Name: Un test delle preferenze olfattive per misurare i pregiudizi edonistici olfattivi in modelli murini di depressione (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-07-11T13:40:00.000+00:00
Duration: 6 min 27 s
Description: Scopri un test delle preferenze olfattive per valutare i pregiudizi edonistici nei modelli murini di depressione. Questo metodo consente di analizzare i meccanismi neurali alla base dei disturbi depressivi.

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Tutte le procedure sperimentali e di cura degli animali hanno seguito le linee guida nazionali ed europee (2010/63/UE) e sono state approvate dal Ministero della Ricerca francese (APAFiS: #16380-2018080217358599_v1; APAFIS #51636-2024101718013761_v4). I topi maschi e femmine C57BL/6JRj (modello UCMS) e i topi maschi C57BL/6NTac (modello CORT) (8 settimane di età) sono stati alloggiati socialmente (4-5 topi per gabbia) e mantenuti in condizioni standard (23 ± 1 °C; umidità 40%) con un ciclo luce/buio di 14/10 ore (luci accese alle 7 del mattino) con cibo e acqua ad libitum.
1. L'impostazione sperimentale
<ol>
	<li>Installazione dell'arena<ol>
		<li>Prepara l'allestimento sperimentale, che consiste in un'arena a due compartimenti (45 cm × 50 cm × 25 cm) realizzata con pareti in plexiglas grigio e pavimento bianco. Dividi i due scomparti (25 cm × 45 cm) da una parete in plexiglas grigio (37 cm × 25 cm).</li>
		<li>Posizionare una capsula di Petri forata (60 mm × 15 mm con 7 fori di 5 mm di diametro) sul fondo della parete da ogni scomparto.</li>
		<li>Fissare verticalmente le piastre di Petri alla parete utilizzando un adesivo biadesivo o un adesivo sensibile alla pressione (ad es. Blu-tack).</li>
		<li>Posiziona una telecamera in cima all'arena per registrare il comportamento degli animali (2 m sopra l'arena) e seguire automaticamente i loro movimenti durante l'esperimento.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Scelta degli odori<ol>
		<li>Prima dell'esperimento, scegli un elenco di odori con valenza neutra, positiva e negativa che verranno testati (vedi Tabella 1 per esempi).</li>
		<li>Verificare che tutti gli odori scelti abbiano una pressione di vapore simile. Inoltre, valutare la diffusione in tutta l'arena per alcuni odori con un rivelatore a fotoionizzazione (PID)26.</li>
		<li>Testa ogni odore in un giorno separato. NOTA: Si consiglia di pianificare prima l'uso di odori neutri, poi di quelli appetitivi e di terminare con gli odori avversi per ridurre al minimo gli effetti dell'esplorazione da un giorno all'altro. Questo ordine riduce al minimo gli effetti del carry-over da un giorno di test all'altro. In alternativa, si potrebbe utilizzare una presentazione casuale, ma tutti i gruppi sperimentali devono essere testati con la stessa sequenza di odori.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Progettazione di gruppi sperimentali<ol>
		<li>Dividere i topi in almeno due gruppi sperimentali: topi di controllo e topi che subiranno il modello di depressione. Ospita gli animali dello stesso gruppo nelle stesse gabbie. ATTENZIONE: Ogni gruppo sperimentale dovrebbe contenere almeno circa 7-8 individui per ottenere la significatività statistica. Le gabbie devono essere localizzate nelle vicinanze della stalla per ridurre al minimo l'effetto gabbia.</li>
		<li>Indurre un fenotipo depressivo in gruppi di topi rilevanti utilizzando il modello di depressione di scelta. NOTA: La descrizione dei protocolli per indurre comportamenti simili alla depressione nei topi va oltre lo scopo di questo articolo. Tuttavia, questo studio presenta esperimenti che utilizzano due diversi modelli (l'Unpredictable Chronic Mild Stress [UCMS] e il Corticosterone [CORT])27,28 come risultati rappresentativi per questo test di preferenza olfattiva. In breve, il modello UCMS si basa sull'esposizione a una varietà di diversi fattori di stress ambientale per diverse settimane, mentre il modello CORT consiste nella somministrazione cronica di corticosterone disciolto nell'acqua potabile dei topi (circa 5 mg/kg/giorno a seconda di quanto bevono i topi).</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
2. Fase di assuefazione
<ol>
	<li>Assuefazione generale e manipolazione<ol>
		<li>All'arrivo, lasciare i topi indisturbati per 1 settimana senza alcun cambio di lettiera. Aggiungi materiale di cotone supplementare e un igloo nella gabbia per ridurre lo stress.</li>
		<li>Dopo 1 settimana, maneggiare delicatamente tutti i topi ogni giorno per 3-4 giorni e abituarli alla manipolazione della coppa, preferibilmente nella sala sperimentale.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Condizioni sperimentali del test<ol>
