Name: Test clinici e la rimozione del midollo spinale in un modello murino di sclerosi laterale amiotrofica (SLA) (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-03-17T14:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 35 s
Description: Impara i test clinici e la rimozione del midollo spinale in un modello murino di sclerosi laterale amiotrofica. Questo metodo include valutazioni motorie e preparazione istologica per studiare la patologia neurodegenerativa.

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LT ha ricevuto sovvenzioni da parte del Forschungsförderungsprogramm della Medicina dell&#39;Università di Göttingen. PL e MB sono stati sostenuti dal Centro di Ricerca per la DFG Fisiologia molecolare del cervello (CMPB), Göttingen. Gli autori ringraziano il Dott. Lars Tatenhorst per l&#39;assistenza e la videografia con Birgit Liebau aiuto con audio e video editing.

Gli animali sono stati acquistati da Jackson Laboratory (# 002.726) 1. Essi sono clinicamente segnato e sottoposto ad un test di funzionamento del motore (rotarod test) e della forza muscolare (appesa prova del filo). Tutti questi test e il successivo abbattimento degli animali al fine di preparare il midollo spinale sono stati eseguiti in accordo molto vicino alle linee guida locali per corretto svolgimento degli esperimenti sugli animali. 1. Punteggio clinico Oltre alla verifica del peso corporeo per i topi vengono esaminati i segni di deficit motorio con il seguente sistema di quattro punti di punteggio 2: 4 punti: normale (nessun segno di disfunzione motoria) 3 punti: tremori agli arti posteriori sono evidenti quando sospesa per la coda 2 punti: sono presenti anomalie dell&#39;andatura 1 punto: trascinamento di almeno un arto posteriore 0 punti: simmetricaparalisi, incapacità di destra stessa o perdita del 20% del peso corporeo massimo, in questo caso gli animali vengono sacrificati ed immediatamente l&#39;esperimento viene interrotto 2. Test della funzione motoria e della forza muscolare Appeso filo Questo test viene utilizzato per valutare la forza muscolare 3, 4. Tutti gli animali eseguire questo test almeno uno o due giorni dopo la prova rotarod. Ogni mouse è posizionato su una misura coperchio filo con intervalli di 0,8 cm e con cautela capovolto, 60 cm al di sopra un filo di paglia coperto fondo. Dopo l&#39;allenamento per tre volte consecutive di almeno 180 s la latenza a cadere è misurata. Ogni mouse è dato fino a tre tentativi di trattenere il coperchio capovolto per un massimo di 180 s e il più lungo periodo è registrata. Rotarod test <p class = &quot;jove_content&quot;&gt; L&#39;apparato rotarod (Ugo Basile, Comerio, Italia) è stato usato per misurare la coordinazione motoria, l&#39;equilibrio e la capacità di apprendimento motorio 3, 4. Una buona prestazione richiede un alto grado di coordinazione sensomotoria. La macchina deve essere collocato in un ambiente tranquillo e non disturba al fine di evitare stimoli di distrazione per la testati su animali. È costituita da un computer controllato motorizzata di rotazione del mandrino e cinque corsie per cinque topi. Cadute dei topi vengono rilevati automaticamente dalla pressione su una piastra di plastica sul fondo. Dopo l&#39;addestramento per tre volte consecutive di almeno 180 s ad una velocità costante di 15 rpm del tempo per il quale un animale può rimanere sulla canna rotante viene misurata. Ogni animale sottoposto a tre prove e la più lunga latenza senza cadere viene registrato. Il tempo di 180 s è scelto come cut-off time perché la maggior parte delle differenze significative nella coordinazione motoria vengono rilevati in questo lasso di tempo. 3. Preparazione Spinal Cord <ol class="lalpha"><li> Gli animali vengono uccisi da CO 2 insufflazione in conformità con le linee guida locali e sono immediatamente perfusi transcardiaca con soluzione PBS seguita da una soluzione di paraformaldeide al 4%. </li><li> Per preparare il midollo spinale del mouse sacrificato, l&#39;animale viene posto su un tavolo operatorio e le quattro arti sono fissati sul lato in modo da esporre il lato posteriore del mouse. </li><li> A breve lavaggio con una soluzione di etanolo al 70% pulisce il sito della dissezione e appiattisce il mantello. </li><li> Poi della cute con un bisturi affilato nella linea mediana. Al fine di facilitare il taglio della pelle viene tesa su entrambi i lati. Se i muscoli delle gambe deve essere pronto, la loro pelle deve inoltre essere inciso. </li><li> Dopo l&#39;incisione cutanea è completata, viene tirato da parte con una pinzetta per esporre la fascia sottostante superficiale del corpo. </li><li> La muscolatura del collo e il legamento nucale devono essere rimossi e sono carefully preparato. Fare attenzione a non incidere profondamente e di lesione del midollo spinale. I muscoli delle spalle possono anche essere rimosse per esporre meglio la colonna vertebrale. </li><li> Poi i muscoli paravertebrali vengono rimossi dalla intera colonna vertebrale. </li><li> Per aprire i laminectomie colonna vertebrale diversi devono essere eseguiti. Si dovrebbe iniziare dalla parte superiore craniale nel sito del atlanto-occipitale. </li><li> E &#39;più facile togliere la fissazione dei due arti superiori e tirare troppo il collo per essere meglio in grado di eseguire la laminectomia delle vertebre prima. Questi sono tirato via senza toccare il esposta midollo spinale cervicale. </li><li> Più vertebre vengono rimossi prima sezionare i archi vertebrali su entrambi i lati con forbici angolate e quindi tirando i processi dorsali. Rimanenti parti laterali delle vertebre dovrebbe essere rimosso per facilitare la successiva rimozione completa del midollo spinale. </li><li> Un punto di riferimento anatomico della spina lombarel è il cavo di intumescenza che è presente anche nel midollo spinale cervicale. </li><li> Dopo aver finito la laminectomia del midollo spinale intera, fare in modo che anche voi transetto tutte le radici ventrali e rilasciare il midollo spinale dalla dura madre delle meningi. </li><li> Poi il midollo spinale cervicale è tagliato cranialmente e si inizia a rimuovere il midollo spinale. </li><li> Infine, il midollo spinale è anche tagliato alla distale cauda equina, per essere completamente rilasciato. </li><li> In definitiva, il midollo spinale viene posto in una soluzione postfixating (ad esempio paraformaldeide 4%) per una notte e può essere ulteriormente lavorato. Di solito cryosection il midollo spinale per prepararlo per l&#39;analisi immunoistologico. </li></ol> 4. Risultati rappresentativi La tecnica di preparazione del midollo spinale rappresenta il focus di questo articolo video. Si tratta di un prerequisito essenziale per il sezionamento dei tessuti in seguito e, infine, per l&#39;analisi immunoistologico di spinal cavo sezioni. Come esempio di un risultato finale, uno workup immunoistochimica della regione corno anteriore del midollo spinale lombare topo di tipo selvatico (wt) e di un transgene SOD G93A (tg) topo è dimostrata. Neuroni motore può essere identificato con un primario anticorpo anti-ChAT e successiva marcatura fluorescente con un anticorpo secondario Cy3. Inoltre, una contro-colorazione nucleare con DAPI (4,6-Diamidino-2-fenilindolo) è stato eseguito (Figura 1). <img src="/files/ftp_upload/3936/3936fig1.jpg" alt="Figura 1" /> Figura 1. Microfotografie fluorescenti visualizzando il immunorivelazione dei motoneuroni con anticorpi anti-ChAT (rosso) e nuclei cellulari anti-macchia DAPI (blu) a livello lombare corno midollo spinale anteriore del mouse di un tipo selvatico (WT) (a sinistra) e di uno SOD G93A transgenico (tg) (a destra) del mouse all&#39;età di 130 giorni. Scale bar: 40 micron. Poiché l&#39;analisi immunoistochimica dii topi SOD G93A non è lo scopo primario di questo articolo si prega di consultare la pubblicazione originale in cui questi topi transgenici sono stati caratterizzati e quelli più recenti che studiano approcci terapeutici per la consultazione 1, 5, 6. Se gli effetti terapeutici è modulata al livello immunoistologico chiaramente definito algoritmi di valutazione quantitativa deve essere applicato supportato da un software stereological (si veda per esempio 7).

