Name: Rilevazione simultanea di c-Fos attivazione da mesolimbico e mesocorticali Siti Reward dopamina seguito Ingenuo zuccheri e grassi ingestione in Rats (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-08-24T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 7 s
Description: Scopri la rilevazione simultanea di c-Fos nei circuiti dopaminergici mesolimbici e mesocorticali dopo ingestione di zuccheri e grassi nei ratti. Questo metodo immunohistologico rivela i meccanismi neurobiologici della ricompensa.

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Grazie a Diana Icaza-Culaki, Cristal Sampson e Theologia Karagiorgis per il loro duro lavoro su questo progetto.

Questi protocolli sperimentali sono stati approvati dal Comitato di Cura e uso istituzionale animali attestante che tutti i soggetti e le procedure sono in conformità con il National Institutes of Health Guide per cura e l&#39;uso di animali da laboratorio. 1. Soggetti <ol><li> Acquisto e / o razza maschile ratti Sprague-Dawley (260-300 g). </li><li> ratti Casa singolarmente in gabbie di rete metallica. A mantenere su un / buio ciclo 12:12 ore di luce con ratto chow e acqua ad libitum. </li><li> Assegnare le dimensioni del campione appropriate (ad esempio, n ≈ 6-8) in modo casuale in gruppi. </li></ol> 2. Le apparecchiature e procedure di test di aspirazione <ol><li> Utilizzare provette da centrifuga calibrate con tappi di gomma e un tubo metallico sipper angolo di 45 ° per fornire una misurazione precisa (± 0,1 ml) delle soluzioni presentate. fissarli alle gabbie a casa da una molla metallica tesa a consentire la visibilità delle calibrazioni. </li><li> Limitare razioni di cibo (~15 / g / giorno) dei ratti per ridurre il peso al 85% del loro peso corporeo originale per aumentare la motivazione per consumare le soluzioni. Nota: La riduzione di peso dovrebbe prendere tra 3-5 giorni. </li><li> Fornire soluzioni di pre-formazione (10 ml) di 0,2% saccarina per quattro giorni su una sessione di 1 ora per massimizzare la probabilità che i ratti potranno gustare le successive soluzioni di prova con una latenza breve (meno di 1 minuto). </li><li> Confermare il flusso attraverso il tubo di centrifuga per versare qualche goccia. </li><li> Pesare i tubi prima e dopo ogni sessione per ottenere la misura di aspirazione. </li><li> Eseguire un test di aspirazione al quinto giorno sottogruppi trattati con uno dei sei soluzioni (10 ml, 1 hr): a) acqua, b) novel aromatizzato (0,05% sapore di ciliegia) 0,2% saccarina, c) 8% di fruttosio, d) 8 % di glucosio, e) 3,5% olio di mais sospesi in 0,3% di xanthan gum ed f) 0,3% di xanthan gum. </li><li> Assicurarsi che le soluzioni nutritive sono isocalorica; pertanto, la concentrazione di mais olio 3,5% è isocalorica alle soluzioni zuccherine 8%. </li><li> garantire °a ratti soluzioni campione con una latenza breve (meno di 1 minuto). Se questo requisito non è soddisfatto, poi scarta il soggetto dallo studio. </li></ol> 3. Preparazione del tessuto <ol><li> Anestetizzare ciascun animale un&#39;iniezione intraperitoneale di pentobarbital 90 min dopo l&#39;esposizione iniziale a ciascuna soluzione di prova. Verificare che gli animali siano adeguatamente anestetizzati dimostrando che l&#39;animale non è più sensibile a tali riflessi, come il ritiro a pizzico piedi, lampeggianti in seguito alle pressioni della cornea diretta o scuotendo la testa alla stimolazione pinna profondo. </li><li> Profumato ogni animale transcardially come descritto in precedenza 