		<li>Trasferisci il mouse nella sala prove comportamentali 30 minuti prima dell'inizio dell'esperimento. NOTA: Idealmente, la stanza comportamentale dovrebbe includere due parti separate che consentano agli animali di stare in una parte mentre il topo testato si esibisce nell'altra.</li>
		<li>Fare attenzione che le condizioni standard dell'abitazione siano mantenute (23 ± 1 °C; umidità 40%) e che non ci siano suoni, luci o odori fastidiosi nella stanza.</li>
		<li>Utilizzando un luxmetro, imposta l'illuminazione a circa 40 lux nell'arena. Assicurarsi che l'illuminazione sia omogenea nell'arena.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Assuefazione all'arena<ol>
		<li>Aggiungere una carta da filtro pulita (42,5 mm) in entrambe le piastre di Petri (60 mm × 15 mm).</li>
		<li>Usa del nastro adesivo trasparente per attaccare il coperchio della capsula di Petri al suo fondo (perché sarà posizionato verticalmente).</li>
		<li>Il primo giorno, posiziona delicatamente tutti i topi della stessa gabbia di alloggiamento insieme nell'arena per 10 minuti per ridurre la neofobia. ATTENZIONE: Posizionare sempre i topi nell'arena maneggiando la tazza per evitare lo stress dovuto al sollevamento per la coda.</li>
		<li>Il giorno successivo, introduci ogni topo individualmente nell'arena, proprio tra i due scomparti, e registra il comportamento per 10 minuti.</li>
		<li>Ripetere per 2-3 giorni di seguito.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Criterio di esplorazione<ol>
		<li>Definisci le due aree (25 cm 15 cm) in cui sono state posizionate le piastre di Petri e misura il tempo che ogni animale trascorre in ciascuna zona.</li>
		<li>Calcola la media di queste misure attraverso tutti i singoli passaggi di assuefazione.</li>
		<li>Se il tempo medio trascorso in ciascuna delle zone è superiore a 50 s, il criterio è soddisfatto. In caso contrario, ripetere le sessioni di assuefazione fino a raggiungere il criterio, oppure escludere l'animale dall'analisi. NOTA: È possibile eseguire un massimo di due sessioni di assuefazione al giorno (mattina e pomeriggio).</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
3. Fase di collaudo
<ol>
	<li>Preparazione dell'odore<ol>
		<li>Il giorno del test, preparare l'odore con la corretta diluizione sotto una cappa chimica. Diluire l'odore in olio minerale o acqua distillata, a seconda della struttura chimica. Per evitare la contaminazione, conservare l'olio minerale in una stanza separata e ventilata, lontano dagli odori. NOTA: Si consiglia l'uso di una nuova bottiglia di olio minerale quando si inizia un nuovo esperimento.</li>
		<li>Conservare la soluzione odorizzante in una fiala di vetro. Evitare contenitori di tubi di plastica che potrebbero aggiungere contaminazione da odori.</li>
		<li>Poco prima di eseguire il test su ciascun topo, raccogliere 200 μl della soluzione odorosa con una micropipetta utilizzando i puntali filtranti e posizionarli sulla carta da filtro in una delle due piastre di Petri.</li>
		<li>Lasciare intatta l'altra carta da filtro nella seconda capsula di Petri.</li>
		<li>Trasferisci le piastre di Petri nella sala prove e fissale verticalmente alla parete dell'arena. ATTENZIONE: Non preparare e gettare via le soluzioni odorizzanti nella sala sperimentale per evitare la contaminazione degli odori. Cambiare regolarmente i guanti durante l'esperimento. Se si sospetta che i guanti possano essere contaminati durante la manipolazione degli odori, cambiarli prima di afferrare i topi per il test.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Test comportamentale<ol>
		<li>Posiziona ogni mouse individualmente nell'arena, proprio tra i due scomparti.</li>
		<li>Registrare per 10 min.</li>
		<li>Rimuovi il mouse dall'arena.</li>
		<li>Rimuovere la capsula di Petri odore.</li>
		<li>Pulisci l'arena con una soluzione disinfettante (ad es. etanolo al 70%) e asciugala.</li>
		<li>Butta via la carta da filtro e ripeti la preparazione degli odori per il prossimo topo.</li>
		<li>Idealmente, prova solo un odore al giorno. Utilizzare preferenzialmente prima gli odori neutri, poi gli odori positivi e infine gli odori negativi (vedi Figura 1). ATTENZIONE: Condurre sia le fasi di assuefazione che quelle di test approssimativamente alla stessa ora del giorno durante i giorni dell'esperimento (idealmente tra le 9 e le 15). Se il numero di animali richiede un periodo di tempo più lungo, prestare attenzione a testare diversi gruppi sperimentali in modo alternato per evitare qualsiasi distorsione diurna. Se maschi e femmine devono essere testati nello stesso esperimento, preferire testare un sesso dopo l'altro. NOTA: Utilizzare piastre di Petri pulite ogni giorno del test per evitare la contaminazione degli odori. Da notare che le piastre di Petri perforate possono essere riutilizzate per diversi esperimenti dopo un'adeguata pulizia e decontaminazione degli odori.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
