Analisi quantitativa di autofagia usando 3D avanzato microscopia a fluorescenza

L'obiettivo generale di questa procedura è ottenere immagini quantitative delle cellule tumorali della prostata trattate per misurare il grado e l'estensione dell'autofagia in diversi punti temporali. Ciò si ottiene trattando prima le cellule con arginina, dase o altri reagenti sperimentali per indurre l'autofagia e/o la morte cellulare. Il secondo passo consiste nel decidere se visualizzare le cellule vive o le cellule fissate e preparare i campioni di conseguenza.

Successivamente, è possibile ottenere immagini a fluorescenza 3D di cellule vive o fisse utilizzando la microscopia a fluorescenza a campo largo, a deconvoluzione o a illuminazione strutturata. Il passo finale consiste nel raccogliere dati statistici sulla distribuzione delle dimensioni degli autofagosomi e sulla colocalizzazione con altre strutture intracellulari. Utilizzando un software di analisi digitale delle immagini 3D, questo approccio può ottenere risultati che mostrano non solo che l'induzione automatica dei fagi da parte dell'arginina dasi può causare la morte delle cellule tumorali della prostata, ma anche che queste cellule mostrano cambiamenti strutturali che sono morfologicamente distinti dai cambiamenti associati all'apoptosi e alla necrosi.