69. <ol><li> Anestetizzare i topi con una dose eccessiva di sodio pentobarbital (65 mg / kg), rimuovere la gabbia toracica ed esporre il petto per il libero accesso al cuore 69. </li><li> Inserire l&#39;ago nel vertice della valvola cuore sinistro, e tagliare la vena cava. Somministrare soluzione tampone fosfato (PBS, ~ 180 ml) seguito da un co fissativo tampone fosfatontaining 4% paraformaldeide (~ 180 ml). </li><li> Assicurarsi che l&#39;animale effettivamente viene perfuso correttamente esaminando se il liquido lascia altre cavità, come il naso, la bocca, e zone genitali. Nota: la fissazione corretta con paraformaldeide sarà accompagnata da grandi movimenti muscolari. Se ciò non si verifica, regolare nuovamente l&#39;ago finché si verifica questa reazione. </li></ol></li><li> Rimuovere il cervello dal cranio rapidamente tagliando pelliccia e la pelle dal cranio. Utilizzare rongeurs per rompere e rimuovere l&#39;osso dal cervello in movimento da dietro in avanti. Il lavoro inizialmente nell&#39;area sotto e dietro il cervelletto, assicurandosi che la rongeur è tra l&#39;osso e meningeo pia madre. Una volta che i lati superiore e del cranio vengono rimossi, utilizzare una piccola spatola per sollevare il cervello dalla base, e tagliare nervi cranici con piccole forbici. Fare attenzione a non danneggiare il cervello durante il tentativo di rimuovere il tessuto osseo. </li><li> Fissare il cervello in una soluzione di paraformaldeide al 4% notte a 4 ° C.Posizionare il cervello in saccarosio / 70% soluzione al 30% PBS a temperatura ambiente fino a che si depositano sul fondo del contenitore. </li><li> Bloccare il cervello <ol><li> Rimuovere la parte rostrale del taglio caudale trasversalmente al bulbo olfattivo del cervello. </li><li> Rimuovere la parte caudale del taglio trasversalmente a livello del cervelletto e il ponte cervello. </li></ol></li><li> Montare il cervello coronale con la parte caudale fissato allo stadio di un microtomo scorrevole, e tagliare sezioni coronali (40 micron) attraverso il mPFC (2,86-2,20 mm rostrale al bregma), il nucleo NAC e le coperture e dorsale striato (+ 1,76-1,60 mm rostrale al bregma), il AMY (-2.12 - -2.92 mm caudale al bregma), e il VTA (-5,20 - -5,60 mm caudale a bregma). Utilizzare un cervello di ratto atlante 70 per la guida. </li><li> Raccogliere sezioni free-floating in singoli pozzetti di una piastra da 24 pozzetti riempiti con PBS per eventuali analisi immunoistochimica 71. Utilizzare Parafilm per sigillare il 24 ciPiastra ll per assicurarsi che il PBS non evapora nel contenitore e asciugare il cervello. Conservare il tessuto cerebrale a 4 ° C. </li></ol> 4. Procedure c-fos (Adattato da 71) <ol><li> Trattare ogni sezione con 5 ml di 5% Normal Goat Serum e 0,2% Triton X-100 in PBS per 1 ora. </li><li> Incubare le sezioni trattate con anticorpi primari (coniglio anti-c-fos, 1: 5000) a 4 ° C per 36 ore in pozzetti contenenti 1 ml di PBS. </li><li> sezioni Sciacquare 3x con PBS (5 ml) per 10 minuti ciascuno. </li><li> Incubare con anticorpi secondari (biotinilato di capra anti-coniglio; 1: 200) a temperatura ambiente per 2 ore in pozzetti contenenti 1 ml di PBS. </li><li> Lavare 3x ciascuna sezione in PBS (5 ml) per 10 minuti ciascuno. </li><li> Incubare sezioni risciacquati per 2 ore in una miscela perossidasi avidina-rafano disponibile in commercio che viene fornito in un kit composto da Avadin DH (100 microlitri) e biotinilato perossidasi di rafano H (100 ml) in 5 ml di PBS. </li><li> Re-risciacquo sezioni 3x in PBS (5 