4. Analisi dei dati
<ol>
	<li>Monitoraggio del comportamento<ol>
		<li>Utilizza un programma di tracciamento automatico per registrare la posizione del mouse durante i test.</li>
		<li>Definire zone separate nell'arena per l'analisi (vedere la Figura 1):<ol>
			<li>Definisci una "zona di odore" (25 cm × 15 cm), l'area in cui viene posizionata la piastra di Petri con la carta da filtro imbevuta dell'odore (cioè l'area più vicina all'odore che rappresenta circa un terzo del compartimento superficiale).</li>
			<li>Definire una "zona di controllo" (25 cm × 15 cm), simmetrica alla "zona dell'odore", ma senza alcun odore aggiunto nella capsula di Petri.</li>
			<li>Definisci una "zona dietro l'odore" (25 cm × 30 cm), cioè il resto dello scomparto è dove è posizionata la capsula di Petri per gli odori.</li>
			<li>Definire una "zona dietro il controllo" (25 cm × 30 cm), simmetrica alla "zona dietro il controllo", costituita dal resto del vano antiodore. NOTA: Il tracciamento del punto centrale del corpo del topo è sufficiente per analizzare la preferenza olfattiva dell'animale. Tuttavia, tracciare il naso di ciascun topo in modo specifico può illustrare in modo più preciso l'indagine olfattiva da parte dell'animale.</li>
		</ol>
		</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Letture della risposta edonica<ol>
		<li>Utilizzando il tracciamento automatico, raccogli le seguenti informazioni per ogni mouse e ogni giorno del test, comprese le fasi di assuefazione:<ol>
			<li>Registra la distanza totale percorsa nell'arena (m).</li>
			<li>Registra il tempo trascorso in ogni zona dell'arena.</li>
			<li>Registra il numero di ingressi in ogni zona dell'arena.</li>
		</ol>
		</li>
		<li>Utilizzare la distanza totale percorsa per valutare i principali effetti locomotori.</li>
		<li>Per valutare le differenze nelle preferenze olfattive nei confronti dei vari odori, utilizzare le letture principali:<ol>
			<li>Usa il tempo trascorso nella zona degli odori.</li>
			<li>Utilizzare il numero di voci nella zona degli odori.</li>
			<li>Utilizzare un indice di preferenza, calcolato come il tempo trascorso nella zona dell'odore normalizzato al tempo trascorso in questa zona durante l'assuefazione (la normalizzazione viene eseguita sui topi di tutti i gruppi). La media si riferisce alla media aritmetica del tempo trascorso nella zona dell'odore e sd si riferisce alla sua deviazione standard. 
			<img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/68391/68391eq001v2.jpg" style="margin: auto;"></li>
			<li>Utilizzare un indice di esplorazione degli odori, calcolato come la media dei valori normalizzati della distanza percorsa, del tempo trascorso nella zona degli odori e del numero di voci nella zona degli odori, come segue: 
			<img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/68391/68391eq002.jpg" style="margin: auto;"> 
			<img alt="Equation 3" src="/files/ftp_upload/68391/68391eq003v2.jpg" style="margin: auto;"> NOTA: Questo indice di preferenza può essere adattato se necessario, ad esempio confrontando i tempi trascorsi nella zona di odore rispetto a quella di controllo. Se i gruppi mostrano differenze significative nella loro esplorazione della "zona dell'odore" durante l'assuefazione, la normalizzazione può essere eseguita solo rispetto al gruppo di controllo, piuttosto che a tutti i gruppi combinati.</li>
		</ol>
		</li>
		<li>Rappresentare visivamente queste letture per topi di controllo e simili alla depressione come media ± errore standard della media (SEM).</li>
		<li>Utilizzare l'analisi bidirezionale della varianza (ANOVA) a misure ripetute seguita da test post hoc (qui test della differenza meno significativa di Fisher non corretta) per tenere conto sia dei gruppi sperimentali, degli odori (fattore di misura ripetuto) e dei fattori di effetto dell'interazione. Il fattore di interazione indica se le differenze tra i gruppi sono coerenti in tutti gli odori presentati.</li>
		<li>Verificare la normalità e l'omoschedasticità utilizzando test adattati (test di Shapiro-Wilk, test di Bartlett). La significatività statistica è stata fissata a *p &lt; 0,05, **p &lt; 0,01, ***p &lt; 0,001, ****p &lt; 0,0001.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>