<ol><li>Gurney, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Motor+neuron+degeneration+in+mice+that+express+a+human+Cu%2C+Zn+superoxide+dismutase+mutation%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Motor neuron degeneration in mice that express a human Cu, Zn superoxide dismutase mutation.</a> Science. 264 (5166), 1772-1775 (1994).</li>
<li>Weydt, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+disease+onset+and+progression+in+the+SOD1+mouse+model+of+ALS%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroreport%22%5BJournal%5D)">Assessing disease onset and progression in the SOD1 mouse model of ALS.</a> Neuroreport. 14 (7), 1051-1054 (2003).</li>
<li>Crawley, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+phenotyping+strategies+for+mutant+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Behavioral phenotyping strategies for mutant mice.</a> Neuron. 57 (6), 809-818 (2008).</li>
<li>Miana-Mena, F. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimal+methods+to+characterize+the+G93A+mouse+model+of+ALS%5BTitle%5D)+AND+%22Amyotroph.+Lateral+Scler.+Other+Motor+Neuron+Disord%22%5BJournal%5D)">Optimal methods to characterize the G93A mouse model of ALS.</a> Amyotroph. Lateral Scler. Other Motor Neuron Disord. 6 (1), 55-62 (2005).</li>
<li>Zhong, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activated+protein+C+therapy+slows+ALS-like+disease+in+mice+by+transcriptionally+inhibiting+SOD1+in+motor+neurons+and+microglia+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">Activated protein C therapy slows ALS-like disease in mice by transcriptionally inhibiting SOD1 in motor neurons and microglia cells.</a> J. Clin. Invest. 119 (11), 3437-3449 (2009).</li>
<li>Pitzer, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Granulocyte-colony+stimulating+factor+improves+outcome+in+a+mouse+model+of+amyotrophic+lateral+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Brain%22%5BJournal%5D)">Granulocyte-colony stimulating factor improves outcome in a mouse model of amyotrophic lateral sclerosis.</a> Brain. 131 (Pt. 12), 3335-3347 (2008).</li>
<li>Gowing, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ablation+of+proliferating+microglia+does+not+affect+motor+neuron+degeneration+in+amyotrophic+lateral+sclerosis+caused+by+mutant+superoxide+dismutase%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Ablation of proliferating microglia does not affect motor neuron degeneration in amyotrophic lateral sclerosis caused by mutant superoxide dismutase.</a> J. Neurosci. 28 (41), 10234-10244 (2008).</li>
<li>Scott, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((interpretation+of+studies+in+the+standard+murine+model+of+ALS%5BTitle%5D)+AND+%22Amyotroph+Lateral+Scler%22%5BJournal%5D)">interpretation of studies in the standard murine model of ALS.</a> Amyotroph Lateral Scler. 9 (1), 4-15 (2008).</li>
<li>Turner, B. J., Talbot, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transgenics%2C+toxicity+and+therapeutics+in+rodent+models+of+mutant+SOD1-mediated+familial+ALS%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Transgenics, toxicity and therapeutics in rodent models of mutant SOD1-mediated familial ALS.</a> Prog Neurobiol. 85 (1), 94-134 (2008).</li>
<li>Corse, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preclinical+testing+of+neuroprotective+neurotrophic+factors+in+a+model+of+chronic+motor+neuron+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol+Dis%22%5BJournal%5D)">Preclinical testing of neuroprotective neurotrophic factors in a model of chronic motor neuron degeneration.</a> Neurobiol Dis. 6 (5), 335-346 (1999).</li>
<li>Knippenberg, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Significance+of+behavioural+tests+in+a+transgenic+mouse+model+of+amyotrophic+lateral+sclerosis+%28ALS%29%5BTitle%5D)+AND+%22Behav+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Significance of behavioural tests in a transgenic mouse model of amyotrophic lateral sclerosis (ALS).</a> Behav Brain Res. 213 (1), 82-87 (2010).</li>
<li>Burgess, R. W., Cox, G. A., Seburn, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuromuscular+disease+models+and+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Neuromuscular disease models and analysis.</a> Methods Mol. Biol. 602, 347-393 (2010).</li>
<li>Hayworth, C. R., Gonzalez-Lima, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pre-symptomatic+detection+of+chronic+motor+deficits+and+genotype+prediction+in+congenic+B6.SOD1%28G93A%29+ALS+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Pre-symptomatic detection of chronic motor deficits and genotype prediction in congenic B6.SOD1(G93A) ALS mouse model.</a> Neuroscience. 164 (3), 975-985 (2009).</li>
<li>Ludolph, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Guidelines+for+preclinical+animal+research+in+ALS%2FMND%3A+A+consensus+meeting%5BTitle%5D)+AND+%22Amyotroph+Lateral+Scler%22%5BJournal%5D)">Guidelines for preclinical animal research in ALS/MND: A consensus meeting.</a> Amyotroph Lateral Scler. 11 (1-2), 38-45 (2010).</li>
<li>Boillee, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Onset+and+progression+in+inherited+ALS+determined+by+motor+neurons+and+microglia%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Onset and progression in inherited ALS determined by motor neurons and microglia.</a> Science. 5778 (3), 1389-1392 (2006).</li>
</ol>

