Test clinici e la rimozione del midollo spinale in un modello murino di sclerosi laterale amiotrofica (SLA)

Un modello murino per la sclerosi laterale amiotrofica (SLA) è una valutazione clinica e comportamentale. Come prerequisito per un'analisi accompagnamento immunoistologico la preparazione del midollo spinale è raffigurato in dettaglio.

Ciao, mi chiamo Lar Turner. Sono un postdoc presso il Dipartimento di Neurologia dell'Università di Ingham, in Germania. Ciao, mi chiamo Lin Gunda.

Sono uno studente di medicina e sto facendo il mio lavoro di tesi in questo laboratorio. Oggi vi mostreremo i test clinici del SODG 93, un modello di muschio della sclerosi laterale atrofica. Inoltre, dimostreremo il test di funzionalità del motore con un cosiddetto test del rotore e, inoltre, un altro test di funzionalità del motore con l'impugnatura a filo sospeso per eseguire un'analisi immunologica.

Dopo il test funzionale dei topi, una procedura necessaria consiste nella rimozione del midollo spinale, del nervo STIC e del muscolo gastroco. Vogliamo mostrare queste procedure chirurgiche in dettaglio e presentare alcuni risultati di logica immunologica esemplare alla fine. Ok, ma ora iniziamo prima con i test clinici.

Questo è un MOE di tipo selvaggio in movimento libero che non mostra alcun sintomo clinico come tremore muscolare o parsi nel nostro sistema di classificazione clinica. Sarebbe il punteggio quattro. Questo è un moe transgenico A LS.

In uno stadio precoce della malattia, mostra un forte tremore dell'arto destro che lo classifica come PUNTEGGIO tre E.Le gravi anomalie dell'andatura Classificano questo animale come punteggio due. Il trascinamento di almeno un arto posteriore è classificato come punteggio clinico uno nel test del filo sospeso, viene valutata la forza delle costole muscolari grezze. Ogni mouse è posizionato su un filo CustomMade e capovolto con cautela sopra il pulsante ricoperto di paglia.

Dopo l'allenamento per tre volte consecutive di almeno 180 secondi, viene misurata la latenza alle cadute. Ad ogni mouse vengono dati fino a tre tentativi per tenere premuto il coperchio capovolto per un massimo di 180 secondi e il periodo più lungo viene registrato rispetto al mouse a filo bianco sul lato destro. La placca del topo transgenico a sinistra è molto debole e cade dalla palpebra prima di raggiungere il massimo.

L'apparato Rotor rod viene utilizzato per misurare la coordinazione motoria, l'equilibrio e la capacità di apprendimento motorio. Una buona prestazione richiede un alto grado di coordinazione senso-motoria. È costituito da un mandrino rotante motorizzato controllato da computer e da cinque corsie per cinque m.

I guasti dei mouse vengono rilevati automaticamente dalla pressione sulla piastra di plastica inferiore. Dopo l'allenamento per tre volte consecutive di almeno 180 secondi a una velocità costante di 15 giri al minuto, viene misurato il tempo per il quale un animale può rimanere sul marciume rotante. Ogni animale viene sottoposto a tre prove e viene registrata la latenza più lunga senza cadere.

Il sano mos wild type sul lato sinistro sta correndo senza difficoltà sull'asta del rotore. Al contrario, il transgenico a s mo sul lato destro ha seri problemi anche a rimanere sull'asta del rotore e scivola via dopo un po' osservato da dietro. Si vedono le gravi difficoltà di corsa del mouse sinistro retre.

Rispetto al mouse a filo sano, non è in grado di tenere il passo con la velocità dell'asta del rotore e non può spingere verso l'alto con gli arti HIN. Per eseguire un'analisi immunochimica del midollo spinale, gli animali devono essere sacrificati. È molto importante seguire sempre rigorosamente le linee guida locali per una corretta conduzione degli esperimenti sugli animali.

In questo contesto, in questa panoramica molto semplificata della colonna vertebrale e dei suoi tessuti circostanti, vengono illustrate le principali strutture anatomiche. Posizioneremo l'animale sul lato ventrale e inizieremo a preparare i muscoli dalla sacca dorsale. Dopo che il tessuto muscolare è stato rimosso, accederemo alla colonna vertebrale che racchiude il midollo spinale.

