Individuazione di intermedi di ricombinazione omologhi tramite legatura di prossimità e PCR quantitativa in Saccharomyces cerevisiae

I saggi di acquisizione ed estensione del D-loop sono i primi a consentire una quantificazione imparziale e diretta delle fasi di formazione ed estensione del D-loop durante la ricombinazione omologa in cellule di lievito a crescita mitotica. Questa tecnica indipendente dalla vitalità consente lo studio di proteine nel metabolismo del D-loop che altrimenti non sarebbe possibile districarsi dai ruoli successivi, solo guardando i prodotti BIR. In futuro, prevediamo la transizione di questi test alle cellule umane per comprendere meglio il ruolo delle proteine chiave, tra cui BRCA2 e i casi bloom e Warner kilo nella ricombinazione omologa.

Inizia centrifugando i campioni per cinque minuti. Risospendere il pellet in 2,5 millilitri di soluzione di psoralene 1x e trasferirlo in una capsula di Petri da 60 x 15 millimetri. Per nessun controllo di reticolazione, risospendere il pellet in 2,5 millilitri di soluzione TE1.