Non ci sono conflitti di interesse dichiarati.

Il (G93A) modello murino SOD1 genetico è un modello animale valido per studiare il corso della malattia del motoneurone perdita progressiva paragonabile umana sclerosi amiotrofica laterale 8. Una varietà di paradigmi di trattamenti diversi sono stati valutati in questo modello e rappresentano una base per la successiva prova in studi clinici umani 8-10. Per poter rilevare differenze significative in uno studio sperimentale di trattamento in questi topi, è di importanza eminente includere almeno 24 ...

<table border="1"><tbody><tr><td></td><td> Fabbricante </td><td> Informazioni per l&#39;ordinazione </td></tr><tr><td> Test comportamentale </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Rota-Rod per il Mice </td><td> Ugo Basile, Comerio, Italia </td><td> # 47600 </td></tr><tr><td> Hanging dispositivo a filo </td><td> Su misura </td><td></td></tr><tr><td colspan="3"></td></tr><tr><td> Preparazione Spinal Cord </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Operation Table Spia di funzionamento Guanti di protezione </td><td></td><td></td></tr><tr><td> &quot;Iris&quot; Forbici, angolato a lato </td><td> Strumenti Scienza Belle, Heidelberg, Germania </td><td> 14063-09 </td></tr><tr><td> Cohan-Vännäs Forbici primavera, diritte </td><td> Strumenti Scienza Belle, Heidelberg, Germania </td><td> 15000-10 </td&gt; </tr><tr><td> Micro pinza </td><td> Hammacher, Solingen, Germania </td><td> HWC 111-10 </td></tr><tr><td> Scalpel &quot;präzisa plus&quot; </td><td> Dahlhausen, Köln, Germania </td><td> 11.000.00.510, figura 10 </td></tr></tbody></table>

test clinici e la rimozione del midollo spinale in un modello murino di sclerosi laterale amiotrofica (sla)

Clinical Testing and Spinal Cord Removal in a Mouse Model for Amyotrophic Lateral Sclerosis (ALS)