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</ol>

<table><tbody><tr><td>2,4,5-trimetiltiazolo</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>W332518-100G-K</td><td></td></tr><tr><td>2-trans ottanale</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>52464-1ML</td><td></td></tr><tr><td>Blu-tack</td><td>UHU</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Carta da filtro</td><td>Fisher Scientifico</td><td>11710125</td><td>42,5 millimetri</td></tr><tr><td>Fiala di vetro</td><td>DUTSCHER DOMINIQUE</td><td>958983</td><td></td></tr><tr><td>Olio minerale</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M5904-500ML</td><td></td></tr><tr><td>Noldus Ethovision</td><td>Noldus Ethovision</td><td>Versione 17.5</td><td>In alternativa, è possibile utilizzare Single Mouse Tracker nel software open source ICY o Deeplabcut</td></tr><tr><td>Petri</td><td>Falcone</td><td>351007</td><td>Piastra Petri da 60 mm x 15 mm con 7 fori su misura di 5 mm di diametro</td></tr><tr><td>Arena in plexiglas</td><td>Su misura&nbsp;</td><td>N/A</td><td>Arena in plexiglas di 45 cm x 50 cm x 25 cm divisa in due camere da una parete centrale di 37 cm x 25 cm.</td></tr></tbody></table>

un test delle preferenze olfattive per misurare i pregiudizi edonistici olfattivi in modelli murini di depressione

An Olfactory Preference Test for Measuring Olfactory Hedonic Biases in Mouse Models of Depression