ml) per 10 minuti ciascuno. </li><li> React sezioni con 0,05% diaminobenzidina (DAB) in presenza di 0,0015% H 2 O 2 per 5 - 10 min, a seconda della reattività del tessuto in pozzetti contenenti 5 ml della soluzione DAB. </li><li> Doppio-label sezioni VTA. li Incubare con anticorpo tirosina idrossilasi (TH) (coniglio anti-topo TH, 1: 2.000) in PBS (5 ml) notte a 4 ° C. </li><li> Sciacquare le sezioni 3x in PBS (5 ml) per 10 minuti ciascuno. </li><li> Incubare con anticorpi secondari (capra biotinilato anti-coniglio; 1: 200) in PBS (5 ml) a temperatura ambiente per 2 ore. </li><li> Sciacquare le sezioni 3x in PBS (5 ml) per 10 minuti ciascuno. </li><li> Visualizzare gli anticorpi utilizzando un complesso anticorpo-perossidasi secondario. Reagire con una combinazione di 0,05% DAB e una soluzione di nichel solfato 0,3%, per 5 - 10 minuti, a seconda della reazione del tessuto in pozzetti contenenti 5 ml di / soluzione NiCl DAB. </li><li> Assicurarsi che la soluzione DAB è lattiginosa di colore verde chiaro da essoreazione s con il solfato di nichel 0,3%. Se la soluzione è troppo verde, allora la reazione sarà troppo scura. </li><li> Montare tutte le sezioni su vetrini gelatina rivestite. Lasciateli asciugare durante la notte, e poi coprire antiscivolo con alcune gocce di una soluzione a base di toluene (TBS). </li><li> Codice scorre in modo che la condizione sperimentale è sconosciuta agli osservatori. </li></ol> 5. Determinazione del c-fos immunoreattiva Conti <ol><li> Assegnare coppie di osservatori imparziali di contare i neuroni Fos-positivi in ​​queste regioni di interesse (ROI): prelimbic mPFC, infralimbica mPFC, nucleo NAC, NAC conchiglia, nuclei AMY basolaterale, AMY centro-cortico-mediale, dorsale striato, e VTA. Delineano se c-Fos immunoreattività era presente in TH + e th- cellule del VTA. Figura 1 fornisce un quadro acquisito dallo schermo del NAC dal microscopio. </li></ol><img alt="Figura 1" src="/files/ftp_upload/53897/53897fig1.jpg" /> <strong&gt; Figura 1. Rappresentante sezione del nucleo accumbens (NAC) Visualizzazione Regioni di interesse delineati dalla griglia con cui Conti c-fos sono fatti. Il guscio NAC è trovato medialmente e ventralmente al nucleo NAC. Il nucleo NAC circonda la commessura anteriore (anteriore Comm.). L&#39;estensione ventrale del ventricolo laterale (laterale Vent.) È visibile. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53897/53897fig1large.jpg" target="_blank">Si prega di cliccare qui per vedere una versione più grande di questa figura.</a> <ol start="2"><li> Analizzare almeno tre fette rappresentante per luogo comune a tutti gli animali in tutte le condizioni di prova. </li><li> Utilizzare software e un microscopio ottico per analizzare l&#39;intera regione per ogni ROI tracciando un contorno (Figura 1). <ol><li> Per un determinato sito, aprire l&#39;applicazione e fare clic sul menu a discesa acquisizione e fare clic su &quot;Live Immagine&quot;. Portare il ROI a fuoco e fare clic sullo schermo per stabilire un punto di riferimento. poi TRace la regione del cervello scelta usando la griglia come guida. Una volta che la traccia è stata completata, contare le celle (passi 5.3.1.1 - 5.3.1.3). <ol><li> Fare doppio clic sull&#39;icona del software. Vai alla barra dei menu, cliccare su &quot;Acquisizione&quot; e poi &quot;Immagine diretta&quot;. Portare il ROI a fuoco e fare clic sullo schermo per stabilire un punto di riferimento. </li><li> Vai alla barra degli strumenti di rete e fare clic su &quot;Visualizza