Name: Identificazione, diagnosi e classificazione dei tumori maligni della guaina dei nervi periferici in modelli murini geneticamente modificati (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-05-17T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 57 s
Description: Scopri l'identificazione e la classificazione dei tumori maligni della guaina dei nervi periferici utilizzando modelli murini geneticamente modificati. Questo metodo migliora la diagnosi e la comprensione della neurofibromatosi di tipo uno.

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Questo lavoro è stato sostenuto da sovvenzioni del National Institute of Neurological Diseases and Stroke (R01 NS048353 e R01 NS109655 a S.L.C.; R01 NS109655-03S1 a D.P.J.), il National Cancer Institute (R01 CA122804 a S.L.C.) e il Dipartimento della Difesa (X81XWH-09-1-0086 e W81XWH-12-1-0164 a S.L.C.).

Valutazione patologica della progressione di PN-MPNST nel modello murino P 0-GGFβ3

<ol><li>Carroll, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+mechanisms+promoting+the+pathogenesis+of+Schwann+cell+neoplasms%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathologica%22%5BJournal%5D)">Molecular mechanisms promoting the pathogenesis of Schwann cell neoplasms.</a> Acta Neuropathologica. 123 (3), 321-348 (2012).</li>
<li>Longo, J. F., Weber, S. M., Turner-Ivey, B. P., Carroll, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+advances+in+the+diagnosis+and+pathogenesis+of+neurofibromatosis+type+1+%28NF1%29-associated+peripheral+nervous+system+neoplasms%5BTitle%5D)+AND+%22Advances+in+Anatomic+Pathology%22%5BJournal%5D)">Recent advances in the diagnosis and pathogenesis of neurofibromatosis type 1 (NF1)-associated peripheral nervous system neoplasms.</a> Advances in Anatomic Pathology. 25 (5), 353-368 (2018).</li>
<li>Longo, J. F., Carroll, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+RASopathies%3A+Biology%2C+genetics+and+therapeutic+options%5BTitle%5D)+AND+%22Advances+in+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">The RASopathies: Biology, genetics and therapeutic options.</a> Advances in Cancer Research. 153, 305-341 (2022).</li>
<li>Boyd, K. P., Korf, B. R., Theos, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurofibromatosis+type+1%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Academy+of+Dermatology%22%5BJournal%5D)">Neurofibromatosis type 1.</a> Journal of the American Academy of Dermatology. 61 (1), 1-16 (2009).</li>
<li>Rad, E., Tee, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurofibromatosis+type+1%3A+Fundamental+insights+into+cell+signalling+and+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Seminars+in+Cell+and+Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Neurofibromatosis type 1: Fundamental insights into cell signalling and cancer.</a> Seminars in Cell and Developmental Biology. 52, 39-46 (2016).</li>
<li>Brannan, C. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+disruption+of+the+neurofibromatosis+type-1+gene+leads+to+developmental+abnormalities+in+heart+and+various+neural+crest-derived+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+and+Development%22%5BJournal%5D)">Targeted disruption of the neurofibromatosis type-1 gene leads to developmental abnormalities in heart and various neural crest-derived tissues.</a> Genes and Development. 8 (9), 1019-1029 (1994).</li>
<li>Jacks, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumour+predisposition+in+mice+heterozygous+for+a+targeted+mutation+in+Nf1%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Genetics%22%5BJournal%5D)">Tumour predisposition in mice heterozygous for a targeted mutation in Nf1.</a> Nature Genetics. 7 (3), 353-361 (1994).</li>
<li>Zhu, Y., Ghosh, P., Charnay, P., Burns, D. K., Parada, L. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurofibromas+in+NF1%3A+Schwann+cell+origin+and+role+of+tumor+environment%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Neurofibromas in NF1: Schwann cell origin and role of tumor environment.</a> Science. 296 (5569), 920-922 (2002).</li>
<li>Cichowski, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+of+tumor+development+in+neurofibromatosis+type+1%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Mouse models of tumor development in neurofibromatosis type 1.</a> Science. 286 (5447), 2172-2176 (1999).</li>
<li>Joseph, N. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+loss+of+Nf1+transiently+promotes+self-renewal+but+not+tumorigenesis+by+neural+crest+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">The loss of Nf1 transiently promotes self-renewal but not tumorigenesis by neural crest stem cells.</a> Cancer Cell. 13 (2), 129-140 (2008).</li>
<li>Rhodes, S. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cdkn2a+%28Arf%29+loss+drives+NF1-associated+atypical+neurofibroma+and+malignant+transformation%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Molecular+Genetics%22%5BJournal%5D)">Cdkn2a (Arf) loss drives NF1-associated atypical neurofibroma and malignant transformation.</a> Human Molecular Genetics. 28 (16), 2752-2762 (2019).</li>
<li>Chaney, K. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cdkn2a+loss+in+a+model+of+neurofibroma+demonstrates+stepwise+tumor+progression+to+atypical+neurofibroma+and+MPNST%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Cdkn2a loss in a model of neurofibroma demonstrates stepwise tumor progression to atypical neurofibroma and MPNST.</a> Cancer Research. 80 (21), 4720-4730 (2020).</li>
<li>Mohamad, T., Plante, C., Brosseau, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toward+understanding+the+mechanisms+of+malignant+peripheral+nerve+sheath+tumor+development%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Science%22%5BJournal%5D)">Toward understanding the mechanisms of malignant peripheral nerve sheath tumor development.</a> International Journal of Molecular Science. 22 (16), 8620(2021).</li>
<li>Somatilaka, B. N., Sadek, A., McKay, R. M., Le, L. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Malignant+peripheral+nerve+sheath+tumor%3A+models%2C+biology%2C+and+translation%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">Malignant peripheral nerve sheath tumor: models, biology, and translation.</a> Oncogene. 41 (17), 2405-2421 (2022).</li>
<li>Keng, V. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conditional+inactivation+of+Pten+with+EGFR+overexpression+in+Schwann+cells+models+sporadic+MPNST%5BTitle%5D)+AND+%22Sarcoma%22%5BJournal%5D)">Conditional inactivation of Pten with EGFR overexpression in Schwann cells models sporadic MPNST.</a> Sarcoma. 2012, 620834(2012).</li>
<li>Miettinen, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Histopathologic+evaluation+of+atypical+neurofibromatous+tumors+and+their+transformation+into+malignant+peripheral+nerve+sheath+tumor+in+patients+with+neurofibromatosis+1-a+consensus+overview%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Pathology%22%5BJournal%5D)">Histopathologic evaluation of atypical neurofibromatous tumors and their transformation into malignant peripheral nerve sheath tumor in patients with neurofibromatosis 1-a consensus overview.</a> Human Pathology. 67, 1-10 (2017).</li>
<li>Lee, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PRC2+is+recurrently+inactivated+through+EED+or+SUZ12+loss+in+malignant+peripheral+nerve+sheath+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Genetics%22%5BJournal%5D)">PRC2 is recurrently inactivated through EED or SUZ12 loss in malignant peripheral nerve sheath tumors.</a> Nature Genetics. 46 (11), 1227-1232 (2014).</li>