Per verificare che i topi depressivi presentino un bias olfattivo negativo14,29 e che possa essere misurato in modo affidabile utilizzando il protocollo del test di preferenza olfattiva che descriviamo qui, abbiamo valutato la risposta edonica a diversi odori in due distinti modelli murini di depressione.
In primo luogo, abbiamo utilizzato un modello murino di stress cronico lieve imprevedibile (UCMS) della durata di 4 settimane adattato da28 (vedi File supplementare 1 per il protocollo dettagliato) per indurre un fenotipo depressivo in giovani topi femmina C57BL/6JRj (Figura 2A, B). Queste femmine di topo sono state testate nel test di preferenza olfattiva con urina di topo maschio (MU, pura) come odore appetitoso e 2,4,5-trimetiltiazolo (TMT, 5% in olio minerale) come odore avverso. In media, ogni topo ha trascorso almeno 50 secondi sia nella zona di "controllo" che in quella di "odore" durante l'assuefazione, soddisfacendo il criterio (Figura 2C). Tuttavia, attraverso l'assuefazione, i topi UCMS hanno trascorso molto più tempo nella "zona di controllo" rispetto ai controlli, ma poiché non vi è alcuna differenza significativa per quanto riguarda la zona in cui verrà aggiunto l'odore, questa differenza può essere ignorata. Per quanto riguarda la distanza, i topi di controllo si sono mossi significativamente di più rispetto all'UCMS quando esposti a MU, ma non durante l'assuefazione o in presenza di TMT (Figura 2D). Infine, tutte le letture della risposta edonica (tempo trascorso nella zona dell'odore, numero di ingressi nella zona dell'odore e indice di preferenza) mostrano differenze significative o una tendenza statistica tra le femmine di controllo e UCMS (Figura 2E-G). Questo effetto è visibile anche attraverso l'indice globale di esplorazione degli odori, che è una misura combinata della risposta edonica e locomotoria (Figura 2H). Coerentemente, ogni lettura dimostra quindi un pregiudizio edonistico negativo in risposta a stimoli olfattivi sia appetitivi che avversivi. È interessante notare che il punteggio di emotività, che è calcolato come valore normalizzato del fenotipo ansioso e depressivo sulla base di un'ampia batteria di test comportamentali14, è correlato positivamente con l'indice di esplorazione degli odori sia di MU che di TMT (Figura 2I), mostrando una relazione tra la risposta comportamentale agli odori positivi e negativi e il fenotipo ansioso e depressivo.
In secondo luogo, questa volta abbiamo utilizzato lo stesso protocollo UCMS per indurre un fenotipo depressivo nei topi maschi. Durante il test delle preferenze olfattive, questi topi sono stati esposti all'urina di topo femmina (FU, pura), che è appetitiva, e al TMT come in precedenza, come odore negativo (Figura 3A, B). Non vi è alcuna differenza nel tempo trascorso nelle quattro zone durante l'assuefazione, né nella distanza percorsa attraverso il test (Figura 3C, D). Il tempo trascorso nella zona dell'odore mostra una riduzione significativa dell'esplorazione di FU e TMT nell'UCMS rispetto ai controlli (Figura 3E). Inoltre, i topi UCMS entrano significativamente meno nella zona dell'odore, o tendono a farlo, e presentano un indice di preferenza significativamente ridotto sia per FU che per TMT (Figura 3F, G), confermando un bias olfattivo negativo in uno stato depressivo-simile. Allo stesso modo, l'indice di esplorazione degli odori mostra una risposta comportamentale negativa a FU e TMT dei topi UCMS rispetto ai controlli (Figura 3H), che tendono ad essere correlati positivamente con il punteggio di emotività degli animali (Figura 3I).
In un terzo esperimento, abbiamo fatto ricorso a un altro modello di depressione che si basa sulla somministrazione cronica di corticosterone (CORT) nell'acqua potabile di topi maschi C57BL/6NTac, mentre i topi di controllo ricevono solo la soluzione del veicolo (Veh) (10% 2-idrossipropil-beta-ciclodestrina) 27. Dopo quattro settimane di trattamento con CORT o Veh, i topi sono stati abituati per quattro giorni e poi esposti a un odore neutro (OCT: 2-trans ottenne, 1% in acqua), un odore positivo (PO: olio di arachidi) e un odore negativo (TMT: 2,4,5-trimetiltiazolo, 5% in olio minerale) (Figura 4A, B). Attraverso l'assuefazione, non c'erano differenze tra Veh e CORT (Figura 4C). Tuttavia, entrambi i gruppi hanno trascorso molto più tempo nella "zona degli odori" rispetto alla "zona di controllo". Non ci sono differenze per la distanza percorsa, ad eccezione dell'odore positivo (PO) per il quale i topi Veh si sono mossi più del CORT (Figura 4D). È importante sottolineare che, come per i topi UCMS, il tempo trascorso nella zona dell'odore è stato significativamente ridotto per i topi CORT quando esposti a un odore neutro e appetitoso (Figura 4E). La riduzione dell'esplorazione degli odori è visibile anche attraverso una riduzione significativa o una tendenza a un numero inferiore di ingressi nella zona degli odori (Figura 4F). In questo caso, le differenze tra i gruppi vengono rivelate a seconda della lettura analizzata, probabilmente a causa delle limitazioni legate al numero di animali utilizzati e di un potenziale effetto pavimento causato dal basso tempo di esplorazione osservato dopo l'esposizione al TMT. Nel complesso, l'indice di preferenza è significativamente più basso nei topi CORT per tutti gli stimoli olfattivi rispetto a Veh (Figura 4H). Infine, l'indice di esplorazione degli odori per tutti gli odori è significativamente correlato con il punteggio di emotività degli animali (Figura 4I), dimostrando ancora una volta che questo test di preferenza olfattiva è uno strumento adatto per valutare il bias emotivo negativo in diversi modelli murini di depressione.