La sclerosi laterale amiotrofica (SLA) è una malattia neurodegenerativa letale con conseguente progressiva degenerazione dei motoneuroni. Il picco di insorgenza è di circa 60 anni per la malattia sporadica e circa 50 anni per la malattia familiare. Grazie al suo andamento progressivo, il 50% dei pazienti muore entro 30 mesi dall&#39;inizio dei sintomi. Per valutare nuove opzioni di trattamento per questa malattia, modelli murini di SLA genetici sono stati generati sulla base umani mutazioni nel gene familiari SOD, come la (G93A) mutazione SOD1. Aspetti più importanti che devono essere valutati nel modello sono la sopravvivenza globale, decorso clinico e la funzione motoria. Qui, dimostriamo la valutazione clinica, mostrano la conduzione di due test del motore comportamentali e fornire sistemi di punteggio per tutti i parametri quantitativi. Poiché un&#39;analisi approfondita del modello murino ALS di solito richiede un esame immunoistochimica del midollo spinale, abbiamo dimostrato la sua preparazione in dettaglio l&#39;applicazione del farelaminectomia metodo rsal. Esemplari risultati istologici sono dimostrati. La completa applicazione dei metodi di esame descritti negli studi sul modello murino di SLA consentirà al ricercatore di verificare in modo affidabile per future opzioni terapeutiche che possono fornire una base per le sperimentazioni cliniche umane successive.

Un modello murino per la sclerosi laterale amiotrofica (SLA) è una valutazione clinica e comportamentale. Come prerequisito per un&#39;analisi accompagnamento immunoistologico la preparazione del midollo spinale è raffigurato in dettaglio.

Test clinici e la rimozione del midollo spinale in un modello murino di sclerosi laterale amiotrofica (SLA)

La sclerosi laterale amiotrofica (SLA) è un disturbo neurodegenerativo fatale che comporta la degenerazione progressiva dei motoneuroni. Il picco di insorgenza si verifica intorno ai 60...

