stem cells: possibilities and challenges.</a> Cell Transplant. 21 (5), 801-814 (2012).</li>
<li>Krueger, W. H., Swanson, L. C., Tanasijevic, B., Rasmussen, T. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Natural+and+artificial+routes+to+pluripotency%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Natural and artificial routes to pluripotency.</a> Int J Dev Biol. 54 (11-12), 1545-1564 (2010).</li>
<li>Pistollato, F., Bremer-Hoffmann, S., Healy, L., Young, L., Stacey, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Standardization+of+pluripotent+stem+cell+cultures+for+toxicity+testing%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Opin+Drug+Metab+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Standardization of pluripotent stem cell cultures for toxicity testing.</a> Expert Opin Drug Metab Toxicol. 8 (2), 239-257 (2012).</li>
<li>Pistollato, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+pluripotent+stem+cell+derived+neuronal+model+to+identify+chemically+induced+pathway+perturbations+in+relation+to+neurotoxicity%3A+effects+of+CREB+pathway+inhibition%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicol+Appl+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Development of a pluripotent stem cell derived neuronal model to identify chemically induced pathway perturbations in relation to neurotoxicity: effects of CREB pathway inhibition.</a> Toxicol Appl Pharmacol. 280 (2), 378-388 (2014).</li>
<li>Zagoura, D., Canovas-Jorda, D., Pistollato, F., Bremer-Hoffmann, S., Bal-Price, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+the+rotenone-induced+activation+of+the+Nrf2+pathway+in+a+neuronal+model+derived+from+human+induced+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Neurochem+Int%22%5BJournal%5D)">Evaluation of the rotenone-induced activation of the Nrf2 pathway in a neuronal model derived from human induced pluripotent stem cells.</a> Neurochem Int. , (2016).</li>
<li>Standard operating procedure for differentiation of human induced pluripotent stem cells into post-mitotic neurons and glial cells. EURL ECVAM. , Available from:
 <a target="_blank" href="https://ecvam-dbalm.jrc.ec.europa.eu/methods-and-protocols/protocol/standard-operating-procedure-for-differentiation-of-human-induced-pluripotent-stem-cells-into-post-mitotic-neurons-and-glial-cells-%28mixed-culture%29-protocol-no.-165/key/p_1570">https://ecvam-dbalm.jrc.ec.europa.eu/methods-and-protocols/protocol/standard-operating-procedure-for-differentiation-of-human-induced-pluripotent-stem-cells-into-post-mitotic-neurons-and-glial-cells-%28mixed-culture%29-protocol-no.-165/key/p_1570</a> (2016).</li>
<li>Standard operating procedure for expansion of rosette-derived neural stem cells. EURL ECVAM. , Available from:
	 <a target="_blank" href="https://ecvam-dbalm.jrc.ec.europa.eu/methods-and-protocols/protocol/standard-operating-procedure-for-expansion-of-rosette-derived-neural-stem-cells-protocol-no.-166/key/p_1571">https://ecvam-dbalm.jrc.ec.europa.eu/methods-and-protocols/protocol/standard-operating-procedure-for-expansion-of-rosette-derived-neural-stem-cells-protocol-no.-166/key/p_1571</a> (2016).</li>
<li>Schmittgen, T. D., Livak, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analyzing+real-time+PCR+data+by+the+comparative+C%28T%29+method%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Analyzing real-time PCR data by the comparative C(T) method.</a> Nat Protoc. 3 (6), 1101-1108 (2008).</li>
<li>Brien, P. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+concordance+of+drug-induced+human+hepatotoxicity+with+in+vitro+cytotoxicity+measured+in+a+novel+cell-based+model+using+high+content+screening%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Toxicol%22%5BJournal%5D)">High concordance of drug-induced human hepatotoxicity with in vitro cytotoxicity measured in a novel cell-based model using high content screening.</a> Arch Toxicol. 80 (9), 580-604 (2006).</li>
<li>Accordi, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+protein+network+activation+mapping+reveals+new+potential+molecular+drug+targets+for+poor+prognosis+pediatric+BCP-ALL%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Functional protein network activation mapping reveals new potential molecular drug targets for poor prognosis pediatric BCP-ALL.</a> PLoS One. 5 (10), e13552(2010).</li>
<li>Vassallo, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+multi-laboratory+evaluation+of+microelectrode+array-based+measurements+of+neural+network+activity+for+acute+neurotoxicity+testing%5BTitle%5D)+AND+%22Neurotoxicology%22%5BJournal%5D)">A multi-laboratory evaluation of microelectrode array-based measurements of neural network activity for acute neurotoxicity testing.</a> Neurotoxicology. , (2016).</li>
<li>Shamblott, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+embryonic+germ+cell+derivatives+express+a+broad+range+of+developmentally+distinct+markers+and+proliferate+extensively+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Human embryonic germ cell derivatives express a broad range of developmentally distinct markers and proliferate extensively in vitro.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 98 (1), 113-118 (2001).</li>
<li>Bryan, H. K., Olayanju, A., Goldring, C. E., Park, B. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Nrf2+cell+defence+pathway%3A+Keap1-dependent+and+-independent+mechanisms+of+regulation%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">The Nrf2 cell defence pathway: Keap1-dependent and -independent mechanisms of regulation.</a> Biochem Pharmacol. 85 (6), 705-717 (2013).</li>