Infine, possiamo escludere la possibilità che le differenze osservate possano essere causate da una riduzione dell'attività locomotoria, piuttosto che da pregiudizi emotivi. Infatti, la locomozione non differisce tra i gruppi durante l'assuefazione quando si valuta la distanza totale percorsa (Figura 2D, Figura 3D, Figura 4D). Inoltre, sulla base dell'analisi statistica, anche una riduzione generale del coinvolgimento dei compiti o un effetto novità non possono spiegare questi pregiudizi. Infatti, abbiamo riscontrato un effetto significativo del fattore odoroso nell'analisi dell'indice di preferenza, senza alcuna interazione significativa tra gruppi sperimentali e odori. Questi risultati dimostrano che i topi depressivi svolgono effettivamente il compito e che la loro ridotta esplorazione è specifica per ogni segnale olfattivo.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68391/68391fig1v2.jpg"> 
Figura 1: Schema generale della sequenza temporale e impostazione del test di preferenza olfattiva. I topi si abituano per la prima volta all'arena. Il primo giorno di assuefazione, i topi della stessa gabbia di stabulazione vengono messi insieme per ridurre la neofobia. Il giorno successivo, vengono inseriti individualmente nell'arena. Dopo l'assuefazione, un odore viene aggiunto a una delle camere. Gli odori neutri vengono testati preferenzialmente per primi, seguiti dagli odori positivi e infine dagli odori negativi. Per l'analisi, l'arena può essere divisa in quattro diverse zone. Creato con Biorender. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68391/68391fig1v2large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68391/68391fig2v2.jpg"> 
Figura 2: Bias olfattivo negativo in un modello murino femminile di depressione dell'UCMS. (A,B) Cronologia e gruppi sperimentali dello studio: I topi femmina di controllo e UCMS (Unpredictable Chronic Mild Stress) vengono testati nel Test di preferenza olfattiva con un odore positivo (MU: urina di topo maschio, pura) e negativo (TMT: 2,4,5-trimetiltiazolo, 5% in olio minerale). Creato con Biorender. (C) I topi UCMS hanno trascorso in media molto più tempo nella "zona di controllo" e meno tempo nella "zona dietro l'odore" rispetto ai controlli durante l'assuefazione (Gruppo: F(1, 12) = 74,03, p &lt; 0,0001; Zona: F(2,434, 29,21) = 7,688, p = 0,0012; Interazione: F(3, 36) = 5,148, p = 0,0046). (D) La distanza totale percorsa in UCMS quando esposta a MU, ma non per Habituation (Hab) e TMT (Gruppo: F(1, 12) = 4,664, p = 0,0518; Odore: F(1,871, 22,45) = 4,846, p = 0,0195; Interazione: F(2, 24) = 4,797, p = 0,0177). (E) I topi UCMS hanno trascorso molto meno tempo ad esplorare MU e TMT (Gruppo: F(1, 12) = 24,39, p = 0,0003; Odore: F(1, 12) = 59,69, p &lt; 0,0001; Interazione: F(1, 12) = 2,267, p = 0,1580). (F) I topi UCMS sono entrati meno della zona di odore o tendevano a (Gruppo: F(1, 12) = 9,279, p = 0,0102; Odore: F(1, 12) = 5,100, p = 0,0433; Interazione: F(1, 12) = 1,649, p = 0,2233). (G) L'indice di preferenza per MU e TMT è significativamente ridotto nei topi UCMS (Gruppo: F(1, 12) = 24,39, p = 0,0003; Odore: F(1, 12) = 59,69, p &lt; 0,0001; Interazione: F(1, 12) = 2,267, p = 0,1580). (H) L'indice di esplorazione degli odori per MU e TMT è significativamente ridotto nei topi UCMS (F(1, 12) = 14,71, p = 0,0024; Odore: F(1, 12) = 0, p &gt; 0,9999; Interazione: F(1, 12) = 0,02630, p = 0,8739). (I) L'indice di esplorazione degli odori per MU e TMT è entrambi correlati positivamente con il punteggio di emotività degli animali (MU: Pearson R2 = 0,4837, F(1,12) = 11,24, **p = 0,0058; TMT: Pearson R2 = 0,5340, F(1,12) = 13,75, **p = 0,0030). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68391/68391fig2v2large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68391/68391fig3v2.jpg"> 
