Sviluppo di una scatola comportamentale per la valutazione dell'inibizione del preimpulso e dell'attività neurale in modelli animali psichiatrici

Questo protocollo delinea un metodo semplice per valutare i modelli animali di schizofrenia progettato per ricercatori comportamentali senza competenze di programmazione o elettronica. Abbiamo creato una scatola comportamentale economica per valutare l'inibizione del preimpulso nei ratti affetti da problemi di sviluppo neurologico derivanti dal disagio precoce della vita. I recenti progressi nei modelli psichiatrici animali che utilizzano il test di inibizione prepulsa si concentrano sulla comprensione dei deficit di gating sensoriale osservati in disturbi come la schizofrenia.

Ciò include modificazioni genetiche, neuroimaging e interventi farmacologici per studiare le interruzioni dell'inibizione prepulsata, migliorando in ultima analisi la diagnostica e le terapie. Speriamo che il nostro protocollo renda popolare lo studio dell'inibizione del preimpulso in modelli animali di schizofrenia e che i laboratori che stanno studiando gli aspetti molecolari, comportamentali e fisiologici della malattia possano usarlo per contribuire alla comprensione di questo complesso disturbo psichiatrico. Per iniziare, crea una scatola acrilica trasparente per ospitare un topo che si comporta liberamente dotato di un headstage cablato.

Utilizzare cuscinetti in gomma autoadesivi per isolare la scatola in acrilico dalle vibrazioni e fissare l'accelerometro sottostante senza contatto con altre parti. Usando un saldatore, saldare un cavo a nastro direttamente ai quattro fori di spillo sulla scheda dell'accelerometro. VCC, GND, SCLU e SDA.

Pulisci il centro dell'acrilico e la parte frontale piatta dell'accelerometro. Quindi, collegare l'estremità opposta del cavo a nastro al microcontrollore collegando VCC a 3,3 volt, GND a GND, SCL a SCL e SDA a SDA. Successivamente, costruisci una camera insonorizzata con una porta frontale utilizzando bordi di 80 centimetri di pannelli di fibra a media densità di 15 millimetri di spessore.

Posiziona un altoparlante a 20 centimetri sopra la scatola in acrilico, assicurandoti che l'headstage e il cavo abbiano una gamma completa di movimento. Collegare l'uscita audio dal computer alla scheda del microcontrollore. Utilizzando un cavo bus seriale universale, collegare la scheda del microcontrollore al computer.

Quindi, aprire il software dell'ambiente di sviluppo integrato per la scheda del microcontroller sul computer. Dopo aver selezionato la scheda del microcontrollore, la porta COM e la velocità di trasmissione corrispondenti, apri lo schizzo del file, compila e carica il codice sulla scheda del microcontrollore. Fare clic sulla porta seriale del monitor per verificare la presenza di dati in entrata.

Quindi, chiudi il software dell'ambiente di sviluppo. Ora, posiziona un fonometro digitale all'interno della scatola acrilica dove verrà posizionato l'animale. Riproduci gli stimoli acustici e regola il campo di rilevamento sul fonometro per calibrare i livelli di stimolo inviati dal computer.

Quindi, apri il software open source preferito per l'acquisizione e il salvataggio dei dati dalla porta seriale. Configurare le impostazioni del software, inclusa la porta COM, la scheda del microcontrollore e la velocità di trasmissione. Fare clic su Connetti per leggere i dati non elaborati o la visualizzazione grafico.

Quindi, fai clic su Salva per avviare la registrazione dei dati degli esperimenti. Dopo aver impiantato l'array di elettrodi nel cervello del ratto, collegare con cura l'headstage all'impianto del connettore sul cranio del ratto. Quindi, accendere il sistema di acquisizione dati neuronale e verificare che riceva i dati dagli stimoli acustici attraverso il microcontrollore o un generatore TTL collegato al rilevatore audio o al microfono.

Attiva il registratore della porta seriale open source configurato in precedenza. Ora, utilizza il software di acquisizione elettrofisiologica per raccogliere dati elettrofisiologici e accelerometrici. Esporre l'animale a un rumore di fondo bianco per sette minuti, con presentazione casuale di tutti i tipi di impulsi, ripetendo ogni tipo di impulso 10 volte.

Al termine della sessione di registrazione, spegnere il software di acquisizione. Quindi, scollegare con cautela il connettore dell'headstage dall'impianto sul cranio dell'animale. Per eseguire analisi elettrofisiologiche e comportamentali, importare i dati grezzi contenenti l'attività cerebrale, l'accelerazione e gli stimoli acustici in una piattaforma di elaborazione del segnale.

Estrarre l'EPICS centrato su ogni stimolo acustico. Quindi, normalizzare i mezzi per consentire il confronto tra gli animali. Impostare la risposta su un singolo impulso come risposta massima e normalizzare le risposte riflesse ad altri impulsi rispetto a questo valore.

Infine, definire l'ampiezza di spavento per l'impulso 5 come 100% e rappresentare le risposte ad altri impulsi in funzione dell'ampiezza dell'impulso 5. L'analisi del potenziale di campo locale non ha indicato alcuna modulazione di potenza significativa nelle cortecce prelimbiche e infralimbiche post-stimolazione, mentre aree come l'area tegmentale ventrale, l'amigdala, il nucleo accumbens e l'ippocampo hanno mostrato una ridotta densità dello spettro di potenza nelle bande delta, theta e alfa, con una notevole modulazione beta. Sia gli accelerometri commerciali che quelli fai-da-te hanno dimostrato dati coerenti basati sull'ampiezza e sul tempo, con letture di base e ampiezze di risposta allo spavento che mostrano uno stretto allineamento tra i dispositivi.