<li>Tufekci, K. U., Civi Bayin, E., Genc, S., Genc, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Nrf2%2FARE+Pathway%3A+A+Promising+Target+to+Counteract+Mitochondrial+Dysfunction+in+Parkinson%27s+Disease%5BTitle%5D)+AND+%22Parkinsons+Dis%22%5BJournal%5D)">The Nrf2/ARE Pathway: A Promising Target to Counteract Mitochondrial Dysfunction in Parkinson's Disease.</a> Parkinsons Dis. , 314082(2011).</li>
<li>Kovac, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nrf2+regulates+ROS+production+by+mitochondria+and+NADPH+oxidase%5BTitle%5D)+AND+%22Biochim+Biophys+Acta%22%5BJournal%5D)">Nrf2 regulates ROS production by mitochondria and NADPH oxidase.</a> Biochim Biophys Acta. 1850 (4), 794-801 (2015).</li>
<li>Lee, J. M., Shih, A. Y., Murphy, T. H., Johnson, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NF-E2-related+factor-2+mediates+neuroprotection+against+mitochondrial+complex+I+inhibitors+and+increased+concentrations+of+intracellular+calcium+in+primary+cortical+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">NF-E2-related factor-2 mediates neuroprotection against mitochondrial complex I inhibitors and increased concentrations of intracellular calcium in primary cortical neurons.</a> J Biol Chem. 278 (39), 37948-37956 (2003).</li>
<li>Itoh, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+Nrf2%2Fsmall+Maf+heterodimer+mediates+the+induction+of+phase+II+detoxifying+enzyme+genes+through+antioxidant+response+elements%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Biophys+Res+Commun%22%5BJournal%5D)">An Nrf2/small Maf heterodimer mediates the induction of phase II detoxifying enzyme genes through antioxidant response elements.</a> Biochem Biophys Res Commun. 236 (2), 313-322 (1997).</li>
<li>Li, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nrf2%2FARE+pathway+activation%2C+HO-1+and+NQO1+induction+by+polychlorinated+biphenyl+quinone+is+associated+with+reactive+oxygen+species+and+PI3K%2FAKT+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Chem+Biol+Interact%22%5BJournal%5D)">Nrf2/ARE pathway activation, HO-1 and NQO1 induction by polychlorinated biphenyl quinone is associated with reactive oxygen species and PI3K/AKT signaling.</a> Chem Biol Interact. , 56-67 (2014).</li>
<li>Cannon, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+highly+reproducible+rotenone+model+of+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol+Dis%22%5BJournal%5D)">A highly reproducible rotenone model of Parkinson's disease.</a> Neurobiol Dis. 34 (2), 279-290 (2009).</li>
<li>Sherer, T. B., Kim, J. H., Betarbet, R., Greenamyre, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subcutaneous+rotenone+exposure+causes+highly+selective+dopaminergic+degeneration+and+alpha-synuclein+aggregation%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Subcutaneous rotenone exposure causes highly selective dopaminergic degeneration and alpha-synuclein aggregation.</a> Exp Neurol. 179 (1), 9-16 (2003).</li>
<li>Testa, C. M., Sherer, T. B., Greenamyre, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rotenone+induces+oxidative+stress+and+dopaminergic+neuron+damage+in+organotypic+substantia+nigra+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res+Mol+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Rotenone induces oxidative stress and dopaminergic neuron damage in organotypic substantia nigra cultures.</a> Brain Res Mol Brain Res. 134 (1), 109-118 (2005).</li>
<li>Tukey and Dunnett methods. GraphPad. , Available from:
 <a target="_blank" href="http://www.graphpad.com/guides/prism/7/statistics/index.htm?stat_the_methods_of_tukey_and_dunne.htm">http://www.graphpad.com/guides/prism/7/statistics/index.htm?stat_the_methods_of_tukey_and_dunne.htm</a> (2017).</li>
<li>Zhou, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-efficiency+induction+of+neural+conversion+in+human+ESCs+and+human+induced+pluripotent+stem+cells+with+a+single+chemical+inhibitor+of+transforming+growth+factor+beta+superfamily+receptors%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">High-efficiency induction of neural conversion in human ESCs and human induced pluripotent stem cells with a single chemical inhibitor of transforming growth factor beta superfamily receptors.</a> Stem Cells. 28 (10), 1741-1750 (2010).</li>
<li>Topol, A., Tran, N. N., Brennand, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Guide+to+Generating+and+Using+hiPSC+Derived+NPCs+for+the+Study+of+Neurological+Diseases%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">A Guide to Generating and Using hiPSC Derived NPCs for the Study of Neurological Diseases.</a> J Vis Exp. (96), e52495(2015).</li>
<li>Jiang, Y., Zhang, M. J., Hu, B. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Specification+of+functional+neurons+and+glia+from+human+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Protein+Cell%22%5BJournal%5D)">Specification of functional neurons and glia from human pluripotent stem cells.</a> Protein Cell. 3 (11), 818-825 (2012).</li>
<li>Parsons, X. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+derivation+of+human+neuronal+progenitors+and+neurons+from+pluripotent+human+embryonic+stem+cells+with+small+molecule+induction%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Efficient derivation of human neuronal progenitors and neurons from pluripotent human embryonic stem cells with small molecule induction.</a> J Vis Exp. (56), e3273(2011).</li>