<li>Zhang, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Somatic+mutations+of+SUZ12+in+malignant+peripheral+nerve+sheath+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Genetics%22%5BJournal%5D)">Somatic mutations of SUZ12 in malignant peripheral nerve sheath tumors.</a> Nature Genetics. 46 (11), 1170-1172 (2014).</li>
<li>Magallon-Lorenz, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deep+genomic+analysis+of+malignant+peripheral+nerve+sheath+tumor+cell+lines+challenges+current+malignant+peripheral+nerve+sheath+tumor+diagnosis%5BTitle%5D)+AND+%22iScience%22%5BJournal%5D)">Deep genomic analysis of malignant peripheral nerve sheath tumor cell lines challenges current malignant peripheral nerve sheath tumor diagnosis.</a> iScience. 26 (2), 106096(2023).</li>
<li>Longo, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+and+genomic+characterization+of+a+sporadic+malignant+peripheral+nerve+sheath+tumor+cell+line%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Establishment and genomic characterization of a sporadic malignant peripheral nerve sheath tumor cell line.</a> Scientific Reports. 11 (1), 5690(2021).</li>
<li>Huijbregts, R. P., Roth, K. A., Schmidt, R. E., Carroll, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypertrophic+neuropathies+and+malignant+peripheral+nerve+sheath+tumors+in+transgenic+mice+overexpressing+glial+growth+factor+beta3+in+myelinating+Schwann+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Hypertrophic neuropathies and malignant peripheral nerve sheath tumors in transgenic mice overexpressing glial growth factor beta3 in myelinating Schwann cells.</a> Journal of Neuroscience. 23 (19), 7269-7280 (2003).</li>
<li>Stonecypher, M. S., Byer, S. J., Grizzle, W. E., Carroll, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+the+neuregulin-1%2FErbB+signaling+pathway+promotes+the+proliferation+of+neoplastic+Schwann+cells+in+human+malignant+peripheral+nerve+sheath+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">Activation of the neuregulin-1/ErbB signaling pathway promotes the proliferation of neoplastic Schwann cells in human malignant peripheral nerve sheath tumors.</a> Oncogene. 24 (36), 5589-5605 (2005).</li>
<li>Kohli, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+pan+erbB+inhibitor+PD168393+enhances+lysosomal+dysfunction-induced+apoptotic+death+in+malignant+peripheral+nerve+sheath+tumor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Neuro-Oncology%22%5BJournal%5D)">The pan erbB inhibitor PD168393 enhances lysosomal dysfunction-induced apoptotic death in malignant peripheral nerve sheath tumor cells.</a> Neuro-Oncology. 14 (3), 266-277 (2012).</li>
<li>Eckert, J. M., Byer, S. J., Clodfelder-Miller, B. J., Carroll, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuregulin-1+beta+and+neuregulin-1+alpha+differentially+affect+the+migration+and+invasion+of+malignant+peripheral+nerve+sheath+tumor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">Neuregulin-1 beta and neuregulin-1 alpha differentially affect the migration and invasion of malignant peripheral nerve sheath tumor cells.</a> Glia. 57 (14), 1501-1520 (2009).</li>
<li>Kazmi, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transgenic+mice+overexpressing+neuregulin-1+model+neurofibroma-malignant+peripheral+nerve+sheath+tumor+progression+and+implicate+specific+chromosomal+copy+number+variations+in+tumorigenesis%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Transgenic mice overexpressing neuregulin-1 model neurofibroma-malignant peripheral nerve sheath tumor progression and implicate specific chromosomal copy number variations in tumorigenesis.</a> American Journal of Pathology. 182 (3), 646-667 (2013).</li>
<li>Brosius, S. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuregulin-1+overexpression+and+Trp53+haploinsufficiency+cooperatively+promote+de+novo+malignant+peripheral+nerve+sheath+tumor+pathogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathologica%22%5BJournal%5D)">Neuregulin-1 overexpression and Trp53 haploinsufficiency cooperatively promote de novo malignant peripheral nerve sheath tumor pathogenesis.</a> Acta Neuropathologica. 127 (4), 573-591 (2014).</li>
<li>Vogel, K. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+tumor+model+for+neurofibromatosis+type+1%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Mouse tumor model for neurofibromatosis type 1.</a> Science. 286 (5447), 2176-2179 (1999).</li>
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<li>Landuzzi, L., Ruzzi, F., Lollini, P. L., Scotlandi, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synovial+sarcoma+preclinical+modeling%3A+integrating+transgenic+mouse+models+and+patient-derived+models+for+translational+research%5BTitle%5D)+AND+%22Cancers%22%5BJournal%5D)">Synovial sarcoma preclinical modeling: integrating transgenic mouse models and patient-derived models for translational research.</a> Cancers. 15 (3), 588(2023).</li>
<li>Cohen, P. R., Rapini, R. P., Farhood, A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+the+human+hematopoietic+progenitor+cell+antigen+CD34+in+vascular+and+spindle+cell+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cutaneous+Pathology%22%5BJournal%5D)">Expression of the human hematopoietic progenitor cell antigen CD34 in vascular and spindle cell tumors.</a> Journal of Cutaneous Pathology. 20 (1), 15-20 (1993).</li>
<li>Weiss, S. W., Nickoloff, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD-34+is+expressed+by+a+distinctive+cell+population+in+peripheral+nerve%2C+nerve+sheath+tumors%2C+and+related+lesions%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Surgical+Pathology%22%5BJournal%5D)">CD-34 is expressed by a distinctive cell population in peripheral nerve, nerve sheath tumors, and related lesions.</a> American Journal of Surgical Pathology. 17 (10), 1039-1045 (1993).</li>
<li>Longo, J. F., Brosius, S. N., Carroll, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Defining+gene+functions+in+tumorigenesis+by+ex+vivo+ablation+of+floxed+alleles+in+malignant+peripheral+nerve+sheath+tumor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Defining gene functions in tumorigenesis by ex vivo ablation of floxed alleles in malignant peripheral nerve sheath tumor cells.</a> Journal of Visualized Experiments. (174), (2021).</li>
<li>Hoffman, G. E., Murphy, K. J., Sita, L. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+importance+of+titrating+antibodies+for+immunocytochemical+methods%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Protocols+in+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">The importance of titrating antibodies for immunocytochemical methods.</a> Current Protocols in Neuroscience. 76, 2.12.1-2.12.37 (2016).</li>
<li>Brossier, N. M., Carroll, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetically+engineered+mouse+models+shed+new+light+on+the+pathogenesis+of+neurofibromatosis+type+I-related+neoplasms+of+the+peripheral+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research+Bulletin%22%5BJournal%5D)">Genetically engineered mouse models shed new light on the pathogenesis of neurofibromatosis type I-related neoplasms of the peripheral nervous system.</a> Brain Research Bulletin. 88 (1), 58-71 (2012).</li>
</ol>

