Un test delle preferenze olfattive per misurare i pregiudizi edonistici olfattivi in modelli murini di depressione

Un pregiudizio negativo nell'elaborazione emotiva è una delle principali caratteristiche dei disturbi depressivi. Questo bias è particolarmente interessante per comprendere meglio la fisiopatologia della malattia. Qui proponiamo un protocollo per la valutazione affidabile della valutazione dell'odore innato utilizzando odori associati a varie valenze in modelli murini di depressione sia maschili che femminili.

La valutazione del bias edonico nei modelli murini è essenziale, sia per valutare meglio il fenotipo depressivo indotto, sia come strumento per studiare i meccanismi neurali alla base di questi cambiamenti nell'assegnazione della valenza. Nel complesso, questo protocollo fornisce nuove strade per la ricerca traslazionale per comprendere il meccanismo alla base della depressione e l'efficacia del trattamento. In futuro, cercheremo di decifrare i circuiti cerebrali alla base di questi processi emotivi interrotti e i potenziali meccanismi sesso-specifici, insieme all'azione degli antidepressivi su questi percorsi.

Per iniziare, prepara l'allestimento sperimentale utilizzando un'arena a due compartimenti che misura 45 centimetri per 50 centimetri per 25 centimetri con pareti in plexiglass grigio e un pavimento bianco. Dividi l'arena in due scomparti uguali di 25 centimetri per 45 centimetri, utilizzando una parete di plexiglass grigio che misura 37 centimetri per 25 centimetri. Fissare le piastre di Petri perforate con l'adesivo e posizionarle sul fondo della parete in ogni scomparto.

Quindi utilizzare un biadesivo o Blu Tack per fissare verticalmente ogni capsula di Petri sulla parete dell'arena. Successivamente, posiziona una telecamera a due metri sopra l'arena per registrare il comportamento degli animali e abilitare il tracciamento automatico dei loro movimenti durante l'esperimento. Ora dividi i topi in almeno due gruppi sperimentali, i topi di controllo e i topi del gruppo di test.

Trasferisci ogni topo nella sala di test comportamentale 30 minuti prima dell'inizio dell'esperimento. Utilizzando un luxmetro, impostare l'illuminazione nell'arena a circa 40 lux e verificare che l'illuminazione sia distribuita uniformemente. Quindi, aggiungi una carta da filtro pulita di 42,5 millimetri in ciascuna delle due piastre di Petri nell'arena.

Il primo giorno, posiziona delicatamente tutti i topi della stessa gabbia di alloggiamento insieme nell'arena per 10 minuti per ridurre la neofobia. Il giorno del test, preparare in una fiala di vetro l'odore sotto una cappa chimica, utilizzando la corretta diluizione. Diluire l'odorizzante in olio minerale o acqua distillata a seconda delle sue proprietà chimiche.

Poco prima di testare ogni topo, utilizzare una micropipetta con un puntale filtrante per raccogliere 200 microlitri di soluzione odorosa sotto il cofano. Erogare la soluzione sulla carta da filtro in una delle piastre di Petri. Lasciare la seconda carta da filtro nell'altra piastra di Petri non trattata.

Trasferire le piastre di Petri nella sala prove. Quindi fissali verticalmente sul muro dell'arena. Posiziona ogni mouse individualmente nell'arena al centro tra i due scomparti.

Registra il comportamento per 10 minuti utilizzando la telecamera dall'alto. Rimuovi il mouse dall'arena al termine del periodo di osservazione. Rimuovi la capsula di Petri dall'arena.

Quindi pulire l'arena utilizzando una soluzione disinfettante al 70% di etanolo e asciugarla accuratamente. Scartare la carta da filtro usata e preparare il prossimo campione di odore per il topo successivo. Utilizza un software di tracciamento automatico per registrare la posizione del mouse durante il test.

Definisci zone distinte all'interno dell'arena per l'analisi. Durante l'assuefazione, tutti i topi hanno trascorso almeno 50 secondi sia nella zona dell'odore che in quella di controllo, indicando un adeguato impegno nel compito. È importante sottolineare che i topi esposti all'UCMS hanno trascorso lo stesso tempo nella zona dell'odore rispetto ai controlli.

Anche se alcune differenze potrebbero essere osservate in altre zone. Le femmine di controllo si sono mosse significativamente di più rispetto alle femmine UCMS quando esposte all'urina maschile, ma non durante l'assuefazione o l'esposizione a TMT. Tutte le letture della risposta edonica mostrano differenze significative o una tendenza statistica tra le femmine di controllo e UCMS.

Questo effetto è visibile anche attraverso il Global Odor Exploration Index, che è una misura combinata della risposta edonica e locomotoria. L'indice di esplorazione degli odori è correlato positivamente con il punteggio di emotività sia per l'urina maschile che per il TMT nei topi femmine. Nei topi maschi, non sono state osservate differenze durante l'assuefazione o nella distanza totale percorsa attraverso il test.

Il tempo trascorso nella zona dell'odore mostra una significativa riduzione dell'urina femminile e dell'esplorazione del TMT nell'UCMS rispetto ai controlli. I topi UCMS entrano significativamente meno nella zona dell'odore, o tendono a farlo, e presentano un indice di preferenza significativamente ridotto sia per l'urina femminile che per il TMT. L'indice di esplorazione degli odori mostra una risposta comportamentale spostata negativamente all'urina femminile e al TMT dei topi UCMS rispetto ai controlli, che tendono ad essere positivamente correlati con il punteggio di emotività dell'animale.