<li>Shi, Y., Kirwan, P., Livesey, F. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Directed+differentiation+of+human+pluripotent+stem+cells+to+cerebral+cortex+neurons+and+neural+networks%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Directed differentiation of human pluripotent stem cells to cerebral cortex neurons and neural networks.</a> Nat Protoc. 7 (10), 1836-1846 (2012).</li>
<li>Zeng, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Specification+of+region-specific+neurons+including+forebrain+glutamatergic+neurons+from+human+induced+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Specification of region-specific neurons including forebrain glutamatergic neurons from human induced pluripotent stem cells.</a> PLoS One. 5 (7), e11853(2010).</li>
<li>Zeng, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+in+vitro+model+of+human+dopaminergic+neurons+derived+from+embryonic+stem+cells%3A+MPP%2B+toxicity+and+GDNF+neuroprotection%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropsychopharmacology%22%5BJournal%5D)">An in vitro model of human dopaminergic neurons derived from embryonic stem cells: MPP+ toxicity and GDNF neuroprotection.</a> Neuropsychopharmacology. 31 (12), 2708-2715 (2006).</li>
<li>Paşca, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+cortical+neurons+and+astrocytes+from+human+pluripotent+stem+cells+in+3D+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Functional cortical neurons and astrocytes from human pluripotent stem cells in 3D culture.</a> Nat Methods. 12 (7), 671-678 (2015).</li>
<li>Almeida, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modeling+key+pathological+features+of+frontotemporal+dementia+with+C9ORF72+repeat+expansion+in+iPSC-derived+human+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathol%22%5BJournal%5D)">Modeling key pathological features of frontotemporal dementia with C9ORF72 repeat expansion in iPSC-derived human neurons.</a> Acta Neuropathol. 126 (3), 385-399 (2013).</li>
<li>Urbán, N., Guillemot, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurogenesis+in+the+embryonic+and+adult+brain%3A+same+regulators%2C+different+roles%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Neurogenesis in the embryonic and adult brain: same regulators, different roles.</a> Front Cell Neurosci. 8, 396(2014).</li>
<li>Kriegstein, A., Alvarez-Buylla, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+glial+nature+of+embryonic+and+adult+neural+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Neurosci%22%5BJournal%5D)">The glial nature of embryonic and adult neural stem cells.</a> Annu Rev Neurosci. 32, 149-184 (2009).</li>
<li>Krencik, R., Weick, J. P., Liu, Y., Zhang, Z. J., Zhang, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Specification+of+transplantable+astroglial+subtypes+from+human+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Specification of transplantable astroglial subtypes from human pluripotent stem cells.</a> Nat Biotechnol. 29 (6), 528-534 (2011).</li>
<li>Krencik, R., Zhang, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Directed+differentiation+of+functional+astroglial+subtypes+from+human+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Directed differentiation of functional astroglial subtypes from human pluripotent stem cells.</a> Nat Protoc. 6 (11), 1710-1717 (2011).</li>
<li>Nguyen, T., Nioi, P., Pickett, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Nrf2-antioxidant+response+element+signaling+pathway+and+its+activation+by+oxidative+stress%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">The Nrf2-antioxidant response element signaling pathway and its activation by oxidative stress.</a> J Biol Chem. 284 (20), 13291-13295 (2009).</li>
<li>Bal-Price, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Putative+adverse+outcome+pathways+relevant+to+neurotoxicity%5BTitle%5D)+AND+%22Crit+Rev+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Putative adverse outcome pathways relevant to neurotoxicity.</a> Crit Rev Toxicol. 45 (1), 83-91 (2015).</li>
<li>Cabezas, R., El-Bacha, R. S., Gonzalez, J., Barreto, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+functions+in+astrocytes%3A+neuroprotective+implications+from+oxidative+damage+by+rotenone%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci+Res%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial functions in astrocytes: neuroprotective implications from oxidative damage by rotenone.</a> Neurosci Res. 74 (2), 80-90 (2012).</li>
<li>Swarnkar, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Astrocyte+activation%3A+a+key+step+in+rotenone+induced+cytotoxicity+and+DNA+damage%5BTitle%5D)+AND+%22Neurochem+Res%22%5BJournal%5D)">Astrocyte activation: a key step in rotenone induced cytotoxicity and DNA damage.</a> Neurochem Res. 37 (10), 2178-2189 (2012).</li>
<li>Canovas-Jorda, D., Louisse, J., Pistollato, F., Zagoura, D., Bremer, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regenerative+toxicology%3A+the+role+of+stem+cells+in+the+development+of+chronic+toxicities%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Opin+Drug+Metab+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Regenerative toxicology: the role of stem cells in the development of chronic toxicities.</a> Expert Opin Drug Metab Toxicol. 10 (1), 39-55 (2014).</li>
</ol>