Gli autori non hanno conflitti di interesse da rivelare.

I metodi istologici e biochimici qui presentati forniscono un quadro di riferimento per la diagnosi e la caratterizzazione di modelli GEM di neurofibroma e patogenesi MPNST. Nel corso degli anni, abbiamo trovato queste metodologie molto utili per valutare la patologia dei tumori della guaina nervosa periferica che insorgono nei modelli GEM 21,25,26. Tuttavia, mentre i protocolli qui delineati sono utili per determinare l'accuratezza con cui i tumori nei modelli GEM ricapitolano la patologia delle loro controparti umane, ci sono alcune limitazioni a queste strategie che dovrebbero essere apprezzate. Per cominciare, i topi P 0-GGFβ3 mostrano una penetranza quasi completa del loro fenotipo tumorale, il che rende relativamente facile ottenere un gran numero di topi con neurofibromi e MPNST 21,25,26 che possono essere utilizzati per studi genomici e screening shRNA su scala genomica. L'elevata penetranza del fenotipo in questo modello rende anche i topi P 0-GGFβ3 molto utili per gli studi preclinici. Va riconosciuto, tuttavia, che questo non sarà il caso di tutti i modelli di cancro GEM. Questo è il motivo per cui abbiamo sottolineato l'importanza di determinare la frazione di animali che si può prevedere sviluppino tumori. Quando si lavora con un modello animale che sviluppa meno comunemente tumori, abbiamo trovato vantaggioso utilizzare modalità di imaging come la risonanza magnetica o la tomografia a emissione di positroni per identificare definitivamente gli animali portatori di tumori che possono essere inseriti in studi preclinici o altri studi. Tuttavia, questo approccio può essere proibitivo dal punto di vista dei costi, se sono necessarie scansioni ripetute. Questo è il motivo per cui abbiamo anche sottolineato l'importanza di stabilire il tempo medio di sopravvivenza del modello GEM di interesse26: capire quando ci si può aspettare che un animale sviluppi un tumore riduce il numero di scansioni necessarie per identificare gli animali con il fenotipo desiderato e i costi associati.
È anche importante riconoscere che un tumore di grandi dimensioni in un topo è ancora in realtà una quantità piuttosto piccola di tessuto. In questo protocollo, si raccomanda un processo in cui il tessuto tumorale viene diviso in terzi, con porzioni dedicate all'istologia/immunoistochimica, alla creazione di colture cellulari di passaggio precoce e all'isolamento delle biomolecole (proteine, RNA, DNA) di interesse. Tuttavia, le dimensioni del tumore variano e se il tumore è piuttosto piccolo, ciò può precludere la possibilità di avere abbastanza tessuto da dividere in questo modo. In tal caso, lo sperimentatore deve determinare se la diagnosi del tumore o un altro uso del tessuto tumorale ha la priorità32. In queste circostanze, il nostro pregiudizio è che dobbiamo avere una diagnosi corretta per capire con cosa stiamo lavorando prima di intraprendere altri esperimenti. Abbiamo scoperto che le diagnosi di tumore di solito possono essere prontamente stabilite utilizzando meno di un terzo della neoplasia. Quando si ha a che fare con tumori di piccole dimensioni, in genere si rimuove un piccolo frammento di tessuto tumorale, lo si avvolge in tessuto istologico e lo si posiziona in una cassetta tissutale per garantire che il tessuto non vada perso durante la lavorazione. Lo svantaggio di questo approccio è che può indurre lo sperimentatore a sottovalutare la neoplasia se si desidera la classificazione dell'OMS; Questo perché le regioni di grado inferiore e superiore coesistono comunemente nei tumori e, se viene prelevato un campione molto piccolo, il grado ottenuto dipenderà da dove è stato prelevato il campione tumorale.
I protocolli che descriviamo per stabilire l'identità tumorale della guaina dei nervi periferici si basano fortemente sull'immunoistochimica. Sebbene esistano approcci alternativi occasionali che possono essere utilizzati per alcuni tipi di cellule (ad esempio, l'esecuzione di colorazioni Unna per identificare i mastociti), ciò non è uniformemente vero per la maggior parte dei tipi di cellule presenti nei neurofibromi e nelle MPNST. Di conseguenza, è necessario prestare molta attenzione per stabilire che le procedure immunoistochimiche che verranno utilizzate siano state adeguatamente ottimizzate. In base alla nostra esperienza, diversi problemi possono compromettere l'immunoistochimica diagnostica. È di fondamentale importanza che lo sperimentatore esegua una serie di diluizioni con un anticorpo primario che non ha mai utilizzato prima; Inoltre, una serie di diluizioni deve essere eseguita quando si utilizza un nuovo lotto di un anticorpo precedentemente ottimizzato33. È inoltre necessario prestare attenzione per garantire che siano disponibili nuovi lotti di reagenti. Nella nostra esperienza, quando invecchiano, il perossido di idrogeno e il DAB sono particolarmente inclini a non funzionare correttamente, il che può portare lo sperimentatore a decidere in modo inappropriato che le loro macchie sono negative.
