Name: の浸透圧の回避線虫（Caenorhabditis elegans）：二つの遺伝子のシナプス機能、ヒトのオルソログ NRXN1と NLGN1、 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-12-11T16:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 20 s
Description: 学ぶニューロリギンとニューレキシンのシナプス機能をCaenorhabditis elegansで。浸透圧回避行動を用いた遺伝子相互作用の解析により、自閉症関連タンパク質の補償メカニズムを解明する方法です。

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

我々は彼の貴重な支援に感謝博士アントニオミランダ- Vizueteしたいと思います。我々はまた、貴重な技術支援のためにサルマBoulayouneとイザベルキャバに私たちの感謝の意を表したいと。この作品は、アンダルシア州政府（BIO - 272）からの助成金によって賄われた。この研究は、ヨーロッパでは遺伝子実験を規制する現行の法律との合意で行われている。

1：浸透回避アッセイ。 <ol><li>約16-24時間アッセイの前に、OP50 E.を含む新鮮なNGMプレートに各遺伝子型のL4幼虫期の動物を選ぶ大腸菌は、20℃で、それをandincubate翌日、若年成人での実験を開始します。 </li><li>それは、アッセイ"盲目的に"行うことをお勧めします。アッセイすべき各菌株でプレートを実験が終了したときにマスク解除されるrelabelledプレートを用いてアッセイを行うこと、第二実験者によってrelabelledされるべきである。 </li><li>検定の日、1％コンゴーレッド溶液とフルクトースの4Mストック溶液を調製し、室温で完全に溶解する。色素が時間と共に沈殿する可能性があるため私たちは、各アッセイの前に解決策を確認することをお勧めします。 </li><li> NGMプレート上に環状のリング（直径1cm）が赤4Mのフルクトースの溶液15μlを、固体培地の中心に概説されています。フルクトース溶液は寒天に浸透させ、これは通常、2〜5分かかります。 </li><li>リング内の各菌株の個々の若年成人の動物を配置し、浸透障害への応答を決定するために次の10分をオーバー従ってください。行の6倍以上のリングを回避する動物は、通常のように分類され、以下の6回でリングを終了するものは、浸透圧感受性に欠陥とみなされます。 注 ：コントロール株がそれぞれのアッセイで使用されている必要があります。彼らは断固としてリングの障壁を避けるようにN2若い成人の動物は、ポジティブコントロールとして使用されています。以前に、飢えDauer幼虫を通過または乾燥しすぎているプレートから来ているされている動物は使用しないでください。冒頭で、対照動物は、アッセイプレートと解決策が正しいことを確認するために、重複して評価されるべきである。 </li></ol> 2：RNAiの給餌によるノックダウンのワームの発生。 <ol><li> RNAiのプレート：NGM RNAiの餌皿は、リットル当たりが含まれています：17 gの寒天、2,5グラムペプトン、3.0グラムのNaCl、5 mgのml -1のコレステロールを1mlのH 2 Oおよびオートクレーブで1リットルフラスコを埋める。寒天は、約65に冷却した後° C、1 M KPO 4、pH6.0で、1 M CaCl 2を 、1M MgSO 4を 、0,5 mlカルベニシリン（50 mgをml -1）を、1を1 ml 1 mlの25 mlを追加するミリリットル1M IPTG。準備された固体NGMで開始している場合は、電子レンジで固形培地を溶融し、その後冷却してから、以前に示されているKPO 4、pH6.0で、のCaCl 2、MgSO 4を 、カルベニシリンおよびIPTGを追加するには、ベンチに液体NGMを置きます。 それぞれ60ミリメートルシャーレにNGMの10mlを追加します。冷却を可能にし、使用前に室温で一晩、それらを維持するプレートを反転させる。プレートは、約4〜5日間4℃でビニール袋に格納することができます。 </li><li>細菌の準備と誘導：ルリア-ベルターニ（LB）寒天プレート（17 gの寒天、10gトリプトン、5gの上に、標的遺伝子に対応する断片を含むL4440ベクターで形質転換大腸菌 HT115（DE3）株のコロニーを、分離酵母エキス、1リットル当たり10グラムのNaCl）アンピシリン（50μg/ mlの）とテトラサイクリン（15μg/ ml）を含む。 