Gli autori non hanno niente da rivelare.

Questo lavoro descrive un protocollo robusto e relativamente rapido per la differenziazione di IMR90-hiPSC nei neuroni post-mitosi e nelle cellule gliali. I protocolli di differenziazione neuronali precedentemente pubblicati in base a hESC e hiPSC hanno generalmente elevati percentuali di precursori neurali 25 e 26 e un numero significativo di cellule bersaglio neuronali 27 , 28 , 29 , 30 , 31 , 32 , 33 . Analogamente, il protocollo di differenziazione qui descritto è idoneo a generare culture eterogenee di cellule neuronali GABAergiche, glutamatergiche e dopaminergiche, insieme a glia e ad una quota discreta di cellule Nestin + . La presenza di cellule neuronali glutamatergiche (~ 35-42%) e GABAergiche (~ 15-20%) suggerisce cheQuesta cultura possiede forebrain, caratteristiche corticali e la presenza di un numero discreto di neuroni dopaminergici (~ 13-20%) può anche indicare la specificità del midbrain. Inoltre, la permanenza di una modesta percentuale di cellule Nestin può risultare idonea allo studio della neurogenesi e ai possibili effetti di sostanze chimiche su NSCs, che sono principalmente limitate sia all&#39;ippocampo che alla zona subventrica (SVZ) del forebrain 34 . Ulteriori analisi di immunocitochimica e di espressione genica aiuterebbero a definire meglio la specificità regionale dei derivati ​​cellulari differenziati. Le due fasi più critiche del protocollo di differenziazione descritte in questo documento sono: (i) il taglio delle colonie hiPSC in frammenti omogenei (che sono critici per la generazione di EB con dimensioni omogenee) e (ii) il taglio delle strutture neuroectodermiche (rosette ) Per la differenziazione NSC, che richiede una significativa abilità manualeE precisione per evitare la raccolta di cellule mesodermiche e endodermiche che possono ridurre le proporzioni di neuroni e cellule gliali ottenute dopo la differenziazione. È fondamentale caratterizzare i fenotipi delle cellule durante l&#39;espansione (come colonie indifferenziate o NSCs) e durante tutti i passaggi di differenziazione. In particolare, i profili di espressione genica e proteica dei derivati ​​neuronali / gliali cellulari dovrebbero mostrare upregulation e attivazione di vie di segnalazione correlate al neurone, mentre l&#39;espressione di marcatori pluripotenziali dovrebbe essere ridotta. La generazione di EB e dei derivati ​​neuroectodermici (rosette) può essere impegnata manualmente e soggetta a variabilità. Per questo motivo abbiamo sviluppato un protocollo per l&#39;espansione di NSC derivanti da rosette e la loro ulteriore differenziazione nelle cellule neuronali / gliali. Le limitazioni possibili di questo protocollo di differenziazione sono principalmente (i) la percentuale relativamente bassa di dDerivati ​​ialenti differenziati e (ii) la mancanza di funzioni di rete neuronali mature (come dimostra la mancanza di esplosioni). Inoltre, alcune sottopopolazioni di astrociti possono funzionare come progenitori primari o NSCs 35 . Mentre le cellule double-positive Nestin / GFAP non sono state osservate in questa coltura cellulare differenziata (dati non mostrati), si ipotizza che le cellule GFAP + in queste culture miste siano progenitori astrocitici e astrociti. È plausibile che estendendo il tempo della differenziazione, il numero di astrociti può aumentare e la loro morfologia può diventare più matura, come già indicato da precedenti lavori del gruppo di Zhang 36 , 37 . Nel nuovo paradigma di test sulla tossicità, la conoscenza delle perturbazioni dei percorsi biologici indotti dalle sostanze chimiche è di fondamentale importanza nel valutare le avversità chimiche. Pertanto, i sistemi di test in vitro dovrebbero essere in grado diRiferiscono effetti negativi ai disturbi delle vie di segnalazione, secondo il concetto del percorso espositivo avverso (AOP). Come prova di concetto, il rotenone può essere utilizzato per valutare l&#39;attivazione del percorso Nrf2, che è coinvolto nella difesa cellulare contro lo stress ossidativo o elettrofilo 38 e lo stress ossidativo è un importante e comune avvenimento chiave in vari AOPs rilevanti per Neurotoxicity dello sviluppo e dell&#39;adulto 39 . Il Rotenone dovrebbe provocare l&#39;attivazione del sentiero Nrf2, che può essere dimostrato dalla traslocazione nucleare della proteina Nrf2 e da una maggiore espressione degli enzimi Nrf2-target, tra cui NQO1 e SRXN1. È stato trovato che il rotenone induce un aumento dose-dipendente dei livelli di proteina GFAP, indicativo di attivazione astrocitica 40 , 41 . Rotenone diminuisce anche il numero di cellule dopaminergiche (TH + ), che è in accordo con previGli studi in vitro e in vivo che dimostrano la morte delle cellule dopaminergiche dipendenti da rotenone, poiché questo tipo di neurone è particolarmente sensibile allo stress ossidativo 21 , 22 , 23 . In conclusione, questo modello di coltura cellulare neuronale e gliale di cellule hiPSC è uno strumento prezioso per valutare gli effetti neurotossici di sostanze chimiche che provocano lo stress ossidativo, con conseguente attivazione della via Nrf2. Poiché questo protocollo di differenziazione consente la generazione di colture miste di cellule neuronali (neuroni GABAergici, dopaminergici e glutamatergici) e astrociti, può risultare opportuno studiare la crosstalk tra neuroni e glia in condizioni fisiologiche e patologiche, come nelle malattie neurodegenerative ( Ad esempio, la malattia di Parkinson). Inoltre, la presenza di una percentuale significativa di NSC può aiutare a valutare i possibili effetti delle sostanze chimiche sui programmi neuraliChe sono noti per essere il principale obiettivo di mutazioni chimiche-indotte o infezioni virali 42 .