I profili immunoistochimici che descriviamo per i neurofibromi plessiformi, le MPNST e i diversi tipi di neoplasie che vengono considerate nella diagnosi differenziale delle MPNST sono quelli che abbiamo più comunemente riscontrato 21,25,26,34. Tuttavia, poiché la differenziazione divergente non è rara nelle MPNST e in queste altre neoplasie, lo sperimentatore può incontrare profili di colorazione che differiscono in qualche modo da quelli che descriviamo qui. Queste sfumature sono il motivo per cui raccomandiamo vivamente che il team che caratterizza un nuovo modello GEM di tumorigenesi includa un patologo umano o veterinario esperto. In questo protocollo, abbiamo applicato la classificazione dell'OMS alle MPNST GEM e umane. Preferiamo questo sistema di classificazione perché i criteri di classificazione sono relativamente ben definiti e sono facili da confrontare tra MPNST umani e murini 2,28. Vorremmo notare, tuttavia, che i criteri di classificazione dell'OMS non sono uniformemente accettati dai patologi. Questo perché non è chiaro se i tre gradi dell'OMS applicati alle MPNST siano predittivi degli esiti clinici nei pazienti. Per questo motivo, molti patologi preferiscono classificare le MPNST semplicemente come neoplasie maligne di basso o alto grado. Utilizzando questo approccio, circa l'85% delle MPNST sono considerate neoplasie maligne di alto grado caratterizzate da attività mitotica vivace, marcata atipia cellulare e ipercromasia che può essere accompagnata da necrosi tumorale. Gli MPNST di basso grado mostrano meno cellularità, ipercromasia e attività mitotica.
Abbiamo scoperto che l'allotrapianto di cellule MPNST di passaggio precoce è un mezzo semplice per verificare la tumorigenicità di queste colture. Tuttavia, alcuni problemi dovrebbero essere considerati quando le cellule non stabiliscono un allotrapianto32. Nella nostra esperienza, mentre la stragrande maggioranza delle cellule MPNST di passaggio precoce stabilirà un alloinnesto, occasionalmente abbiamo incontrato colture di passaggio precoce che non lo fanno. Nonostante questo fallimento, l'ibridazione genomica comparativa array (aCGH) e il sequenziamento dell'intero esoma hanno dimostrato che queste colture di passaggio precoce presentavano anomalie genomiche multiple coerenti con il fatto che si trattava di cellule tumorali25,26. Abbiamo anche trovato colture di passaggio precoce che non sono sane, di solito perché le colture sono state lasciate diventare confluenti prima di raccoglierle per l'innesto. Anche le cellule danneggiate da una manipolazione brusca (ad esempio, incubate troppo a lungo con soluzione di dissociazione cellulare non enzimatica pipettata su e giù un numero eccessivo di volte) hanno scarse prestazioni quando vengono trapiantate. Segnaliamo inoltre che i tempi che abbiamo indicato per l'insediamento dell'innesto sono una stima basata sulla nostra esperienza. A volte, abbiamo incontrato culture di primo passaggio che stabiliscono con successo gli allotrapianti, ma impiegano più tempo per farlo.
Gli approcci sopra descritti forniscono un mezzo completo per caratterizzare gli aspetti chiave di un modello GEM di neoplasia del sistema nervoso periferico di nuova concezione e diagnosticare correttamente eventuali neurofibromi e MPNST che questi animali sviluppano. I metodi che delineiamo per stabilire colture MPNST di passaggio precoce e utilizzare queste colture per l'allotrapianto forniscono anche una chiara evidenza della tumorigenicità delle neoplasie identificate nei modelli GEM. Vorremmo sottolineare che non stiamo eseguendo la selezione di singoli cloni quando stabiliamo colture di passaggio precoce. Sebbene riconosciamo che una certa selezione è inevitabile quando si collocano cellule tumorali in coltura, questi risultati iniziali suggeriscono che le mutazioni identificate nelle colture GEM MPNST a passaggio precoce rimangono molto simili a quelle presenti nel tumore genitore. Tuttavia, utilizzando l'aCGH, abbiamo anche scoperto che continuare a portare queste colture di passaggio precoce per passaggi più estesi provoca cambiamenti genomici che iniziano a divergere da ciò che si vede nei passaggi precedenti di queste cellule tumorali.