griglia&quot; e &quot;etichette Usa griglia&quot;. Delineare il ROI con una traccia prestabilita. </li><li> Contare tutte le cellule in ogni area del ROI, selezionare un &quot;+&quot; nella barra laterale di sinistra per tenere il conto delle cellule c-fos. Fare clic su ciascuna cella singolarmente per registrare i conteggi. Si consideri una cellula positiva per c-fos quando un cerchio rosso scuro definito è osservato (Figura 1). </li></ol></li><li> Ripetere questa procedura per ogni sito. </li><li> Record risiedono in un quaderno di laboratorio e sul computer per analisi future. Vai alla barra dei menu, cliccare su &quot;File&quot;, &quot;Salva file di dati&quot; per salvare il tracciato e conta. </li></ol&gt; </li><li> Assicurarsi che l&#39;affidabilità inter-rater (utilizzando la correlazione di conteggi) dei due valutatori disinformati per ogni sezione in ogni ROI supera sempre 0.8. </li></ol> 6. Statistiche <ol><li> Valutare prese saccarina di base nel corso dei primi quattro giorni utilizzando un ripetute misure di analisi 1 della varianza (ANOVA) confrontando le prese saccarina di giorni 1, 2, 3 e 4 69. </li><li> Confrontare l&#39;assunzione di saccarina (4 ° giorno) con prese di prova (giorno 5) dei sei gruppi utilizzando un blocco randomizzato a 2 vie ANOVA 69. </li><li> Utilizzare i confronti Tukey (p &lt;0.05) per determinare i singoli effetti significativi 69. </li><li> Determinare l&#39;affidabilità inter-rater, e quindi utilizzare i conteggi di un osservatore comune. </li><li> Conta media c-fos per i tre fette di rappresentanza per ogni sito 69. <ol><li> Eseguire 1 ANOVA dell&#39;attivazione c-fos indotta da assunzione dei sei soluzioni (olio 3,5% di mais, 8% di glucosio, fruttosio 8%, 0,2% saccarina aromatizzato, xaControllo Nthan gomma e acqua) per la perilimbic mPFC 69. </li><li> analisi parallele Ripetere dei sei gruppi per infralimbica mPFC, nucleo NAC, NAC guscio, basolaterale AMY, AMY centro-cortico-mediale, VTA e dorsale striato. Utilizzare i confronti Tukey (p &lt;0.05) per rivelare i singoli effetti significativi 69. </li></ol></li><li> Confrontare l&#39;assunzione di olio di mais sia con l&#39;assunzione di acqua e l&#39;assunzione di suo agente sospensioni, gomma xantano. Confronta fruttosio e glucosio prese sia con l&#39;assunzione di acqua e l&#39;assunzione del dolcificante non nutritivo, la saccarina. </li><li> Stabilire se le relazioni significative tra le prese di soluzioni e l&#39;attivazione di c-fos in ciascuno dei siti sono state osservate correlazioni con r Bonferroni (p &lt;0.05). <ol><li> confrontare sistematicamente conta c-fos nella perilimbic e infralimbica corteccia pre-frontale per ogni animale nel gruppo olio di mais 3,5%. </li><li> Ripetere le analisi sistematicamente paralleli di ogni coppia di sei siti (VTA, striato dorsale, infralimbic mPFC, perilimbic mPFC, nucleo NAC, NAC guscio, basolaterale AMY, centrale-cortico-mediale AMY) per l&#39;olio di mais 3,5%. </li><li> Ripetere le analisi sistematica parallele di questi sei siti per gli altri cinque condizioni di assunzione sperimentali (8% di glucosio, fruttosio 8%, 0,2% saccarina aromatizzato, di controllo gomma di xantano e acqua). </li></ol></li><li> Approfitta del fatto che gli stessi animali all&#39;interno di una condizione di soluzione sono stati valutati in tutti i siti determinando relazioni significative tra l&#39;attivazione di c-fos attraverso soluzioni e all&#39;interno di ogni soluzione utilizzando Bonferroni r correlazioni (p &lt;0.05). </li></ol>