Ciao, mi chiamo Lar Turner. Sono un ricercatore post-dottorato presso il Dipartimento di Neurologia dell'Università di Ingham, Germania. Ciao, mi chiamo Lin Gunda.Sono uno studente di medicina e sto svolgendo il lavoro della mia tesi in questo laboratorio. Oggi vi mostreremo il test clinico del SODG 93, un modello murino della sclerosi laterale amiotrofica. Inoltre, illustreremo un test della funzione motoria mediante il cosiddetto test del rotarod e, in aggiunta, un altro test della funzione motoria con la presa sul filo sospeso, al fine di eseguire un'analisi immunologica.Dopo il test funzionale dei topi a s, una procedura necessaria consiste nella rimozione del midollo spinale, del nervo STIC e del muscolo gastrocnemio. Vogliamo mostrare in dettaglio questa procedura chirurgica e presentare alla fine alcuni esempi di risultati immunologici. Bene, ma ora iniziamo innanzitutto con i test clinici.Questo è un MOE di tipo selvatico a movimento libero che non mostra alcun sintomo clinico come tremore muscolare o Parsis nel nostro sistema di classificazione clinica. Questo corrisponderebbe al punteggio quattro. Questo è un MOE transgenico di A LS.In una fase precoce della malattia, l'animale presenta un grave tremore dell'arto posteriore destro che lo classifica come punteggio tre E. Le gravi alterazioni della deambulazione classificano questo animale come punteggio due. Il trascinamento di almeno un arto posteriore viene classificato come punteggio clinico uno nel test del filo sospeso, in cui viene valutata la forza muscolare globale. Ogni topo viene posizionato su un filo appositamente realizzato e ruotato con cautela a testa in giù sopra un cestino coperto di paglia.Dopo aver effettuato l'addestramento per tre volte consecutive per almeno 180 secondi, viene misurata la latenza alla caduta. A ciascun topo vengono concessi fino a tre tentativi per aggrapparsi al coperchio capovolto per un massimo di 180 secondi, e viene registrato il periodo più lungo in confronto al topo di tipo filo bianco sul lato destro. Il topo transgenico con placche sul lato sinistro è molto debole e cade dal coperchio prima di raggiungere il massimo.L'apparato del cilindro rotante viene utilizzato per misurare la coordinazione motoria, l'equilibrio e la capacità di apprendimento motorio. Un buon rendimento richiede un elevato grado di coordinazione sensoriomotoria. È costituito da un albero rotante azionato da un motore e controllato da computer, e da cinque corsie per cinque m.I difetti nei topi vengono rilevati automaticamente attraverso la pressione esercitata sulla piastra di plastica inferiore. Dopo un addestramento di almeno 180 secondi ripetuto per tre volte consecutive a una velocità costante di 15 giri al minuto, si misura il tempo per cui un animale riesce a rimanere sul rotarod in rotazione. A ciascun animale vengono somministrati tre tentativi e viene registrata la latenza più lunga senza cadute.Il mos di tipo selvatico sano sulla sinistra corre senza difficoltà sul cilindro rotante. Al contrario, il mos transgenico a s sulla destra ha gravi problemi a rimanere anche solo sul cilindro rotante e dopo un po' scivola via, come osservato da dietro. Si notano le gravi difficoltà di corsa del topo retre sinistro.Rispetto al topo sano del test del filo, non è in grado di mantenere il ritmo della velocità della barra rotante e non può spingersi verso l'alto con gli arti HIN. Per eseguire un'analisi immunochemica del midollo spinale, gli animali devono essere sacrificati. È molto importante seguire sempre rigorosamente le linee guida locali per la corretta conduzione degli esperimenti sugli animali.In questo contesto, in questa panoramica molto semplificata della colonna vertebrale e dei tessuti circostanti, sono rappresentate le principali strutture anatomiche. Posizioneremo l'animale sul lato ventrale e inizieremo a preparare i muscoli dalla borsa dorsale. Dopo aver rimosso il tessuto muscolare, accederemo alla colonna vertebrale che racchiude il midollo spinale.Dopo che l'animale è stato sacrificato e perfuso con una soluzione contenente paraformaldeide, può essere rimossa la colonna vertebrale. L'animale viene posizionato su un tavolo operatorio e gli arti vengono fissati lateralmente al fine di esporre la parte dorsale del topo. L'animale viene inumidito per appiattire il manto peloso e