Il rapporto 1 del Consiglio Nazionale di Ricerca USA ha previsto un nuovo paradigma di test sulla tossicità in cui i test di regolamentazione della tossicità sarebbero stati spostati da un approccio che si basa sui cambiamenti fenotipici osservati negli animali ad un approccio focalizzato sui test meccanici in vitro utilizzando le cellule umane. I derivati ​​pluripotenti di cellule staminali (PSC) possono rappresentare alternative ai modelli delle cellule tumorali, in quanto le cellule ottenute possono similmente assomigliare alle condizioni fisiologiche dei tessuti umani e fornire strumenti più rilevanti per studiare effetti collaterali indotti da sostanze chimiche. I due principali tipi di colture PSC che sono più promettenti per la sperimentazione della tossicità sono le cellule staminali embrionali umane (hESCs) e le cellule staminali pluripotenti indotte dall&#39;uomo (hiPSCs), attualmente ampiamente utilizzate nei settori della ricerca di base e della medicina rigenerativa 2 , 3 . Questa competenza può ora essere sfruttata per lo sviluppo di una nuova classe di toxicoloGical in vitro per identificare i percorsi fisiologici perturbed coinvolti nello sviluppo di effetti negativi in vivo . Tuttavia, i metodi di prova per le valutazioni di sicurezza regolamentare basati su hESC non sarebbero probabilmente accettati da tutti gli Stati membri dell&#39;UE e da paesi in tutto il mondo a causa di eventuali preoccupazioni etiche e di diverse politiche legislative nazionali che regolano l&#39;uso di cellule embrioni. HiPSCs condividono caratteristiche simili a quelle dei hESCs 4 , 5 e hanno un grande potenziale per metodi in vitro , sia per identificare obiettivi terapeutici, sia per valutazioni di sicurezza. Inoltre, la tecnologia hiPSC mitiga i vincoli di un pool limitato di donatori e le preoccupazioni etiche associate a cellule embrione. Una grande sfida per i hiPSC è la dimostrazione che queste cellule possono generare riproducibilmente una gamma significativa di derivati ​​cellulari tossicologicamente rilevanti,Con caratteristiche e risposte tipiche dei tessuti umani. Livelli predefiniti dei marcatori selezionati vengono generalmente utilizzati per caratterizzare le popolazioni cellulari dopo il processo di differenziazione e per fornire approfondimenti sulla stabilità del processo di differenziazione. I precedenti lavori hanno valutato l&#39;idoneità dei hiPSC per generare colture miste di cellule neuronali e gliali e per valutare gli effetti di rotenone, inibitore del complesso respiratorio mitocondriale I, sull&#39;attivazione del percorso Nrf2, un regolatore chiave dei meccanismi di difesa antiossidanti in Molti tipi di cellule 6 , 7 . Questo lavoro descrive un protocollo utilizzato per la differenziazione di hiPSCs in colture neuronali e gliali miste, fornendo dettagli sui percorsi di segnalazione (livello di gene e proteine) che vengono attivati ​​sulla differenziazione neuronale / gliale. Inoltre, il lavoro mostra i risultati rappresentativi dimostrando come questoIl modello hi-CSC derivato da neuroni e gliali può essere utilizzato per valutare l&#39;attivazione di segnalazione Nrf2 indotta da un trattamento acuto (24h) con rotenone, consentendo la valutazione dell&#39;induzione dello stress ossidativo. I fibroblasti IMR90 sono stati riprogrammati in hiPSC a I-Stem (Francia) mediante la trasduzione virale di 2 fattori di trascrizione (Oct4 e Sox2) usando i vettori pMIG 6 . Possono essere applicati modelli analoghi hiPSC. I protocolli descritti qui di seguito riassumono tutte le fasi della differenziazione dei hiPSC in cellule staminali neurali (NSCs) e successivamente in colture miste di neuroni post-mitotici e cellule gliali (passaggi 1 e 2), vedere anche il sito web EURL ECVAM DBALM per una descrizione dettagliata Il protocollo) 8 . Un protocollo aggiuntivo per l&#39;isolamento, l&#39;espansione, la crioconservazione e l&#39;ulteriore differenziazione dei NSCs in neuroni misti e cellule gliali sono dettagliate nei passaggi 3 e 4 (si fa anche riferimento al EURL ECVAM DBALMBsite per una descrizione dettagliata di questo protocollo) 9 . Il passo 5 descrive le analisi che possono essere effettuate per valutare l&#39;identità fenotipica delle cellule durante le diverse fasi di impegno e differenziazione.