Gli autori non hanno interessi finanziari concorrenti.

L&#39;obiettivo dello studio era quello di determinare se la fonte (VTA) e gli obiettivi di proiezione prosencefalo (NAC, Amy, mPFC) di DA neuroni ricompensa legati sono stati attivati ​​contemporaneamente dopo romanzo ingestione di grassi e zuccheri nei ratti con la tecnica del cellulare, c-fos . Il presente studio è una descrizione dettagliata dei protocolli di uno studio pubblicato in precedenza 69. E &#39;stato ipotizzato che il VTA, i suoi principali zone di proiezione al prelimbic e infralimbica mPFC, i...

Cervello dopamina (DA) è stato implicato nelle risposte centrali per l&#39;assunzione di zuccheri appetibili attraverso proposto edonistico 1,2, sforzo legate 3 e l&#39;abitudine a base di 4,5 meccanismi di azione. Il percorso principale DA implicati in questi effetti ha origine nella zona ventrale tegmentale (VTA), e progetti al accumbens (NAC) core e shell, l&#39;amigdala basolaterale e centrale-cortico-mediale (AMY), nucleo e la prelimbic e mediale infralimbica corteccia prefrontale (mPFC) (vedi recensioni 6,7). Il VTA è stato implicato in assunzione di saccarosio 8,9, e il rilascio di DA è osservato dopo l&#39;assunzione di zucchero nel NAC 10-15, AMY 16,17 e mPFC 18-20. L&#39;assunzione di grassi stimola anche DA NAC rilasciare 21, e un altro DA-ricca zona di proiezione di striato dorsale (caudato-putamen) è stato anche associato con l&#39;alimentazione DA-mediata 22,23. Kelley 24-27 proposto che questi progetti multiplazone di ioni di questo sistema DA-mediata formano una rete distribuita del cervello integrato e interattivo attraverso ampie e intime interconnessioni 28-34. Oltre alla capacità di DA D1 e D2 antagonisti dei recettori per ridurre l&#39;assunzione di zuccheri e grassi 35-37 38-40, DA segnalazione è stata anche coinvolta nel mediare la capacità di zuccheri e grassi per produrre preferenze di gusto condizionata (PCP) 41- 46. Microiniezioni di un antagonista del recettore DA D1 nel NAC, AMY o mPFC 47-49 eliminare acquisizione di CFP suscitato dal glucosio intragastrico. Mentre microiniezioni di entrambi DA D1 o D2 antagonisti dei recettori nel mPFC elimina acquisizione di fruttosio-CFP 50, l&#39;acquisizione e l&#39;espressione di fruttosio-PCP sono differenziale bloccati da antagonisti Da nel NAC e AMY 51,52. Il c-fos tecnica 53,54 è stata impiegata per indagare activatio neuralen indotta da assunzione gradevole al palato e l&#39;attivazione neurale. Il termine &quot;attivazione di c-fos&quot; verrà utilizzato in tutto il manoscritto, ed è operativamente definita da un aumento della trascrizione di c-Fos durante la depolarizzazione neuronale. Assunzione di saccarosio aumentato fos-come immunoreattività (Fli) nel nucleo AMY centrale, nucleo VTA, nonche la shell, ma non, della NAC 55-57. Mentre l&#39;assunzione di saccarosio in ratti sham-alimentazione significativamente aumentato FLI nel AMY e NAC, ma non il VTA 58, intragastrici saccarosio o glucosio infusioni aumentato significativamente FLI nel NAC e nuclei centrali e basolaterale del AMY 59,60. Ripetuta aggiunta di saccarosio all&#39;accesso chow di linea aumentata FLI nel mPFC nonché il guscio NAC e nucleo 61. Un saccarosio concentrazione scalata paradigma ha rivelato che i maggiori incrementi si sono verificati nel FLI AMY basolaterale e NAC, ma non il VTA 62. A seguito di condizionamento, l&#39;estinzione di zucchero legate rewa naturalecomportamenti rd aumentato FLI nel AMY basolaterale e il NAC 63. Inoltre, l&#39;associazione disponibilità di zucchero a un tono provocato il tono successivamente aumentando i livelli di FLI nel AMY basolaterale 64. L&#39;assunzione di alto contenuto di grassi è aumentato anche FLI in NAC e mPFC siti 65-67. Zucchero e grassi effetti la maggior parte degli studi precedentemente citati esaminato sull&#39;attivazione c-fos in singoli siti che non forniscono le informazioni relative all&#39;identificazione delle reti cerebrali distribuite ricompensa legati 24-27. Inoltre, molti degli studi, inoltre, non ha delineare i contributi relativi sub-aree del NAC (core e shell), AMY (basolaterale e centro-cortico-mediale) e mPFC (prelimbic e infralimbica) che potrebbero potenzialmente essere esaminata dal vantaggio di eccellenti, risoluzione di una singola cellula spaziale c-Fos mappatura 68. Il nostro laboratorio ha recentemente usato 69 attivazione di c-fos e alterazioni misurate simultaneamente nella via VTA DA e la sua prozone di iniezione (NAC, Amy e mPFC) dopo romanzo ingestione di grassi e zuccheri nei ratti. Il presente studio descrive le fasi procedurali e metodologici per analizzare simultaneamente se l&#39;esposizione acuta a sei diverse soluzioni (olio di mais, glucosio, fruttosio, saccarina, acqua e un controllo emulsione di grasso) sarebbe differenziale attivare FLI in sotto-aree del NAC, AMY, mPFC nonché striato dorsale. Questa rilevazione simultanea di differenze ha permesso la conferma degli effetti significativi sulla FLI in ciascun sito e decidere se sia i cambiamenti in un determinato sito correlato con cambiamenti di siti correlati, fornendo in tal modo il supporto per una rete cerebrale distribuita 24-27. Queste procedure collaudate se il VTA, il prelimbic e infralimbica mPFC, il nucleo e guscio della NAC, e la AMY basolaterale e centrale-cortico-mediale), così come striato dorsale visualizzerebbe coordinato e l&#39;attivazione FLI simultanea dopo orale, l&#39;assunzione incondizionato di glucosio (8%), fruttosio (8%), olio di mais (3,5%) e le soluzioni saccarina (0,2%).