細菌のコロニーをピックアップし、50μg/ mlのアンピシリンを含むLBに接種し、37℃で振盪しながら6〜8時間のために栽培℃、準備NGMプレート上にシードこの文化のドロップをし、一晩インキュベートされる前に徹底的にプレートを乾燥させる（細菌が成長すると誘導を開始できるように室温で12 24時間）。テトラサイクリンは光に敏感であり、それはプレート間でのRNAiアッセイの変動性に影響を与える可能性があるため、インキュベーションは暗闇の中だった。 それは正とRNAiの給餌実験のネガティブコントロールを使用する必要があります。陽性対照は、UNC - 22遺伝子の配列を含むL4440ベクターで形質転換された大腸菌 HT115セルです。 UNC - 22遺伝子のノックダウンは、"けいれん表現型"を生成します。ネガティブコントロールは、空のL4440ベクターで形質転換した大腸菌 HT115セルです。 </li><li>ワームの取り扱いとスコアリング：初日、20℃細菌とインキュベートすることなく、NGMプレート上にOP50を接種したNGMプレートから場所L4段階のワーム℃で12時間（空腹時）。 次の日、特定の標的遺伝子のRNAiを発現している細菌でseeddedプレートの上に若い絶食大人の雌雄同体を転送する。 F1子孫を生成するために20℃40〜48時間° Cにしておきます。 その後、同じ細菌を接種した別のプレートの上にいくつかのF1の成虫を置きます。 24〜48時間後、選択してF2子孫、若年成人（少数の卵に完全に形成された突出外陰部）と表現型のスコアから隔離する。 注：。神経細胞におけるRNAiの誘導が原因C elegansの神経系の耐火特性のRNAiにいくつかの制限があります。ニューロンにおけるこの非効率性の問題を克服するためには、RRF - 3株、ニューロン10のRNAiの影響に過敏な背景を使用することをお勧めします。我々の実験がないdifferencでESは遺伝子のためにブリストルN2とRRF - 3株の間に発見し、表現型が分析された。 </li></ol> 3：使用される菌株。 C.本研究で使用した線虫株を表1に示す。変異株は、N2野生に対して外交配- タイプの少なくとも4倍、突然変異誘発のプロトコル中に生成されている可能性が不要なランダムな突然変異を削除する。 。。OP50 E coli株は、プラスミドNRX - 1を運ぶpL4440（JA：C29A12.5）と線虫遺伝子センター、ミネソタ大学、米国大腸菌 HT115（DE3）でsuppliiedしたとNLG - 1（JA：C40C9.5 ）遺伝子断片は、ピーターAskjaer、セントロアンダルシアデBiologíaデル開発省（CABD）、CSIC大学パブロオラビデ、セビリア、スペインで提供されていました。 4：代表的な結果。 例示的な結果は図1と図2で表されます。各菌株三レプリカ実験の最低の10匹を行った。 <img alt="図1" src="/files/ftp_upload/1616/1616Fig1.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="図1"> 図1。浸透回避行動の実験。 対照株とNRX - 1 V欠損mutantwormsは、彼らが浸透バリア（4Mフルクトース）を発生したときに逆方向に反転することで対応（ok1649とtm1961）。NLG - 1（ok259とtm474）X変異体はこのバリアーを検出に失敗する。 NLG - 1とNRX - 1の欠損二重変異体は、菌株CRR21（ok1649、ok259）VXとCRR23（tm1961、ok259）VXは、野生型の表現型を回復した。 *は、t -学生の試験によるブリストルN2野生型に各菌株の応答では、T -生徒のテストで有意差（P≤0.001）を示しています<img alt="図2" src="/files/ftp_upload/1616/1616Fig2.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="図2"> 図2。 RNAiの給餌によるノックダウンのワームを用いた実験。 大腸菌 HT115（DE3）空のpL4440ベクターで形質転換または標的遺伝子NRX - 1またはNLG - 1に対応するフラグメントを含むが飼育異なるワームの菌株に使用されていました。 *は、空のpL4440ベクトルが供給N2株と比較して、NLG - 1遺伝子を標的断片でpL4440ベクターを保持する細菌が供給N2株の応答では、T -生徒のテストで有意差（P≤0.001）を示しています。

