Generazione di un modello murino di lesione cerebrale traumatica utilizzando una sonda impattante

Inizia con un topo immobilizzato, anestetizzato e con la testa rasata.

Applicare un unguento per gli occhi e disinfettare il cuoio capelluto con iodio.

Rimuovere lo iodio in eccesso e coprire il topo con un telo chirurgico.

Fai un'incisione sulla linea mediana per esporre il cranio e pulire la ferita.

Segna un cerchio su un lato del cranio, mirando alla corteccia cerebrale.

La corteccia contiene neuroni motori e sensoriali cruciali per la trasmissione del segnale tra il cervello e il corpo.

Forare l'osso del cranio sopra la marcatura in modo circolare, quindi rimuovere il lembo osseo per esporre la corteccia.

Posizionare una sonda di impatto sterilizzata sull'area esposta. Colpire la sonda sul tessuto per erogare un'alta pressione.

Questa pressione induce traumi nella corteccia cerebrale, interrompendo i neuroni motori e sensoriali e compromettendo la trasmissione del segnale.

Pulisci la ferita e suturala. Il modello murino con lesione cerebrale traumatica è pronto per ulteriori esperimenti.

Per eseguire una craniectomia unilaterale, confermare la mancanza di risposta al pizzicamento del dito del piede nel topo anestetizzato e fissare il topo in un telaio stereotassico. Applicare un unguento oftalmico antibiotico sugli occhi con un batuffolo di cotone sterile e una soluzione a base di iodio sulla zona del cuoio capelluto rasato. Rimuovere lo iodio con etanolo al 70% e coprire l'animale con un telo chirurgico fenestrato.

Praticare un'incisione della linea mediana da 1,5 a 2 centimetri sul cuoio capelluto e utilizzare tamponi di cotone sterili per pulire la ferita e liberare la fascia sinistra della linea mediana in corrispondenza della bregma. Utilizzare una sonda impattatrice per identificare il sito della craniectomia e impostare il punto di riferimento stereotassico x uguale a 0, y uguale a 0 su bregma. Regolare la sonda lateralmente a due millimetri a sinistra della linea mediana. Utilizzare un pennarello a punta fine sicuro chirurgicamente per tracciare un cerchio di cinque millimetri di diametro attorno all'area di impatto presunto.

Sollevare e ruotare l'impattatore fuori posizione e completare il cerchio di 5 millimetri. Riposizionare brevemente l'impattatore per verificare la precisione del cerchio di 5 millimetri. Quindi, sollevare e ruotare l'impattatore fuori posizione e utilizzare uno strumento manuale per kit micromotore rotante ad alta velocità dotato di una punta rotonda di 0,6 o 0,8 millimetri di punta per uccelli per praticare un foro aperto nel cranio al 70% all'80% della velocità massima. Applicare una leggera pressione sul cranio durante la perforazione lungo il contorno circonferenziale di 5 millimetri per assottigliare questo bordo e utilizzare una pinza per sollevare il lembo osseo risultante.

La perforazione attraverso le linee di sutura può presentare ulteriori difficoltà poiché l'osso viene interrotto e richiede una pressione aggiuntiva. I vasi sanguigni possono essere in stretta associazione e quindi sono probabili eventi emorragici.

Per indurre una lieve lesione da impatto corticale controllato, pulire la sonda dell'impattatore con un tampone sterile per la preparazione dell'alcol e riportare la sonda dell'impattatore in posizione sopra la corteccia esposta. Abbassare la sonda fino a toccare la superficie della dura madre e contrassegnare questa posizione come z uguale a 0. Ritirare il pistone e spostarsi su z equivale a meno 1 millimetro e scaricare il pistone per colpire la corteccia. Sollevare immediatamente il pistone e spostare il braccio fuori posizione, irrigare la corteccia con un generoso volume di soluzione fisiologica, e utilizzare semplici punti interrotti e sutura di seta 5-0 per chiudere l'incisione del cuoio capelluto.