<table><tbody><tr><td>Equipment</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sprague-Dawley ratti</td><td>Charles River Laboratories</td><td>CD-1</td><td></td></tr><tr><td>Gabbie in rete metallica</td><td>Prodotti da laboratorio, Seaford, DE</td><td>Rack</td><td></td>a 30 gabbie</tr><tr><td>Rat Chow</td><td>PMI Nutrition International</td><td>5001</td><td></td></tr><tr>Prodotti da laboratorio<td>per molle in metallo teso</td><td>, Seaford, DE</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>Bilancia per ratti</td><td>Fisher Scientific Company</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>Nalgene Centrifuge Tubes</td><td>Lab Products, Seaford, DE</td><td>10-0501</td><td></td></tr><tr><td>Rubber Stopper</td><td>Lab Products, Seaford, DE</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>Metal Sippers</td><td>Lab Products, Seaford, DE</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>Saccharin</td><td>Sigma Chemical Co</td><td>82385-42-0</td><td></td></tr><tr><td>Kool-Aid, Cherry</td><td>Kool-Aid</td><td>Commerical</td><td></td></tr><tr><td>Kool-Aid, Uva</td><td>Kool-Aid</td><td>Fruttosio commerciale</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Sigma Chemical Co</td><td>F0127</td><td></td></tr><tr><td>Glucosio</td><td>Sigma Chemical Co</td><td>G8270</td><td></td></tr><tr><td>Olio di mais</td><td>Mazzola</td><td>Gomma</td><td></td></tr><tr><td>di xantano</td> commerciale <td>Sigma Chemical Co</td><td>11138-66-2</td><td></td></tr><tr><td>Microtomo scorrevole</td><td>Microm International</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>Neurolucida Camera</td><td>MBF Bioscience</td><td>Applicazione</td><td></td>software</tr><tr><td>Vetrini rivestiti di gelatina</td><td>Fisher Scientific Company</td><td>12-550-343</td><td></td></tr><tr><td>Vetro di copertura</td><td>Fisher Scientific Company</td><td>12-545-M</td><td></td></tr><tr><td>Spazzole in nylon dorato</td><td>Loew-Cornell&nbsp;</td><td>2037</td><td></td></tr><tr><td>capelli naturali zibellino&nbsp;</td><td>Loew-Cornell</td><td>2022</td><td></td></tr><tr><td>Piastre a 24 pozzetti</td><td>Fisher Scientific</td><td>3527</td><td></td></tr><tr><td>Piastre a 6 pozzetti</td><td>Fisher Scientific</td><td>3506</td><td></td></tr><tr><td>Flaconi in Pyrex da 1 litro</td><td>Fisher Scientific</td><td>1395-1L</td><td></td></tr><tr><td>Inserto tissutale (filtro tissutale)</td><td>Pipette Fisher Scientific</td><td>7200214</td><td></td></tr><tr><td>Eagle&nbsp;</td><td>World Precision Instruments</td><td>E10 per 1-10&#956; </td><td></td>l</tr><tr><td>Pipette Eagle&nbsp;</td><td>World Precision Instruments</td><td>E100 per 20-100&#956; </td><td></td>l</tr><tr><td>Pipette Eagle&nbsp;</td><td>World Precision Instruments</td><td>E200 per 50-200&#956; </td><td></td>l</tr><tr><td>Pipette Eagle&nbsp;</td><td>World Precision Instruments</td><td>E1000 per 100-1000&#956; </td><td></td>l</tr><tr><td>Pipette