protocollo per la differenziazione delle cellule staminali pluripotenti indotte dall&#39;uomo in culture miste di neuroni e glia per la sperimentazione della neurotossicità

Protocol for the Differentiation of Human Induced Pluripotent Stem Cells into Mixed Cultures of Neurons and Glia for Neurotoxicity Testing

Le cellule staminali pluripotenti umane possono differenziarsi in vari tipi di cellule che possono essere applicati a test di tossicità in vitro basati sull&#39;uomo. Uno dei maggiori vantaggi è che la riprogrammazione delle cellule somatiche per produrre cellule staminali pluripotenti indotte dall&#39;uomo (hiPSC) evita le questioni etiche e legislative legate all&#39;uso delle cellule staminali embrionali umane (hESCs). I HiPSCs possono essere ampliati e differenziati in modo efficace in diversi tipi di cellule neuronali e gliali, che servono come sistemi di test per test di tossicità e, in particolare, per la valutazione di diversi percorsi coinvolti nella neurotossicità. Questo lavoro descrive un protocollo per la differenziazione di hiPSCs in colture miste di cellule neuronali e gliali. Sono definiti i percorsi di segnalazione regolati e / o attivati ​​dalla differenziazione neuronale. Queste informazioni sono fondamentali per l&#39;applicazione del modello cellulare al nuovo paradigma di test sulla tossicità, in cui le sostanze chimiche vengono valutate sulla base della loro capacità diRturbare percorsi biologici. Come prova di concetto, il rotenone, inibitore del complesso respiratorio mitocondriale I, è stato utilizzato per valutare l&#39;attivazione del percorso di segnalazione Nrf2, un regolatore chiave del meccanismo di difesa cellulare anti-ossidante-risposta-elemento (ARE) .

Le cellule staminali pluripotenti indotte dall&#39;uomo (hiPSCs) sono considerate un potente strumento per la screening di droga e chimica e per lo sviluppo di nuovi modelli in vitro per la sperimentazione di tossicità, compresa la neurotossicità. Qui viene descritto un protocollo dettagliato per la differenziazione di hiPSC in neuroni e glia.

Protocollo per la differenziazione delle cellule staminali pluripotenti indotte dall&#39;uomo in culture miste di neuroni e glia per la sperimentazione della neurotossicità

Human pluripotent stem cells can differentiate into various cell types that can be applied to human-based in vitro toxicity assays. One major advantage is ...