facilitare l'incisione cutanea successiva.Per questo, si utilizza un bisturi affilato. Prestare attenzione a stirare la pelle verso entrambi i lati. Per facilitare il taglio, il muscolo della gamba deve essere preparato.Anche la loro pelle deve essere incisa. Una volta completata l'incisione cutanea, viene delicatamente tirata da un lato. Con una pinzetta, dopo aver rimosso i muscoli della gamba e il nervo sciatico, si prosegue verso il midollo spinale e si posiziona l'animale su un nuovo tavolo operatorio.Ora è facile identificare il collo del cranio, i muscoli e la colonna vertebrale. Dopo aver identificato tutte queste strutture, è semplice procedere al passaggio successivo. I muscoli del collo e il legamento nu devono essere rimossi.Attenzione a non incidere troppo in profondità e a non danneggiare la colonna vertebrale. Nel passaggio successivo, i muscoli paravertebrali vengono rimossi completamente per esporre la colonna vertebrale. Per accedere alla colonna spinale, è necessario eseguire diverse osteotomie.Partiamo dalla parte cervicale della colonna vertebrale, inclusa l'articolazione occipitoatlantoidea. Per eseguire la laminectomia, dobbiamo tagliare l'arco vertebrale per poter rimuovere tutti i processi vertebrali dal corpo vertebrale. Come spiegato in precedenza, la laminectomia inizia con il taglio degli archi vertebrali.Quindi la dura madre può essere rimossa. Ancora una volta, prestare attenzione a non lesione il midollo spinale, poiché devono essere rimossi molti altri archi. È molto utile utilizzare forbici angolate e incidere diversi archi vertebrali di entrambi i lati contemporaneamente.Quindi tirare sui processi dorsali per rimuovere completamente le lamine vertebrali e l'ingrandimento. Si osserva che la coppia di forbici deve essere inserita con attenzione nella posizione più laterale lungo il lato del canale spinale. Le parti laterali residue della colonna vertebrale devono essere rimosse per facilitare la successiva rimozione completa del midollo spinale.Un punto di riferimento anatomico del midollo spinale sono le cosiddette intumescenze cervicale e lombare. Dopo aver completato le ectomie dell'intero midollo spinale, assicurarsi di aver sezionato anche tutte le radici ventrali del midollo spinale e di averlo rilasciato dalla dura madre delle meningi. Successivamente, si taglia il midollo spinale cervicale.Verso cranio e si inizia nuovamente l'asportazione. Toccare il midollo spinale con estrema cautela per non danneggiare questo tessuto, poiché ciò potrebbe causare gravi limitazioni per successive analisi immunoistochimiche. L'asportazione del midollo spinale prosegue quindi a livello toracico e si estende alla parte lombare.Infine viene nuovamente reciso, questa volta lateralmente rispetto al cauda equina. Ora siamo in grado di rilasciarlo completamente. Qui si osserva il midollo spinale posizionato esattamente accanto alla sua sede originale nella colonna vertebrale.Infine, viene posto in una soluzione fissativa a base di paraformaldeide. Come esempio classico di analisi immunohistochimica del midollo spinale, è possibile utilizzare un anticorpo specifico per la colina acetiltransferasi al fine di identificare i neuroni motori nel corno anteriore del midollo spinale. Qui si osserva un elevato numero di neuroni motori in un animale di tipo selvatico sano.Invece, l'animale transgenico con SLA allo stadio terminale mostra effettivamente un numero molto ridotto di neuroni motori nel corno anteriore. Dopo aver visionato questo articolo video, si dovrebbe aver appreso le basi dell'esame clinico del modello murino SODG93.A di sclerosi laterale amiotrofica.Sono stati dimostrati due test comportamentali motori: il test del rotarod e il test del filo sospeso. Essi offrono una buona possibilità di valutare la funzione motoria di base. Sono facili da eseguire, sensibili nel rilevare deficit motori e efficienti in termini di tempo.La parte principale di questo video consiste nella dimostrazione della tecnica di preparazione del midollo spinale. Questa procedura può ovviamente essere applicata a qualsiasi altro modello murino di malattia ed è un passaggio essenziale per l'analisi immunochemica successiva della patologia della malattia nel midollo spinale. Grazie per aver guardato.Speriamo che questo articolo video sarà utile per i tuoi futuri esperimenti.