Figura 3: Bias olfattivo negativo in un modello murino maschile di depressione UCMS. (A,B) Cronologia e gruppi sperimentali dello studio: i topi maschi di controllo e UCMS sono testati nel test di preferenza olfattiva con un odore positivo (FU: urina di topo femmina, pura) e negativo (TMT: 2,4,5-trimetiltiazolo, 5% in olio minerale). Creato con Biorender. (C) Non ci sono differenze in media nel tempo trascorso nelle diverse zone dell'arena attraverso l'abitudine (Gruppo: F(1, 13) = 3,921, p = 0,0693; Zoner = F(1,688, 21,94) = 34,57, p &lt; 0,0001; Interazione: F(3, 39) = 0,7385, p = 0,5355). (D) Non ci sono differenze nella distanza totale percorsa tra i controlli e l'UCMS (Gruppo: F(1, 13) = 2,313, p = 0,1522; Odore: F(1,722, 22,38) = 1,746, p = 0,1998; Interazione: F(2, 26) = 0,8806, p = 0,4266). (E) Il tempo trascorso ad esplorare la zona dell'odore con FU e TMT è significativamente ridotto nei topi UCMS (Gruppo: F(1, 13) = 6,808, p = 0,0216; Odore: F(1, 13) = 16,21, p = 0,0014; Interazione: F(1, 13) = 0,3304, p = 0,5753). (F) I topi UCMS sono entrati significativamente meno volte nella zona dell'odore per TMT e tendevano a farlo per FU (Gruppo: F(1, 13) = 6,572, p = 0,0236; Odore: F(1, 13) = 3,784, p = 0,0737; Interazione: F(1, 13) = 0,2145, p = 0,6509). (G) L'indice di preferenza dei topi UCMS è significativamente ridotto per FU e TMT (Gruppo: F(1,13 ) = 6,808, p = 0,0216; Odore: F(1, 13) = 16,21, p = 0,0014; Interazione: F(1, 13) = 0,3304, p = 0,5753); (H) L'indice di esplorazione degli odori dell'UCMS è significativamente ridotto per entrambi gli odori (Gruppo: F(1, 13) = 12,42, p = 0,0037; Odore: F(1, 13) = 0,002580, p = 0,9603; Interazione: F(1, 13) = 0,5804, p = 0,4598). (I) L'indice di esplorazione degli odori per FU e TMT tende ad essere correlato positivamente con il punteggio di emotività degli animali (FU: Pearson R2 = 0,2573, F(1, 13) = 4,504, p = 0,0536; TMT: Pearson R2 = 0,2266, F(1, 13) = 3,809, p = 0,0729). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68391/68391fig3v2large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68391/68391fig4v2.jpg"> 
Figura 4: Bias olfattivo negativo in un modello murino maschio CORT di depressione. (A,B) Cronologia e gruppi sperimentali dello studio: I topi maschi Veh e CORT sono testati nel test di preferenza olfattiva con un odore neutro (OCT: trans-2-ottale, 1% in acqua), positivo (PO: olio di arachidi, puro) e negativo (TMT: 2,4,5-trimetiltiazolo, 5% in olio minerale). Ai topi Veh e CORT vengono somministrati rispettivamente la soluzione Vehicle e Vehicle + Corticosterone durante l'intera durata dell'esperimento. Creato con Biorender. (C) Tempo medio trascorso nelle diverse zone dell'arena durante l'assuefazione (Gruppo: F(1, 10) = 0,07588, p = 0,7886; Zona: F(2,224, 22,24) = 6,939, p = 0,0036; Interazione: F(3, 30) = 0,7033, p = 0,5575). (D) Distanza totale percorsa durante la prova di assuefazione (Hab) e i diversi odori (Gruppo: F(1, 10) = 4,193, p = 0,0678; Odore: F(3, 30) = 11,80, p &lt; 0,0001; Interazione: F(3, 30) = 1,489, p = 0,2375). (E) I topi CORT trascorrono meno tempo nella zona dell'odore rispetto a Veh per OCT e PO (Gruppo: F(1, 10) = 5,094, p = 0,0476; Odore: F(2, 20) = 28,87, p &lt; 0,0001; Interazione: F(2, 20) = 3,841, p = 0,0388). (F) I topi CORT entrano meno volte nella zona dell'odore o tendeva rispetto a Veh (Gruppo: F(1, 10) = 6,832, p = 0,0259; Odore: F(2, 20) = 2,738, p = 0,0889; Interazione: F(2, 20) = 0,2902, p = 0,7512). (G) I qmice CORT mostrano un indice di preferenza più basso per OCT e PO (Gruppo: F(1, 10) = 5,895, p = 0,0356; Odore: F(2, 20) = 20,83, p &lt; 0,0001; Interazione: F(2, 20) = 1,437, p = 0,2611). (H) L'indice di esplorazione degli odori è significativamente ridotto nei topi UCMS per tutti gli odori (Gruppo: F(1, 10) = 12,35, p = 0,0056; Odore: F(2, 20) = 0,04381, p = 0,9572; Interazione: F(2, 20) = 0,3622, p = 0,7006). (I) L'indice di esplorazione degli odori per ciascun odore è correlato positivamente con il punteggio di emotività degli animali (OCT: Pearson R2 = 0,5601, F(1, 10) = 12,73, **p = 0,0051; PO: Pearson R2 = 0,4495, F(1, 10) = 8,165, *p = 0,0170; TMT: Pearson R2 = 0,5061, F(1, 10) = 10,25, **p = 0,0095). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68391/68391fig4v2large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Nome</td>
			<td>Abbreviazione</td>
			<td>Diluizione</td>
			<td>Valenza</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2,4,5-trimetiltiazolo</td>
			<td>Catalogo TMT</td>
			<td>5% in olio minerale</td>
			<td>Negativo</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-trans-ottenali</td>
			<td>OTTOBRE</td>
			<td>1% in acqua</td>
			<td>Neutrale</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Urina di topo femmina</td>
			<td>FU</td>
			<td>Puro</td>
			<td>Positivo</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Urina di topo maschio</td>
			<td>MU</td>
			<td>Puro</td>
			<td>Positivo</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Olio di arachidi</td>
			<td>PO</td>
			<td>Puro</td>
			<td>Positivo</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
Tabella 1: Esempi di odori con valenza neutra, positiva e negativa.
File supplementare 1: Protocollo per lo stress cronico lieve imprevedibile di 4 settimane. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68391/Supplementary%20File%201.docx" target="_blank">Fare clic qui per scaricare questo file.</a>