L'obiettivo generale di questa procedura è differenziare cellule staminali neurali derivate da colonie di cellule staminali pluripotenti indotte umane in colture miste di cellule neuronali e gliali. Questo modello è adatto per lo screening della tossicità di farmaci e sostanze chimiche. Questo modello in vitro può essere utilizzato per valutare le alterazioni indotte da sostanze chimiche nei percorsi di segnalazione attivati durante il processo di differenziazione neuronale e gliale.Il principale vantaggio di questo sistema è l'utilizzo di un modello umano derivato da cellule staminali pluripotenti indotte, che rappresenta un'alternativa alle cellule tumorali e alle colture primarie animali tradizionalmente impiegate, consentendo lo studio della neurotossicità in una popolazione mista di cellule neuronali e gliali. La procedura sarà dimostrata da Francesca Pistollato, la nostra ricercatrice post-dottorato, e da Carolina Nunes, una studentessa post-laurea del nostro laboratorio. Iniziare con il passaggio delle colonie di hiPSC.Lavorando sotto un microscopio stereoscopico a un ingrandimento di quattro X all'interno di una cappa a flusso laminare, utilizzare una siringa da un millilitro con un ago da 30 gauge. Tagliare le colonie di cellule staminali in quadrati di circa 200 micron per 200 micron. L'escissione delle colonie richiede buone capacità manuali per ottenere frammenti di dimensioni uniformi.L'utilizzo di strumenti di taglio disponibili in commercio può essere d'aiuto. Successivamente, utilizzare una pipetta da 200 microlitri per staccare i frammenti di colonia dalla superficie della piastra, aspirando delicatamente il mezzo al di sotto per sollevare i frammenti. Trasferire circa 100 frammenti di colonia in una piastra da 60 millimetri rivestita con matrice DMEM F12 qualificata e contenente quattro millilitri di mezzo completo per hiPSC.Quindi incubare la nuova piastra a 37 gradi Celsius e 5% di anidride carbonica. Eseguire un cambio totale del mezzo ogni giorno ed esaminare la morfologia delle colonie utilizzando un microscopio a contrasto di fase con ingrandimenti 4X e 10X. Al giorno zero della procedura di differenziamento, rinnovare il mezzo degli iPSC umani aggiungendo tre millilitri di mezzo per ogni piastra di Petri da 60 millimetri.Quindi tagliare e staccare i frammenti di 200 micron come in precedenza. Aspirare con pipetta i frammenti staccati e il mezzo in un tubo da 15 millilitri. Lavare la piastra con due millilitri di mezzo completo per hiPSC e recuperare tutti i frammenti.Quindi centrifugare a 112 ×g per un minuto. Dopo la centrifugazione, aspirare il soprannatante e risospendere delicatamente i frammenti in cinque millilitri di mezzo completo per EB da iPSC umane. Piastrare il volume totale in una piastra per colture cellulari ad attaccamento ultra basso da 60 millimetri.Incubare la piastra durante la notte a 37 gradi Celsius e 5% di anidride carbonica. Il giorno successivo, esaminare le cellule con il microscopio invertito. I corpi embrionoidi del primo giorno dovrebbero apparire arrotondati e distinti l'uno dall'altro, come mostrato qui.Quindi pipettare i corpi embrionoidi e il mezzo dalla piastra e trasferirli in un tubo da 15 millilitri. Centrifugare i corpi embrionoidi a 112 ×g per un minuto. Al secondo giorno, aspirare la soluzione standard di rivestimento della matrice da una piastra da 60 millimetri precedentemente preparata e aggiungere cinque millilitri di mezzo completo di induzione neuroepiteliale, o NRI, alla piastra.Lavorando sotto il microscopio stereoscopico con un ingrandimento di quattro X e utilizzando una pipetta da 200 microlitri, raccogliere circa 50 corpi embrionoidi in sospensione e trasferirli in una piastra rivestita. Quindi incubare la piastra a 37 gradi Celsius e 5% di anidride carbonica. Il giorno successivo, giorno tre della procedura di differenziazione, esaminare la piastra al microscopio con un ingrandimento di 10X per verificare che tutti i corpi embrionoidi siano attaccati.Quindi eseguire delicatamente un completo cambio di mezzo con mezzo NRI completo. Cambiare il mezzo NRI ogni due giorni fino al giorno sette, quando dovrebbero essere visibili aggregati neuroepiteliali simili a rosette. Al giorno sette, rivestire una piastra a 96 pozzetti pipettando 100 microlitri di matrice standard diluita in mezzo di coltura in ciascun pozzetto.All'ottavo giorno, tagliare gli aggregati di tipo rosetta in frammenti sotto un microscopio stereoscopico a 10X di ingrandimento, in condizioni sterili. Si noti che le rosette tendono a staccarsi facilmente dalla piastra quando vengono toccate con l'ago. In tal caso, disgregare parzialmente la rosetta staccata mediante la punta dell'ago.Se le rosette rimarranno parzialmente attaccate, utilizzare una pipetta da 200 microlitri per completare il distacco dei frammenti di rosetta. Il prelievo dei frammenti di rosetta richiede buone capacità manuali e precisione al fine di evitare di tagliare derivati neurectodermici. Successivamente, raccogliere i frammenti di rosetta e il relativo mezzo in un tubo conico da 15 millilitri.Risciacquare la piastra con due millilitri di mezzo NRI per recuperare tutti i frammenti. Quindi centrifugare i frammenti di rosetta a 112 × g per uno o due minuti. Dopo aver aspirato il soprannatante, risospendere delicatamente il pellet in un millilitro di DPBS 1X preriscaldato senza calcio e magnesio.Pipettare delicatamente su e gi&ugrave; i frammenti di rosetta per dissociarli parzialmente. Quindi aggiungere quattro millilitri di mezzo NRI completo e contare le cellule utilizzando il blu di tripano e un contatore cellulare automatico. Successivamente, aspirare la soluzione di rivestimento standard dalla piastra a 96 pozzetti e depositare le cellule nei pozzetti a una densit&agrave; di circa 15.000 cellule per centimetro quadrato in mezzo NRI.Incubare la piastra durante la notte a 37 gradi Celsius e 5% di anidride carbonica. Al giorno 10, effettuare un completo cambio di mezzo utilizzando il mezzo di differenziamento neuronale completo. Questa immagine rappresentativa mostra rosette dopo 12 giorni in vitro, colorate per la nestina in verde e per la beta-tubulina III in rosso.Qui, cellule coltivate per 28 giorni in vitro sono state colorate per la beta-tubulina tre in rosso e per NF200 in verde. Questa immagine rappresentativa mostra cellule neuronali differenziate da NSC dopo 21 giorni in vitro, colorate per NF200 in rosso e per tow in verde. Qui, cellule gliali della stessa coltura sono state colorate per GFAP in rosso.Questo istogramma confronta la quantificazione di cellule positive per nestina, MAP2, GFAP, acido gamma-amminobutirrico, trasportatore vescicolare del glutammato 1 e tirosina idrossilasi in derivati di IMR90 hiPSC e cellule differenziate da NSC derivati da IMR90 hiPSC. Queste immagini in contrasto di fase, ottenute con un obiettivo 10X, mostrano cellule staminali neurali in fase di differenziamento dopo 21 giorni. Seguendo queste procedure, è possibile effettuare altre analisi, come la PCR quantitativa in tempo reale e il reanalisi multilaterale, al fine di valutare la fisiologia e il fenotipo delle cellule neuronali e gliali e analizzare l'effetto di sostanze chimiche.Non dimenticare che lavorare con composti chimici può essere estremamente pericoloso. Per questo motivo, è sempre necessario adottare le opportune precauzioni utilizzando occhiali protettivi, guanti o mascherina sotto la cappa a flusso laminare, specialmente durante i trattamenti chimici. Dopo aver visto questo video, dovresti avere una buona comprensione di come ottenere una popolazione mista di neuroni e cellule gliali differenziate a partire da cellule staminali pluripotenti indotte umane, che rappresenta un modello idoneo, un modello *in vitro*, per lo sviluppo di test di neurotossicità.

protocol-for-differentiation-human-induced-pluripotent-stem-cells

Research

Ricerca

JoVE Journal

Developmental Biology

Biologia dello sviluppo

Questo video mostra una tecnica per la co-coltura di neuroni glutammatergici e cellule di glioma pediatrico di alto grado (pHGG) all'interno di un dispositivo microfluidico. Le cellule staminali pluripotenti indotte umane vengono introdotte nel sistema microfluidico e incubate per promuovere la loro differenziazione in neuroni glutammatergici corticali maturi. Successivamente, le cellule pHGG vengono introdotte sui neuroni maturi, stabilendo una co-coltura e consentendo interazioni tra neuroni...