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Qui viene presentato un nuovo dispositivo automatizzato per la contusione da lesione del midollo spinale per topi, in grado di produrre con precisione modelli di contusione da lesione del midollo spinale con vari gradi.

Impattatore automatizzato per il modello di lesione del midollo spinale contusivo nei topi

Il presente protocollo descrive lo sviluppo di un modello murino riproducibile di glioma del midollo spinale mediante l'iniezione di cellule tumorali nello spazio intervertebrale, offrendo un approccio più efficace e meno invasivo per la ricerca e lo sviluppo terapeutico.

Trapianto chirurgico di cellule tumorali nel midollo spinale di topi

Le ataxi spinocerebellari della poliglutamina sono causate dalle espansioni CAG che producono proteine inclini all'aggregazione. Questo protocollo descrive la produzione di vettori, la consegna stereotassica e l'analisi delle inclusioni e della perdita di marcatori neuronali, fornendo una piattaforma controllata per indagare i meccanismi e valutare terapie mirate per malattie neurodegenerative.

Patologia striatale indotta da lentivirali come modello preclinico delle atassie spinocerebelari poliglutamicraniche

Questo articolo descrive i metodi di somministrazione intratecale per terapie mirate al SNC nei topi adulti, concentrandosi sulla precisione del protocollo e sulla possibilità di iniezioni ripetute. Include i risultati di uno studio di validazione in cui gli oligonucleotidi antisens hanno ridotto l'espressione mutante di SOD1 nei topi modello SOD1-ALS, supportando l'utilità di questo approccio nella ricerca preclinica sulle malattie neurodegenerative.

Iniezione intratecale lombare di SOD1-ASO per il targeting preciso del sistema nervoso centrale e l'efficacia predittiva nei topi umani SOD1-G93A ALS

Impara i test clinici e la rimozione del midollo spinale in un modello murino di sclerosi laterale amiotrofica. Questo metodo include valutazioni motorie e preparazione istologica per studiare la patologia neurodegenerativa.

Test clinici e la rimozione del midollo spinale in un modello murino di sclerosi laterale amiotrofica (SLA)

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