Detection of Homologous Recombination Intermediates <em>via</em> Proximity Ligation and Quantitative PCR in <em>Saccharomyces cerevisiae</em>

Diedre Reitz; J&#233;r&#244;me Savocco; Aur&#232;le Piazza; Wolf-Dietrich Heyer

doi:10.3791/64240

사카로마이세스 세레비시아에서 근접 결찰 및 정량적 PCR을 통한 상동 재조합 중간체...

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Genetics

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Detection of Homologous Recombination Intermediates via Proximity Ligation and Quantitative PCR in Saccharomyces cerevisiae

사카로마이세스 세레비시아에서 근접 결찰 및 정량적 PCR을 통한 상동 재조합 중간체의 검출

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07:55 min

September 11, 2022

DOI: 10.3791/64240-v

Diedre Reitz¹, Jérôme Savocco², Aurèle Piazza², Wolf-Dietrich Heyer^1,3

¹Department of Microbiology & Molecular Genetics,University of California, Davis, ²Laboratory of Biology & Modeling of the Cell,École Normale Supérieure de Lyon, ³Department of Molecular & Cellular Biology,University of California, Davis

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

D-루프 포획(DLC) 및 D-루프 확장(DLE) 분석은 정량적 PCR과 함께 근접 결찰 원리를 활용하여 사카로마이세스 세레비시아에서 유도성 이중 가닥 절단 부위에서 D-루프 형성, D-루프 확장 및 생성물 형성을 정량화합니다.

D-루프 포획 및 확장 분석은 유사분열적으로 성장하는 효모 세포에서 상동 재조합 동안 D-루프 형성 및 확장 단계의 편향되지 않은 직접 정량을 허용하는 최초의 방법입니다. 이 생존력 독립적 기술을 통해 BIR 제품만 살펴보면 나중에 역할에서 벗어날 수 없는 D-루프 대사에서 단백질을 연구할 수 있습니다. 앞으로 우리는 BRCA2와 상동 재조합에서 블룸 및 워너 킬로 케이스를 포함한 주요 단백질의 역할을 더 잘 이해하기 위해 이러한 분석을 인간 세포로 전환할 계획입니다.

샘플을 5분 동안 원심분리하여 시작합니다. 펠릿을 2.5 밀리리터의 1x 소랄렌 용액에 다시 현탁시키고 60 x 15 밀리미터의 페트리 접시에 옮깁니다. 가교 제어가 없는 경우 2.5ml의 TE1 용액에 펠릿을 재현탁합니다.

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