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Basic Methods in Cellular and Molecular Biology

PCR Steps and Reaction Setup

Description

PCR uses thermocycling to make many copies of DNA. Thermocycling means repeating cycles of temperature changes at fixed time intervals. With a thermostable DNA polymerase and DNA building blocks called dNTPs, the reaction can produce numerous copies from a small DNA sample.

The PCR cycle has thre...

Transcript

ポリメラーゼ連鎖反応、又はPCRは、DNA断片を増幅するための手法であり広く利用されています。PCR法は、加熱と冷却の温度変化を利用し、熱変性、アニーリング、伸長反応の3つのステップを繰り返し反応させます。

温度変化による反応は、PCR試薬をサーモサイクラーという装置にセットすれば開始できます。この装置にはあらかじめ反応のための至適温度をプログラムできます。

PCRサイクルの最初のステップは変性です。20から30秒、95℃で加熱することにより熱変性させます。DNAの融解温度ではDNAの半数が二重らせん、半数が一本鎖ランダムコイルの状態で存在します。変性温度は融解温度...

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