Eagle&nbsp;</td><td>World Precision Instruments</td><td>E5000 per 1000-5000&#956; l&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Punte universali .1-10 &#956; l</td><td>Strumenti di precisione mondiali</td><td>500192</td><td></td></tr><tr><td>punte universali 5-200 &#956; l</td><td>Strumenti di precisione mondiali</td><td>500194</td><td></td></tr><tr><td>punte universali 500-5.000 &#956; l</td><td>World Precision Instruments</td><td>500198</td><td></td></tr><tr><td>Blade Vibroslice 100</td><td>World Precision Instruments</td><td>BLADE</td><td></td></tr><tr><td>DPX Mounting Medium&nbsp;</td><td>Microscopia elettronica&nbsp;</td><td>13510</td><td></td></tr><tr><td>Provette da centrifuga da 15 ml</td><td>Biologix Research Co.</td><td>10-0501</td><td></td></tr><tr><td>Scatole per vetrini</td><td>Biologix Research Co.</td><td>41-6100</td><td></td></tr><tr><td>Agitatore orbitale&nbsp;</td><td>Madell Corporation&nbsp; &nbsp;</td><td>ZD-9556</td><td></td></tr><tr><td>pesare le barche&nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>02-202-100</td><td></td></tr><tr><td>Pipette monouso da 5 ml</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-711-5AM</td><td></td></tr><tr><td>Stereo Investigator Software</td><td>Micro Bright Field</td><td>Applicazione</td><td></td> software</tr><tr><td>Nome</td><td>Azienda</td><td>Numero di catalogo</td><td>Comments</td></tr><tr><td><forte>Reagenti</forte></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldeide granulare</td><td>Fisher Scientific</td><td>19210</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Fisher Scientific</td><td>S271-1</td><td></td></tr><tr><td>Sodio fosfato monobasico</td><td>Fisher Scientific</td><td>S468-500</td><td></td></tr><tr><td>Sodio fosfato difasico</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP332-500</td><td></td></tr><tr><td>Idrogeno Perossido&nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>H324-500</td><td></td></tr><tr><td>SafeClear II&nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>23-044-192</td><td></td></tr><tr><td>Metanolo&nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>A412-1</td><td></td></tr><tr><td>Vettore di siero di capra normale</td><td></td><td>S-1000</td><td></td></tr><tr><td>Biotinilato Anti-coniglio IgG (H+L)</td><td>Vettore</td><td>BA-1000</td><td></td></tr><tr><td>ABC Kit Perossidasi Vettore standard</td><td></td><td>PK-4000</td><td></td></tr><tr><td>Anti-cFos (Ab-5) Coniglio</td><td>EMD chem/Cal Biochem</td><td>PC38</td><td></td></tr><tr><td>Triton X 100</td><td>SigmaAldrich</td><td>X-100</td><td></td></tr><tr><td>3,3' diaminobenzidina tetra cloridrato&nbsp;</td><td>SigmaAldrich</td><td>D5905</td><td></td></tr><tr><td>Idrossido di sodio</td><td>SigmaAldrich</td><td>5881</td><td></td></tr><tr><td>Primario TH anticorpo</td><td>EMD Millipore</td><td>AB152</td><td></td></tr><tr><td>Euthosol</td><td>Virbac AH</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