Co-coltura di neuroni glutammatergici e cellule di glioma pediatrico di alto grado

Questo video dimostra la generazione di cellule progenitrici neurali da cellule staminali pluripotenti umane (hPSC) non transgeniche e transgeniche. Le hPSC sono differenziate in cellule progenitrici neurali utilizzando un mezzo di differenziazione neuronale. Mentre la differenziazione è indotta nelle cellule non transgeniche utilizzando piccole molecole, le hPSC transgeniche vengono differenziate aggiungendo un antibiotico che induce il promotore di un fattore di trascrizione specifico per la...

Differenziazione di cellule staminali pluripotenti umane non transgeniche e transgeniche in cellule progenitrici neurali

Questo video dimostra il processo di differenziazione dei corpi embrioidi (EB) in aggregati neuroepiteliali e la loro successiva divisione in cellule neuronali e gliali. Questo metodo consente la generazione efficiente di cellule neuronali e gliali in vitro, che fungono da sistemi di test per i test di tossicità e per la valutazione delle diverse vie coinvolte nella neurotossicità.

Generazione di neuroni e cellule gliali da corpi embrioidi derivati da cellule staminali pluripotenti indotte umane

I protocolli descrivono due sistemi di test in vitro di tossicità dello sviluppo (UKK e UKN1) a base di cellule staminali embrionali umane e studi trascrittoma. I sistemi di test prevedono pericolo tossicità per lo sviluppo umano, e possono contribuire a ridurre studi sugli animali, i costi e il tempo necessario per le prove della sicurezza chimica.

Umano cellule staminali pluripotenti Basato Tossicità per lo sviluppo saggi per Chemical Screening e Safety Systems Biology generazione dati

Viene descritto un protocollo personalizzato per differenziare le cellule ES di topo in popolazioni definite di neuroni altamente puri che esibiscono sinapsi funzionanti e un comportamento di rete emergente. L'analisi elettrofisiologica dimostra la perdita della trasmissione sinaptica in seguito all'esposizione ai sierotipi di neurotossina botulinica /A-/G e alla neurotossina tetanica.

Valutazione funzionale di neurotossine biologiche in Culture in rete di cellule staminali derivate dal Sistema Nervoso Centrale Neuroni

Spine dendritiche di neuroni piramidali sono i siti di maggior sinapsi eccitatorie in mammiferi corteccia cerebrale. Il metodo descrive un'analisi quantitativa 3D di morfologie della colonna vertebrale nei neuroni piramidali glutamatergici corticali umane derivate da cellule staminali pluripotenti indotte.

Quantificazione tridimensionale di spine dendritiche da piramidale neuroni derivate da cellule staminali umane pluripotenti indotte

Questo protocollo descrive una procedura dettagliata per la resuspending e la coltura di neuroni derivati da cellule staminali umane che in precedenza erano differenziati dai progenitori neurali in vitro per più settimane. La procedura facilita i saggi basati sull'imaging di neuriti, sinapsi e marcatori neuronali che esprimono tardivamente in un formato compatibile con la microscopia leggera e lo screening ad alto contenuto.

Replatazione post-differenziazione dei neuroni derivati da cellule staminali pluripotenti umane per lo screening ad alto contenuto di neuritogenesi e maturazione delle sinapsi

Il trasporto mitocondriale alterato e la morfologia sono coinvolti in varie malattie neurodegenerative. Il protocollo presentato utilizza neuroni del prosencefalo derivati da cellule staminali pluripotenti indotte per valutare il trasporto mitocondriale e la morfologia nella paraplegia spastica ereditaria. Questo protocollo consente la caratterizzazione del traffico mitocondriale lungo gli assoni e l'analisi della loro morfologia, che faciliterà lo studio delle malattie neurodegenerative.

Analisi del trasporto mitocondriale e della morfologia nei neuroni derivati dalle cellule staminali indotte dall'uomo in paraplegia ereditaria

Descriviamo un metodo per differenziare astrociti e neuroni di derivazione pluripotente indotta dal midollo spinale e la loro co-coltura per la registrazione elettrofisiologica.

Creazione di una piattaforma elettrofisiologica per la modellazione della SLA con astrociti e neuroni derivati da cellule staminali pluripotenti umane specifiche a livello regionale

Questo studio riporta un nuovo approccio per misurare più parametri funzionali mitocondriali basati sulla citometria a flusso e sulla doppia colorazione con due reporter fluorescenti o anticorpi per rilevare cambiamenti nel volume mitocondriale, potenziale di membrana mitocondriale, livello di specie reattive dell'ossigeno, composizione della catena respiratoria mitocondriale e DNA mitocondriale.

Analisi citometrica a flusso di parametri mitocondriali multipli in cellule staminali pluripotenti indotte umane e loro derivati neurali e gliali

Scopri il protocollo per differenziare le cellule staminali pluripotenti indotte umane in culture miste di neuroni e glia. Questo metodo consente di valutare la neurotossicità e testare farmaci in un modello umano alternativo alle linee tumorali.

Protocollo per la differenziazione delle cellule staminali pluripotenti indotte dalluomo in culture miste di neuroni e glia per la sperimentazione della neurotossicità (Video) | JoVE Journal

Protocollo per la differenziazione delle cellule staminali pluripotenti indotte dall'uomo in culture miste di neuroni e glia per la sperimentazione della neurotossicità

Esplora altri video