Analisi clonale di cellule embrionali staminali ematopoietiche precursori utilizzando indice della singola cella ordinamento combinato con cellule endoteliali nicchia co-cultura

L'obiettivo generale di questo metodo è identificare le proprietà fenotipiche e il potenziale di attecchimento delle cellule staminali ematopoietiche clonali o dei precursori delle HSC durante lo sviluppo embrionale murino. Questo metodo può aiutare a rispondere a domande chiave nel campo dell'emopoiesi dello sviluppo sui contributi unici del lignaggio dei precursori clonali delle HSC durante lo sviluppo embrionale. Il vantaggio principale di questa tecnica è che i precursori emogenici vengono analizzati a livello di singola cellula.

Ciò consente l'identificazione delle proprietà fenotipiche uniche che distinguono i rari precursori delle HSC. Inizia aggiungendo Aorta-Gonad-Mesonephros, AGM, tessuti sezionati da embrioni tra 9,5 e 11,5 giorni dopo il coito a un tubo conico da 15 millilitri contenente 10 millilitri di PBS integrato con il 10% di FBS su ghiaccio. Quando i tessuti si sono depositati sul fondo della provetta, aspirare il surnatante e aggiungere immediatamente un millilitro di collagenasi allo 0,25% ai campioni.