rilevazione simultanea di c-fos attivazione da mesolimbico e mesocorticali siti reward dopamina seguito ingenuo zuccheri e grassi ingestione in rats

Simultaneous Detection of c-Fos Activation from Mesolimbic and Mesocortical Dopamine Reward Sites Following Naive Sugar and Fat Ingestion in Rats

Questo studio utilizza l&#39;attivazione cellulare c-fos per valutare gli effetti del romanzo ingestione di grassi e zucchero sul cervello della dopamina (DA) percorsi nei ratti. L&#39;assunzione di zuccheri e grassi sono mediati dai loro attrazioni innate nonché le preferenze imparato. Cervello dopamina, soprattutto meso-limbico e proiezioni meso-corticale dalla zona ventrale tegmentale (VTA), è stato implicato in entrambe queste risposte ignoranti e apprese. Il concetto di reti del cervello distribuite, in cui diversi siti e sistemi di trasmettitore / peptidi interagiscono, è stato proposto di mediare l&#39;assunzione di cibo appetibile, ma non vi sono prove limitate empiricamente che dimostrano tali azioni. Così, l&#39;assunzione di zucchero suscita immunoreattività DA rilascio e aumenta c-fos-like (FLI) da singole zone di proiezione VTA DA tra cui nucleo accumbens (NAC), amigdala (Amy) e corteccia prefrontale mediale (mPFC), così come lo striato dorsale. Inoltre, l&#39;amministrazione centrale di selettivi antagonisti dei recettori DA in questi sitos differenziale ridurre l&#39;acquisizione e l&#39;espressione delle preferenze sapore condizionati indotte da zuccheri o grassi. Un approccio con il quale per determinare se questi siti hanno interagito come una rete cerebrale distribuita in risposta allo zucchero o di assunzione di grassi sarebbe quello di simultanea valutare se il VTA e le sue principali zone di proiezione mesotelencephalic DA (prelimbic e infralimbica mPFC, core e shell del NAc, basolaterale e centro-cortico-mediale AMY) nonché striato dorsale visualizzerebbe coordinato ed attivazione FLI simultanea dopo orale, assunzione incondizionata di olio di mais (3,5%), glucosio (8%), fruttosio (8%) e la saccarina (0,2 %) soluzioni. Questo approccio è un primo passo di successo per identificare la possibilità di utilizzare attivazione cellulare c-fos simultaneamente attraverso importanti siti del cervello per studiare l&#39;apprendimento ricompensa legati a ingestione di cibo appetibile nei roditori.

Tutti i risultati rappresentativi descritti di seguito sono stati pubblicati in precedenza 69, e sono nuovamente qui presentata a supporto della &quot;prova di concetto&quot; nell&#39;indicare l&#39;efficacia della tecnica. Soluzione Prese sono state osservate differenze significative negli apporti saccarina di base nel corso dei primi quattro giorni per tutti gli animali (F (3.108) = 57.27, ...

L&#39;obiettivo di questo studio è quello di individuare le reti del cervello distribuite ricompensa legati delineando una tecnica immunoistologiche affidabile utilizzando attivazione cellulare c-fos per misurare le variazioni simultanee nei percorsi della dopamina e siti terminale dopo romanzo ingestione di grassi e zuccheri nei ratti.

Rilevazione simultanea di c-Fos attivazione da mesolimbico e mesocorticali Siti Reward dopamina seguito Ingenuo zuccheri e grassi ingestione in Rats

This study uses cellular c-fos activation to assess effects of novel ingestion of fat and sugar on brain dopamine (DA) pathways in rats. Intakes of sugars ...

L'obiettivo generale di questo protocollo sperimentale è determinare se la VTA e le sue principali zone di proiezione mesotelencefalica di dopamina mostrino un'attivazione coordinata e simultanea di c-Fos dopo l'assunzione di soluzioni di olio di mais, glucosio, fruttosio o saccarina. Questo metodo può contribuire a rispondere a domande fondamentali nel campo della neurobiologia, come la motivazione, e a identificare se più siti cerebrali vengano attivati in modo coordinato in risposta a stimoli gradevoli. Il principale vantaggio di questa tecnica è che combina saggi comportamentali consolidati, tecniche di attivazione cellulare e analisi statistiche.Per impostare l'apparato, utilizzare un tubo per centrifuga calibrato con tappo di gomma e un tubo metallico inclinato a 45 gradi per fornire una misurazione accurata della soluzione offerta al ratto. Fissarlo alla gabbia mediante una molla metallica ben tesa, in modo da permettere la visibilità della scala di calibrazione. Da tre a cinque giorni prima dell'addestramento, ridurre le razioni alimentari del ratto fino a portarne il peso corporeo all'85% del valore iniziale, al fine di aumentare la motivazione a consumare la soluzione.Nel

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Rilevazione simultanea di c-Fos attivazione da mesolimbico e mesocorticali Siti Reward dopamina seguito Ingenuo zuccheri e grassi ingestione in Rats (Video) | JoVE Journal

Rilevazione simultanea di c-Fos attivazione da mesolimbico e mesocorticali Siti Reward dopamina seguito Ingenuo zuccheri e grassi ingestione in Rats

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