Negli ultimi tre decenni, numerosi laboratori hanno tentato di creare modelli murini di tumori umani introducendo mutazioni associate al cancro umano nel genoma del topo o sovraesprimendo un prodotto genico che è sovraespresso nei tumori umani. I modelli murini geneticamente modificati (GEM) risultanti possono essere utilizzati per una varietà di scopi, come stabilire che la modifica genomica di nuova introduzione avvia la tumorigenesi, identificare altri cambiamenti genetici o epigenetici che si verificano successivamente che contribuiscono alla progressione del tumore e definire le vie di segnalazione chiave che guidano l'inizio e la progressione del tumore. A differenza dei modelli di xenotrapianto ortotopico, che si basano sull'uso di topi immunodeficienti, i modelli di cancro GEM hanno un sistema immunitario completamente funzionale e quindi modellano in modo più accurato le risposte agli agenti terapeutici candidati. Tuttavia, quando si utilizzano modelli di cancro GEM per scopi come questi, è essenziale che i ricercatori confermino che le osservazioni fatte con le neoplasie GEM sono rilevanti per le loro controparti umane. Tale convalida deve includere una valutazione approfondita della patologia delle neoplasie GEM e la determinazione se le caratteristiche patologiche delle neoplasie GEM ricapitolano la patologia del corrispondente tipo di tumore umano.
La sindrome da suscettibilità al tumore neurofibromatosi di tipo 1 (NF1) è la malattia genetica più comune che colpisce il sistema nervoso umano, che si verifica in circa 1 ogni 3.000-3.500 nati vivi 1,2,3. Gli individui affetti da NF1 sviluppano tumori multipli benigni della guaina nervosa periferica noti come neurofibromi nella pelle (neurofibromi dermici) e nei grandi nervi e plessi nervosi (neurofibromi plessiformi). Mentre sia i neurofibromi cutanei che quelli plessiformi peggiorano la qualità della vita del paziente producendo compromissione fisica, comportamentale e/o sociale, i neurofibromi plessiformi (PN) sono particolarmente pericolosi 4,5. Ciò è dovuto al fatto che i PN si trasformano spesso in tumori maligni della guaina dei nervi periferici (MPNST), che sono neoplasie aggressive a cellule fusiformi con un tasso di sopravvivenza eccezionalmente basso 1,2. In gran parte, questo basso tasso di sopravvivenza è dovuto al fatto che i regimi radioterapici e chemioterapici attualmente utilizzati per trattare le MPNST sono inefficaci. Tuttavia, lo sviluppo di nuove terapie più efficaci è stato impegnativo. Questo perché, nonostante la frequenza con cui le MPNST si verificano nei pazienti NF1, si tratta comunque di neoplasie rare. Di conseguenza, è molto difficile ottenere un gran numero di tumori umani da studiare; è anche difficile reclutare un numero sufficiente di pazienti con MPNST per gli studi clinici. Per superare queste limitazioni, sono stati generati diversi modelli GEM con l'obiettivo di ottenere ulteriori informazioni sulle anomalie che guidano la patogenesi del neurofibroma e la progressione del PN-MPNST e di facilitare gli studi preclinici con agenti terapeutici candidati.
I pazienti affetti da NF1 presentano mutazioni inattivanti in una copia del gene NF1. La patogenesi del neurofibroma si innesca quando si verifica una mutazione inattivante nel gene NF1 funzionale rimanente in una cellula della linea cellulare di Schwann. Sorprendentemente, tuttavia, quando i topi sono stati generati con mutazioni Nf1 inattivanti la linea germinale, non hanno sviluppato neurofibromi 6,7. La successiva dimostrazione che topi con cellule di Schwann Nf1-null e aploinsufficienza di Nf1 in tutti gli altri tipi cellulari (Krox20-Cre;Nf1flox/- topi) hanno sviluppato neurofibromi plessiformi hanno suggerito che per la patogenesi del neurofibroma8 era necessario un dosaggio ridotto del gene Nf1 in altri tipi di cellule. Anche allora, i neurofibromi plessiformi in Krox20-Cre; I topi flox/- Nf1 non sono progrediti fino a diventare MPNST e quindi hanno imitato solo parzialmente la biologia delle loro controparti umane. La patogenesi delle MPNST si è verificata quando le mutazioni di Nf1 sono state associate a mutazioni in altri geni oncosoppressori come Trp539 o Cdkn2a10, ma le MPNST in questi modelli GEM si sono sviluppate de novo o da neoplasie neurofibromatiche atipiche a potenziale biologico incerto (ANNUBPs)11,12, piuttosto che da neurofibromi plessiformi benigni preesistenti (vedi13,14 per eccellenti revisioni di questi modelli e di altri modelli che introducono ulteriori mutazioni con perdita di funzione associate a MPNST in geni come Suz12 e Pten15).
