Generazione di un modello murino di lesione cerebrale traumatica utilizzando un dispositivo di impatto

Prendi un topo anestetizzato con il cranio esposto.

Identificare le suture sagittali e coronali, che sono articolazioni del cranio, per individuare il sito bersaglio della lesione.

Perforare il cranio e rimuovere il lembo osseo per esporre la dura madre, lo strato protettivo sopra la corteccia cerebrale.

Fissare il mouse in un telaio stereotassico con un dispositivo di percussione collegato.

Posizionare la punta dell'impattatore sull'area esposta per infliggere una lesione cerebrale traumatica.

Abbassare la punta per entrare in contatto con la dura madre, ritrarla per impostare una profondità di impatto e applicare la lesione.

Estrarre l'impattatore e rimuovere il mouse dal telaio.

Controllare l'emorragia dal sito della lesione, quindi chiudere il cuoio capelluto utilizzando l'adesivo chirurgico.

Somministrare un analgesico per via sottocutanea per alleviare il dolore e consentire al topo di riprendersi.

La lesione provoca un danno progressivo alla corteccia e alle regioni sottostanti dell'ippocampo e del talamo, insieme all'accumulo di liquidi, compromettendo le funzioni cognitive e la coordinazione motoria.

Per indurre una lesione cerebrale traumatica corticale controllata, in primo luogo, utilizzare un bisturi per praticare un'incisione di 1 centimetro lungo la linea mediana del cuoio capelluto per esporre il cranio. Ritrarre il cuoio capelluto dal sito operatorio e identificare le suture sagittali e coronali sul cranio esposto.

Per eseguire una craniectomia, dotare un micro trapano di una punta da trapano a trephine da 5 millimetri, per attivare il trapano alla massima velocità e applicare la punta perpendicolare al cranio, 2 millimetri a sinistra della sutura sagittale e 2 millimetri rostrale alla sutura coronale con una pressione delicata e uniforme. Si avvertirà un leggero cedimento quando il trapano penetra nel cranio.

Utilizzare una pinza e un ago ipodermico di piccolo calibro per rimuovere il lembo osseo, esponendo completamente la dura madre sottostante, e ruotare la punta dell'impattatore nel campo operatorio. Fissare le ossa temporali bilaterali tra le barre auricolari in miniatura della montatura stereotassica e bloccare gli incisivi all'interno del morsetto incisivo per creare una presa stabile a tre punti sulla testa del topo. Abbassare la punta fino a quando non entra in contatto con la dura madre esposta. Il sensore di contatto dello strumento emetterà un segnale acustico per avvisare che è stato effettuato un contatto.

Ritrarre la punta d'urto dal punto zero e abbassare la posizione del dispositivo di impattaggio sul telaio stereotassico per impostare la profondità d'impatto desiderata. Quindi attivare l'impattatore sul dispositivo di azionamento prima di ruotare il dispositivo fuori dal campo per consentire la rimozione dell'animale dal telaio.

Immediatamente dopo l'infortunio, applicare una pressione diretta da un applicatore sterile con punta di cotone sul cranio e sulla superficie corticale lesa per controllare eventuali emorragie e utilizzare un applicatore nuovo per asciugare il cranio. Chiudere il cuoio capelluto sopra la craniectomia secondo le tecniche standard e somministrare l'analgesia postoperatoria. Quindi, posizionare l'animale nella posizione di recupero da decubito laterale in una gabbia pulita e preriscaldata con monitoraggio fino alla completa decubito e misurare il peso corporeo ogni tre giorni durante il corso dell'esperimento.