Dopo che l'animale è stato sacrificato e perfuso con una soluzione contenente l'altezza di una paraforma, il midollo spinale può essere rimosso. L'animale viene posizionato su un tavolo operatorio e gli arti completi vengono fissati ai lati e in modo da esporre la parte posteriore del topo. L'animale viene bagnato per appiattire il pelo e facilitare la successiva incisione cutanea.

Per questo, viene utilizzato un bisturi affilato. Fare attenzione a distendere la pelle su entrambi i lati. Per facilitare il taglio deve essere preparato il muscolo della gamba.

Anche la loro pelle deve essere incisa. Dopo che l'incisione cutanea è stata completata, viene delicatamente tirata da parte. Con un paio di pinzette che hanno rimosso i muscoli delle gambe e il nervo sciatico, continuiamo ad avvicinarci al midollo spinale e posizioniamo l'animale su un nuovo tavolo operatorio.

Ora è facile identificare il cranio, il collo, i muscoli e la colonna vertebrale. Dopo aver identificato tutte queste strutture, è facile procedere al passaggio successivo. I muscoli del collo e il legamento nu devono essere rimossi.

Fare attenzione a non incidere troppo in profondità e guidare la colonna vertebrale. Nella fase successiva, i muscoli paravertebrali vengono rimossi completamente per esporre la colonna vertebrale. Per accedere alla colonna vertebrale, è necessario eseguire diverse ectomie.

Partiamo dalla parte cervicale della colonna vertebrale, compresa l'articolazione occipitale atlantica. Per eseguire la laminectomia, dobbiamo tagliare l'arco vertebrale per poter rimuovere tutti i processi vertebrali dal corpo vertebrale. Come spiegato prima, la laminectomia inizia con il taglio degli archi vertebrali.

Quindi la laina può essere tirata via. Ancora una volta, fare attenzione a non lesionare il midollo spinale poiché molti altri ral devono essere rimossi. È molto utile usare le forbici angolate e incidere diversi archi vertebrali di entrambi i lati alla volta.

Quindi tirare i processi dorsali per rimuovere completamente la lamina vertebrale e il primo piano. Si vede che il paio di forbici deve essere inserito con cura più lateralmente sul lato del canale spinale. Le parti laterali rimanenti della colonna vertebrale devono essere rimosse per facilitare la successiva rimozione completa del midollo spinale.

Un punto di riferimento anatomico del midollo spinale sono i cosiddetti esencia cervicale e lombare. Dopo aver terminato le ectomie dell'intero midollo spinale, assicurati di sezionare anche tutte le radici ventrali del midollo spinale e di liberarlo dalla materia dura delle meningi. Successivamente, il midollo spinale cervicale viene tagliato.

Cranialmente e la sua rimozione viene ricominciata. Toccare il midollo spinale con molta cautela per non danneggiare questo tessuto, perché ciò potrebbe causare gravi limitazioni per le successive analisi immunoimmunochimiche. La rimozione del midollo spinale viene ulteriormente continuata a livello toracico e proseguita fino alla parte lombare.

Alla fine è tagliato di nuovo questa volta a lato del cordone equino. Ora siamo in grado di rilasciarlo completamente. Qui si vede il midollo spinale posizionato proprio accanto alla sua posizione originale nella colonna RAL.

Infine, viene inserito in una soluzione post-fissante Paraform Hyde. Come esempio classico per l'analisi immunoistochimica del midollo spinale, è possibile applicare un anticorpo che riconosce la colina e l'acetil transferasi per identificare i motoneuroni nel corno anteriore del midollo spinale. Qui si vede un gran numero di motoneuroni in un animale sano di tipo selvatico.

Al contrario, l'animale transgenico LS allo stadio terminale mostra un numero molto più piccolo di motoneuroni nel corno anteriore. Guardando questo articolo video, dovresti aver appreso l'esame clinico di base del SODG 93. Un modello murino di sclerosi laterale atrofica.

Sono stati dimostrati due test comportamentali del motore: il test del rotore e il test del filo sospeso. Forniscono una buona possibilità di valutare la funzione motoria di base. Sono facili da eseguire, sensibili nel rilevamento del deficit motorio ed efficienti in termini di tempo.

La parte principale di questo video consiste in una dimostrazione della tecnica di preparazione del midollo spinale. Questo può naturalmente essere applicato a qualsiasi altro modello murino di malattia ed è un passo essenziale per la successiva analisi immunochimica della patologia della malattia nel midollo spinale. Grazie per aver guardato.

Ci auguriamo che questo articolo video sia utile per i tuoi esperimenti futuri.