Questi modelli murini sono stati preziosi per stabilire il ruolo che geni come NF1, TP53 e CDKN2A svolgono nella patogenesi delle neoplasie del sistema nervoso periferico associate a NF1 e per studi preclinici che testano agenti terapeutici candidati. Tuttavia, abbiamo ancora una comprensione incompleta del processo attraverso il quale i neurofibromi plessiformi progrediscono fino a diventare neoplasie neurofibromatiche atipiche di potenziale biologico incerto (ANNUBPs16) e quindi MPNST. Recentemente sono stati compiuti alcuni progressi nella comprensione di questo processo con il recente rapporto secondo cui i topi con delezioni in Nf1 e Arf sviluppano ANNUBP che progrediscono fino a diventare MPNST11. Tuttavia, non esistono ancora modelli murini basati sulla mutazione di Nf1 che ricapitolano completamente il processo di progressione del neurofibroma plessiforme-MPNST osservato nell'uomo. Inoltre, non è chiaro se esistano più percorsi distinti che portano allo sviluppo di MPNST. Alla luce di ciò, è possibile che i GEM sopra descritti modellino solo un sottoinsieme di diversi percorsi che portano alla progressione del neurofibroma-MPNST e alla patogenesi del MPNST. Questo punto è enfatizzato dal fatto che le MPNST si verificano anche sporadicamente e che alcune MPNST sporadiche apparentemente non hanno mutazioni NF1 17,18.
Sebbene quest'ultimo punto sia stato messo in discussione dal recente suggerimento di Magollon-Lorenz et al. secondo cui almeno alcuni MPNST sporadici privi di mutazioni NF1 sono melanomi o un diverso tipo di sarcoma19, abbiamo recentemente riportato un MPNST sporadico e una linea cellulare derivata da questo tumore (cellule 2XSB) che era NF1 wild-type20. Durante la caratterizzazione del tumore genitore e della linea cellulare 2XSB, abbiamo sistematicamente escluso possibilità diagnostiche alternative, tra cui il melanoma e i molteplici altri tipi di sarcoma che sono considerati di routine nella diagnosi differenziale di un tumore maligno sporadico della guaina dei nervi periferici20. Inoltre, notiamo che Magollon-Lorenz et al. hanno riconosciuto che i loro risultati nelle tre linee cellulari MPNST sporadiche che hanno studiato non potevano essere generalizzati per indicare che tutti i tumori identificati come MPNST sporadici non lo sono.
Per costruire un modello GEM in cui il neurofibroma e la patogenesi di MPNST non dipendessero necessariamente da specifiche mutazioni del gene oncosoppressore, abbiamo generato topi transgenici in cui la sovraespressione del potente mitogeno delle cellule di Schwann neuregulin-1 (NRG1) era guidata dal promotore della proteina mielinica zero (P0) specifica per le cellule di Schwann (topi P 0-GGFβ3)21. Abbiamo precedentemente dimostrato che i neurofibromi umani, gli MPNST e le linee cellulari MPNST esprimono diverse isoforme NRG1 insieme alle tirosin-chinasi del recettore erbB (erbB2, erbB3 e erbB4) che mediano la segnalazione di NRG1 e che questi recettori erbB sono costitutivamente attivati22. Abbiamo anche dimostrato che gli inibitori farmacologici delle chinasi erbB inibiscono potentemente la proliferazioneMPNST 22, la sopravvivenza23 e la migrazione24. In linea con le nostre osservazioni nell'uomo, i topi P 0-GGFβ3 sviluppano neurofibromi plessiformi25 che progrediscono fino a diventare MPNST ad alta frequenza21,25. Abbiamo dimostrato che le MPNST P 0-GGFβ3, come le loro controparti umane, sviluppano comunemente mutazioni di Trp53 e Cdkn2a, così come numerose altre anomalie genomiche che potenzialmente contribuiscono alla tumorigenesi25. Le MPNST che insorgono nei topi P 0-GGFβ3 non hanno mutazioni inattivanti di Nf1. Tuttavia, utilizzando la complementazione genetica, abbiamo dimostrato che NRG1 promuove la tumorigenesi nei topi P 0-GGFβ3 prevalentemente attraverso le stesse cascate di segnalazione che sono alterate dalla perdita di Nf1 26; questa conclusione si basa sulla nostra scoperta che la sostituzione della sovraespressione di NRG1 con la perdita di Nf1 in presenza di aploinsufficienza di Trp53 (P 0-GGFβ3;Trp53+/- topi) produce animali in cui le MPNST si sviluppano de novo, come si vede in cis-Nf1+/-; Trp53+/- topi27.
Per ottenere queste e altre informazioni che dimostrino che i topi P 0-GGFβ3 modellano accuratamente i processi di patogenesi del neurofibroma e della progressione del neurofibroma-MPNST osservati nell'uomo con NF1, abbiamo sviluppato metodologie specializzate per l'elaborazione dei tessuti di questi animali, la diagnosi accurata dei loro tumori, la classificazione delle MPNST che insorgono in questi topi, la determinazione e la caratterizzazione di P0-GGFβ3 e P0-GGFβ3 a passaggio precoce; colture di Trp53+/- MPNST e confronto critico della patologia di P 0-GGFβ3 PNs e MPNSTs e P 0-GGFβ3; Trp53+/- MPNST a quello delle loro controparti umane. Molte di queste metodologie sono generalizzabili ad altri modelli GEM di neoplasia del sistema nervoso. Inoltre, molte di queste metodologie sono più ampiamente applicabili a modelli GEM in cui le neoplasie insorgono in altre sedi d'organo. Di conseguenza, qui presentiamo una descrizione dettagliata di queste metodologie.