Un test delle preferenze olfattive per misurare i pregiudizi edonistici olfattivi in modelli murini di depressione

Depression is the single largest contributor to disability worldwide, affecting 280 million people annually. Beyond reduced activity and motivation, ...

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Fondamentali, le proprietà ancora unica del sistema olfattivo dei roditori hanno portato al suo studio in aumento tra i biologi. Una valutazione relativamente semplice della sua funzione è poi anche necessario. Qui si descrive test sensibili per la caratterizzazione della sensibilità del mouse olfattivo e preferenza.

Olfattivo test comportamentali nel topo adulto

La compromissione della funzione olfattiva è una caratteristica comune in molte malattie neurodegenerative tra cui il Parkinson, l'Alzheimer e le malattie di Huntington. Nel presente articolo, descriviamo una serie di test per valutare la discriminazione e il rilevamento dell'olfatto nei topi che possono essere utilizzati per misurare le capacità olfattive in modelli murini di malattie neurodegenerative.

Saggi olfattive per modelli murini di malattia di Neurodegenerative

Questo manoscritto descrive un protocollo per esaminare il sistema olfattivo dei roditori. Il test di assuefazione/disassuefazione olfattiva consentirà agli investigatori di determinare se un topo si abitua a un odore presentato ripetutamente e se il topo dimostra disassuefazione quando gli viene presentato un nuovo odore.

Test per Odore Discriminazione e assuefazione nei topi

Presentiamo un test olfattivo semplice e imparziale nei topi. Con questo protocollo la discriminazione olfattiva, la preferenza, l'evitamento e la sensibilità a un nuovo odore rispetto all'acqua possono essere valutati in singole sessioni comportamentali. Questo metodo è indicato per un singolo sperimentatore e l'analisi si basa sull'elaborazione video assistita da computer.

Semplice e assistita da computer Olfattivo Test per Mice

Questa carta presenta un protocollo per l'indagine sociale trasmissione di preferenza dell'alimento nei topi. I vantaggi e le possibili applicazioni per questa procedura, per esempio, nel rilevare i cambiamenti in anticipo in modelli murini di annuncio, sono evidenziate. Per concludere, interpretazione dei risultati alla luce dettagli critici sono discussi.

Valutazione di trasmissione sociale dei comportamenti di preferenze alimentari

Qui, ci alleniamo topi su un compito di apprendimento associativo per testare la discriminazione di odore. Questo protocollo consente inoltre di studi sui cambiamenti strutturali indotti su apprendimento nel cervello.

Una prova oggettiva e riproducibile di apprendimento olfattivo e discriminazione nei topi

Il modello murino di disperazione cronica (CDM) della depressione consiste in sessioni di nuoto forzate ripetitive e un'altra fase di nuoto ritardata come lettura. Rappresenta un modello idoneo per l'induzione di uno stato depressivo cronico stabile per almeno 4 settimane, modificabile per valutare interventi di trattamento subcronico e acuto.

Modelli animali di depressione - Modello di disperazione cronica (CDM)

Questo articolo fornisce una descrizione dettagliata di un nuovo protocollo di bias di giudizio del topo. Vengono anche dimostrate le prove della sensibilità di questo compito di scavo olfattivo allo stato affettivo e viene discussa la sua utilità in diversi campi di ricerca.

Valutazione del pregiudizio del giudizio del topo attraverso un'attività di scavo olfattivo

Sistemi olfattivi degli insetti offrono opportunità uniche per la registrazione di odorizzante-indotto risposte nelle forme di electroantennograms (EAG) e le registrazioni sensillum singolo (SSR), che vengono sommati risposte da tutti i neuroni olfattivi (ORNs) situato sulla antenna e da quelli alloggiati in singole sensilli, rispettivamente.

Le misurazioni elettrofisiologiche da un sistema olfattivo Moth

Fotolisi di composti in gabbia permette la produzione di un rapido aumento e localizzato della concentrazione di vari composti fisiologicamente attivi. Qui mostriamo come ottenere patch-clamp registrazioni combinate con fotolisi di cAMP in gabbia o in gabbia Ca per lo studio della trasduzione olfattiva in dissociato topo neuroni sensoriali olfattivi.

Fotolisi lampo di composti Caged nel Cilia di neuroni sensoriali olfattivi

Scopri un test delle preferenze olfattive per valutare i pregiudizi edonistici nei modelli murini di depressione. Questo metodo consente di analizzare i meccanismi neurali alla base dei disturbi depressivi.

Un test delle preferenze olfattive per misurare i pregiudizi edonistici olfattivi in modelli murini di depressione

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