の浸透圧の回避線虫（Caenorhabditis elegans）：二つの遺伝子のシナプス機能、ヒトのオルソログ NRXN1と NLGN1、

こんにちは、私の名前はここスペインのコルドバ大学の遺伝学部のマヌエル・ルイス・ルビオです。私たちは、自閉症の研究では、実験ツールとしてエレガンスを使用しています、 世界は3つのエレガンスの神経系を特徴付けました。私たちは、自閉症に関連する神経シナプスに関与する遺伝子に有効な線虫の変異体を研究しています。

Rein Regansは、シナプスに存在する膜接着分子です。C Eleganceの頭部は、浸透圧の強さを含む異なった刺激への仲介の応答が付いている線虫の感覚器官であるamfiを含んでいる。Amfiは、高さが関連し、1つのINAP末端作用を持つ12の感覚bipoニューロンでできています。

これらのニューロンのうちの2つ、Name A SH、左右は、浸透圧感覚機能において特に重要です。高い浸透強度を持つ水溶性リバランスを検出します。こんにちは、アンスのシナプス欠損変異体における浸透圧回避を測定するための空の方法を備えたナン川ワイン。

ニューロおよびニューロ高浸透圧強度回避の影響を評価するために、4モルフルクトース溶液に基づく方法を使用して、ニューロニューラル遺伝子に欠損した変異体に対するCの異なる応答を報告しました。言うのを呼ぶ、コンゴレッドの1%とフルクトースの4モル原液を準備し、室温で完全に溶解します。NGMプレート上の直径1cmの環状リングは、固体媒体の中心に細い線があります。

15マイクロリットルの赤い4モルフルクトース溶液を使用。フルクトースをエーカーに約5分間浸し、実験を盲目的に行う必要があります。各株がS8であるプレートは、2人目の実験者がラベル付けする必要があります。

SAは、求められていないこれらのマークを使用して実行されます。販売実施の約24時間前に実験が終了した場合、各遺伝子型のL個の幼虫を摘み取り、大腸菌菌が入ったAFL NGMプレートに移し、翌日20°Cに維持する必要があります。実験は若年成人から始めるべきです。

各系統の個々の線虫を静止円の中に入れ、チックバリアに対する反応のタイミングまで各動物を追跡します。決定的な結果を得るためには、各系統の10匹の動物と最低3つのレプリカ実験を実施する必要があります。赤いリングを6回連続で避けているものは、正常に分類されます。

6回未満の試みでリングを出るものは、浸透感度制御株で欠陥があると見なされ、各SAブリストルで使用する必要があり、2匹の動物は、リングバリアを避けるため、ポジティブコントロールとして使用されます。制御株 彼らが4モルフルクトースからなる浸透圧障壁を見つけると、後方に反応します。神経欠損ミュータント爆弾は、1つのタイプの強さに関してこれらと同様の動作をします。

しかし、NEUR欠損変異体はこの浸透圧バリアを検出できませんでした。異なるative neurおよびnout対立遺伝子における二重変異体強度車は、標的遺伝子に対応するフラグメントを含むL44 40ベクターで形質転換された5つの株をRNA干渉供給によりダウンワームのダウンワームを得るための浸透強度に応答する野生型表現型を回収した。細菌は、翌日、LBAまたは炭酸プレート上に分離されます。

バクテリアのコロニーを選び、LV液体培地を接種します。37度で揺れながら約7時間成長します。この培養物を炭酸天井のNGMプレートに滴下し、室温で一晩中IPTGとwaiを行い、細菌が増殖し、標的遺伝子のフラグメントの発現誘導を開始する様子をご覧ください。

RNA干渉には、正と負のコントロールを使用する必要があります。給餌実験。ネガティブコントロールは等しいです。

I HT 11 5株をTL44 40ベクターで変換。ポジティブコントロールは、22遺伝子配列を含むL 44 40ベクターで形質転換されたELI HT 11 5細胞です。この遺伝子のロックダウンは、無菌顕微鏡下で容易に区別できる表現型を揺さぶっています。

初日。NGM PLAの4段式のバクテリア入りのものは、バクテリアと一緒にプレート上に移され、クウェートは摂氏20度で12時間移動します。これは断食期間です。

翌日、速い若年成人を、特定のRNA干渉標的遺伝子を発現する細菌を接種したプレートに移します。F1の子孫を得るために、摂氏20度で約48時間放置します。次に、次の2日間で同じ細菌を接種した別のプレートにいくつかのF1成体爆弾を選びます。

表現型ブリストルNの2つの野生型株の脂肪と細菌の共感が発生するF 2子孫のスコアリングから若年成人を選択して分離します。L44 40ベクトルは、問題ないときは後退していました。浸透圧バリア。

ブリストルと真白色の株は、エレガンスから神経遺伝子の断片を発現する細菌を供給され、つま先を検出することができませんでした。しかし、浸透圧バリアを検出できなかった神経欠損変異体は、海のエレガンスからネネ遺伝子の断片を発現する細菌を供給されたときにこの能力を回復しました。このビデオでは、シーエレガンスにおける浸透圧回避応答に影響を与える遺伝子の影響を研究することができる簡単な方法を紹介します。

コンゴレッドとフォーマルタイトなフルクトースのリングは、浸透圧強度に対する爆弾の応答を分析するために使用されます。欠損変異体の神経学は、この応答に欠陥がありますが、NU変異体は野生型株と同様の応答を示すトモストレスを検出するために障害されていません。このビデオは、ing遺伝子と放出遺伝子で異なるtiveノックアウト対立遺伝子を保有する二重変異株が、浸透圧強度に応答する野生型の表現型を回復したことを示しています。

これらの観察結果は、RNA干渉、フィードロックダウンアプローチを使用して確認されました。このように、野生型株は、ING遺伝子の配列に従って発現する細菌を給餌すると、浸透圧バリアの認識が損なわれました。一方、さらに4つの果糖溶液を検出できない神経欠損変異体は、NNU遺伝子の配列に従って発現する細菌を供給されたときにこの挙動を回復しました。

この実験で示された結果は、nが見えることとneurが線虫のセンサーニューロンのシナプス結合に関与している可能性があること、また、それらがシナプス機能に影響を与える方法で互いに相互作用することを示しています。さて、さようなら、そしてあなたの実験に幸運を祈ります。