<table><tbody><tr><td>Piastre per colture tissutali da 100 mm Corning</td><td>Falcon</td><td>353003</td><td></td></tr><tr><td>3, 3'- Diaminobensidina (DAB)</td><td>Vector Laboratories</td><td>SK-400</td><td></td></tr><tr><td>Piastre a 6 pozzetti</td><td>Corning Costar</td><td>3516</td><td></td></tr><tr><td>Acido acetico</td><td>Fisher Scientific</td><td>A38-212</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 Secondario (Capra Anti-Topo)</td><td>Invitrogen</td><td>A11029</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 568 Secondario (Capra Anti-Topo)</td><td>Invitrogen</td><td>A21043 o A11004</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 568 Secondario (Capra Anti-Coniglio)</td><td>Invitrogen</td><td>A11036</td><td></td></tr><tr><td>Cloruro di ammonio (NH4Cl)</td><td>Fisher Scientific</td><td>A661-500</td><td></td></tr><tr><td>Kit per il dosaggio delle proteine BCA</td><td>Thermo Scientific</td><td>23225</td><td></td></tr><tr><td>Albumina</td> <td>sierica bovinaFisher Scientific</td><td>BP1600-100</td><td></td></tr><tr><td>Caldesmon</td><td>ABCAM&nbsp;</td><td>E89, ab32330</td><td></td></tr><tr><td>CD117</td><td>Cell Marque</td><td>117R-18-ASR</td><td></td></tr><tr><td>CD163</td><td>Leica</td><td>NCL-L-CD163</td><td></td></tr><tr><td>CD31</td><td>ABCAM&nbsp;</td><td>ab29364</td><td></td></tr><tr><td>CD34</td><td>ABCAM&nbsp;</td><td>ab81289</td><td></td></tr><tr><td>CD86</td><td>ABCAM&nbsp;</td><td>ab53004</td><td></td></tr><tr><td>Raschietto cellulare</td><td>Sarstedt</td><td>83.183</td><td></td></tr><tr><td>Spogliarellista</td><td>cellulare Corning</td><td>25-056-CI</td><td></td></tr><tr><td>Coprioggetto</td><td>circolare Fisher Scientific</td><td>12-545-100</td><td></td></tr><tr><td>Citrisolve Hybrid (solvente a base di d-limonene)</td><td>Decon Laboratories</td><td>5989-27-5</td><td></td></tr><tr><td>Acido critico</td><td>Fisher Scientific</td><td>A104-500</td><td></td></tr><tr><td>Citocheratina</td><td>ABCAM</td><td>C-11, ab7753</td><td></td></tr><tr><td>Desmin</td><td>Agilent Dako&nbsp;</td><td>clone D33 (M0760)</td><td></td></tr><tr><td>Diaminobensizdina (DAB) Soluzione</td><td>Vector Laboratories</td><td>SK-4100</td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Corning</td><td>15-013-CV</td><td></td></tr><tr><td>Eosin Y</td><td>Thermo Scientific</td><td>7111</td><td></td></tr><tr><td>Etanolo (200 Proof)</td><td>Decon Laboratories</td><td>2716</td><td></td></tr><tr><td>Siero fetale di vitello</td><td>Omega Scientific</td><td>FB-01</td><td></td></tr><tr><td>Forksolin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F6886</td><td></td></tr><tr><td>Glicerolo</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G6279</td><td></td></tr> Soluzione <tr><td>salina bilanciata di Hank (HBSS)</td><td>Corning</td><td>21-022-CV</td><td></td></tr><tr><td>Harris Hematoxylin</td><td>Fisherbrand</td><td>245-677</td><td></td></tr><tr><td>Ematocitometro</td><td>Brightline-Hauser Scientific</td><td>1490</td><td></td></tr><tr><td>Acido cloridrico</td><td>Fisher Scientific</td><td>A144-212</td><td></td></tr><tr><td>Perossido di idrogeno</td><td>Fisher Scientific</td><td>327-500</td><td></td></tr><tr><td>Iba1</td><td>Wako Chemicals</td><td>019-19741</td><td></td></tr><tr><td>Kit di polimeri ImmPRESS HRP (perossidasi), mouse su mouse</td><td>Vector Laboratories</td><td>MP-2400</td><td></td></tr><tr><td>Kit di polimeri ImmPRESS HRP (perossidasi), Horse Anti-Rabbit</td><td>Vector Laboratories</td><td>MP-7401</td><td></td></tr><tr><td>Incubatore</td><td>Thermo Scientific</td><td>Heracell 240i Incubatore</td><td></td>a CO2</tr><tr><td>Isoflurano</td><td>Piramal</td><td>NDC 66794-017-25</td><td></td></tr><tr><td>Isopropanolo</td><td>Fisher Scientific</td><td>A415</td><td></td></tr><tr><td>Ki-67</td><td>Segnalazione cellulare&nbsp;</td><td>12202</td><td></td></tr><tr><td>Laminin</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>23017015</td><td></td></tr><tr><td>Azoto</td><td></td><td></td><td></td>Liquido</tr><tr><td>MART1</td><td>ABCAM&nbsp;</td><td>M2-9E3, ab187369</td><td></td></tr><tr><td>Microtomo</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Nestina</td><td>Milliporo&nbsp;</td><td>Umano: MAD5236 (10C2), Umano: MAB353 (Rat-401)</td><td></td></tr><tr><td>Neuregulin 1 beta</td><td>Realizzato internamente</td><td>da S.L.C. (disponibile anche come 396-HB-050/CF da R& Sistemi D)Neurofibromina</td><td></td></tr> <tr><td></td><td>Santa Cruz Biotecnologia&nbsp;</td><td>sc-67</td><td></td></tr><tr><td>NODO. Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ topi</td><td>Jackson Laboratory</td><td>5557</td><td></td></tr><tr><td>Latte in polvere scremato</td><td>Walmart</td><td>Marchio</td><td></td>di grande valore</tr><tr><td>P0-GGF&beta; 3 topi</td><td>Cera</td> di paraffina Leica <td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td>Paraplast 39601006</td><td></td></tr><tr><td>Parafilm M</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>PM-999</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldeide (4%)</td><td>Thermo Scientific</td><td>J19943-K2</td><td></td></tr><tr><td>Permount (mezzo di montaggio xilene)</td><td>PHmetro Fisher Scientific</td><td>SP15-100</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Mettler Toldedo</td><td>Seven Excellence, 8603</td><td></td></tr><tr><td>Soluzione salina tamponata con fosfato (Dulbecco's)</td><td>Corning</td><td>20-031-CV</td><td></td></tr><tr><td>PMEL</td><td>ABCAM&nbsp;</td><td>EP4863(2), ab137078</td><td></td></tr><tr><td>Bromidrato di poli-L-lisina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P5899-5MG</td><td></td></tr><tr><td>Macchina portatile per isofluranza</td> VetEquip Sistemi <td></td><td></td>di <td>anestesia per inalazione</td></tr><tr><td>PVA-DABCO (mezzo di montaggio acquoso)</td><td>Millipore Sigma</td><td>10981100ML</td><td></td></tr><tr><td>Cuociriso</td><td>Faggio Hamilton</td><td></td><td></td></tr><tr><td>S100B</td><td>Agilent Dako&nbsp;</td><td>Z0311&nbsp; (ora GA504)</td><td></td></tr><tr><td>SMA</td><td>Ventana Medical Systems&nbsp;</td><td>clone 1A4</td><td></td></tr><tr><td>Cloruro di Sodio</td><td>Fisher Scientific</td><td>S640</td><td></td></tr><tr><td>Citrato di Sodio (Diidrato)</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP327-1</td><td></td></tr><tr><td>Sox10</td><td>ABCAM&nbsp;</td><td>ab212843</td><td></td></tr><tr>Stampo <td></td><td></td><td></td><td>per istologia in acciaio</td></tr><tr><td>Superfrost Plus Vetrini per microscopio</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-550-15</td><td></td></tr><tr><td>TCF4/TCFL2&nbsp;</td><td>Segnalazione cellulare&nbsp;</td><td>(CH48H11) #2569</td><td></td></tr><tr>Cassetta <td></td><td></td><td></td><td>tissutale</td></tr><tr><td>Toluidina Blu</td><td>ACROS Organics</td><td>348600050</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP151-500</td><td></td></tr><tr><td>TRIzol</td><td>Invitrogen</td><td>15596026</td><td></td></tr><tr><td>Tripsina</td><td>Corning</td><td>25-051-31</td><td></td></tr></tbody></table>

identificazione, diagnosi e classificazione dei tumori maligni della guaina dei nervi periferici in modelli murini geneticamente modificati

Identifying, Diagnosing, and Grading Malignant Peripheral Nerve Sheath Tumors in Genetically Engineered Mouse Models

I pazienti con la sindrome da suscettibilità al tumore autosomico dominante neurofibromatosi di tipo 1 (NF1) sviluppano comunemente neurofibromi plessiformi (PN) che successivamente si trasformano in tumori maligni altamente aggressivi della guaina dei nervi periferici (MPNST). La comprensione del processo attraverso il quale un PN si trasforma in un MPNST sarebbe facilitata dalla disponibilità di modelli murini geneticamente modificati (GEM) che replicano accuratamente la progressione PN-MPNST osservata negli esseri umani con NF1. Sfortunatamente, i modelli GEM con ablazione di Nf1 non ricapitolano completamente questo processo. Questo ci ha portato a sviluppare topi P 0-GGFβ3, un modello GEM in cui la sovraespressione del mitogeno delle cellule di Schwann neuregulin-1 (NRG1) nelle cellule di Schwann provoca lo sviluppo di PN che progrediscono fino a diventare MPNST ad alta frequenza. Tuttavia, per determinare se la tumorigenesi e la progressione neoplastica nei topi P 0-GGFβ3 modellano accuratamente i processi osservati nei pazienti NF1, abbiamo dovuto prima dimostrare che la patologia dei tumori della guaina nervosa periferica P0-GGFβ3 ricapitola la patologia delle loro controparti umane.
In questo articolo, descriviamo le metodologie specializzate utilizzate per diagnosticare e classificare accuratamente le neoplasie del sistema nervoso periferico in modelli GEM, utilizzando P 0-GGFβ3 e P0-GGFβ3; Trp53+/- topi come esempio. Descriviamo i metodi istologici, immunoistochimici e istochimici utilizzati per diagnosticare PN e MPNST, come distinguere queste neoplasie da altri tipi di tumore che ne imitano la patologia e come classificare queste neoplasie. Discutiamo la creazione di colture di passaggio precoce da MPNST GEM, come caratterizzare queste colture utilizzando l'immunocitochimica e come verificare la loro tumorigenicità stabilendo allotrapianti. Collettivamente, queste tecniche caratterizzano la patologia dei PN e degli MPNST che insorgono nei modelli GEM e confrontano criticamente la patologia di questi tumori murini con le loro controparti umane.

Abbiamo sviluppato una metodologia per valutare se le neoplasie del sistema nervoso nei topi geneticamente modificati ricapitolano accuratamente la patologia delle loro controparti umane. Qui, applichiamo queste tecniche istologiche, i criteri patologici definiti e le metodologie di coltura ai neurofibromi e ai tumori maligni della guaina dei nervi periferici che insorgono nel modello murino P 0-GGFβ3.

Identificazione, diagnosi e classificazione dei tumori maligni della guaina dei nervi periferici in modelli murini geneticamente modificati

Patients with the autosomal dominant tumor susceptibility syndrome neurofibromatosis type 1 (NF1) commonly develop plexiform neurofibromas (PNs) that ...

Il nostro gruppo è focalizzato sulla neurofibromatosi di tipo uno e sulla comprensione della patologia dei tumori associati alla malattia, dei neurofibromi plessiformi e dei tumori maligni della guaina dei nervi periferici. Per fare ciò, impieghiamo diverse tecniche, tra cui l'uso di un modello murino geneticamente modificato, P0GGF beta tre. Il nostro laboratorio e altri che studiano i neurofibromi plessiformi e i tumori maligni della guaina dei nervi periferici affrontano sfide simili. L'accesso limitato ai campioni tumorali derivati dai pazienti ostacola il nostro lavoro.Di conseguenza, la creazione e la caratterizzazione di modelli murini geneticamente modificati è fondamentale per la ricerca in corso sui meccanismi della malattia e sul potenziale sviluppo di trattamenti. L'identificazione dei tumori dei nervi periferici può essere complicata e spesso vengono erroneamente diagnosticati come altri tumori. Per evitare ciò, abbiamo sviluppato un protocollo dettagliato utilizzando l'istologia, l'immunoistochimica e la classificazione per identificare e classificare con precisione questi tumori.Ciò migliora l'affidabilità dei futuri studi di ricerca. Il nostro lavoro fornisce un quadro per studiare e convalidare tumori derivati da modelli murini geneticamente modificati per garantire che imitino correttamente la malattia umana. Utilizzeremo gli attuali modelli murini geneticamente modificati per comprendere il microambiente tumorale e i fattori essenziali per la trasformazione del tumore.Cosa fa sì che i neurofibromi plessiformi progrediscano in tumori periferici maligni.

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Profilazione genetica e screening dell'abbandono su scala genomica per identificare bersagli terapeutici in modelli murini di tumore maligno della guaina nervosa periferica

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Identificazione, diagnosi e classificazione dei tumori maligni della guaina dei nervi periferici in modelli murini geneticamente modificati (Video) | JoVE Journal

Identificazione, diagnosi e classificazione dei tumori maligni della guaina dei nervi periferici in modelli murini geneticamente modificati

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