<ol><li>Sudhof, T. C. Nature. 455 (7215), 903-903 (2008).</li>
<li>Fabrichny, I. P., Leone, P., Sulzenbacher, G. Neuron. 56 (6), 979-979 (2007).</li>
<li>Garber, K. Science. 317 (5835), 190-190 (2007).</li>
<li>Wang, K., Zhang, H., Ma, D. Nature. 459 (7246), 528-528 (2009).</li>
<li>Ward, S., Thomson, N., White, J. G. The Journal of comparative neurology. 160 (3), 313-313 (1975).</li>
<li>Bargmann, C. I., Thomas, J. H., Horvitz, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cold+Spring+Harbor+symposia+on+quantitative+biology%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Cold Spring Harbor symposia on quantitative biology.</a> 55, 529-529 (1990).</li>
<li>White, J. G., Southgate, E., Thomsom, J. N., Brenner, S. Philos. Trans. R. Soc. Lond. B Biol. Sci. 314, 1-1 (1986).</li>
<li>Culotti, J. G., Russell, R. L. Genetics. 90 (2), 243-243 (1978).</li>
<li>Fire, A., Xu, S., Montgomery, M. K. Nature. 391 (6669), 806-806 (1998).</li>
<li>Timmons, L., Fire, A. Nature. 395 (6705), 854-854 (1998).</li>
<li>Simmer, F., Tijsterman, M., Parrish, S., Koushika, S. P., Nonet, M. L., Fire, A., Ahringer, J., Plasterk, R. H. Curr Biol. 12, 1317-1317 (2002).</li>
<li>Missler, M., Zhang, W., Rohlmann, A. Nature. 423 (6943), 939-939 (2003).</li>
<li>Varoqueaux, F., Aramuni, G., Rawson, R. L. Neuron. 51 (6), 741-741 (2006).</li>
<li>Graf, E. R., Zhang, X., Jin, S. X., Scheiffele, P., Fan, J., Choih, J. Cell. 119 (7), 1013-1013 (2004).</li>
<li>Scheiffele, P., Fan, J., Choih, J. Cell. 101 (6), 657-657 (2000).</li>
<li>Jamain, S., Quach, H., Betancur, C. Nature genetics. 34 (1), 27-27 (2003).</li>
<li>Szatmari, P., Paterson, A. D., Zwaigenbaum , L. Nature genetics. 39 (3), 319-319 (2007).</li>
</ol>

Neurexinsとneuroliginsはシナプス伝達11とシナプス結合12の分化に重要な役割を行う。両分子は、自閉症13,14のための候補遺伝子として同定されている。 このビデオでは、私たちはCの浸透回避反応に影響を及ぼす遺伝子の影響を研究することができるシンプルな方法を示してエレガンス 。ニューロリギン欠損変異体では、浸透力を検出することで欠陥のあるものであるがニューレキシンの欠損変異体は、4Mフルクトースのソリューションを避け、野生型株と同様の応答を示しています。しかし、フルクトースソリューションを検出することができないニューロリギン変異体は、ニューレキシン遺伝子でも欠乏しているとき、彼らは、浸透力に応答して野生型の表現型を回復する。 この観察は、RNAiの送りノックダウンのアプローチを用いて確認した。このように、野生型の菌株は、それがNLG - 1遺伝子のコーディング配列を発現細...

表1。C.虫系統。 <table border="1" cellspacing="0" cellpadding="0"><tbody><tr><td> ひずみ </td><td> 遺伝子 </td><td> 対立遺伝子 </td><td> 元 </td></tr><tr><td>ブリストルN2 </td><td> - </td><td> - </td><td> aCGC </td></tr><tr><td> VC228 </td><td> NLG - 1 </td><td> ok259 </td><td> CGC </td></tr><tr><td> FX00474 </td><td> NLG - 1 </td><td> tm474 </td><td> bNBP - 日本</td></tr><tr><td> VC1416 </td><td> NRX - 1 </td><td> ok1649 </td><td> CGC </td></tr><tr><td> FX1961 </td><td> NRX - 1 </td><td> tm1961 </td><td> NBP -ジャパン</td></tr><tr><td> NL2099 </td><td> RRF - 3 </td><td> pk1436 </td><td> CGC </td></tr><tr><td> CRR21 </td><td> NRX - 1、NLG - 1 </td><td> ok1649; ok259 </td><td>この作業</td></tr><tr><td> CRR22 </td><td> NRX - 1、NLG - 1 </td><td> tm1961; ok259 </td><td>この作業</td></tr></tbody></table> A. 線虫遺伝子センター、ミネソタ大学、米国。 B.実験動物&quot;線虫C. elegans&quot;のためのナショナルバイオリソースプロジェクト。東京女子医大、 日本。

の浸透圧の回避線虫（caenorhabditis elegans）：二つの遺伝子のシナプス機能、ヒトのオルソログ nrxn1と nlgn1</em自閉症の候補として>、

Osmotic Avoidance in Caenorhabditis elegans: Synaptic Function of Two Genes, Orthologues of Human NRXN1 and NLGN1, as Candidates for Autism

Neurexinsとneuroliginsは、興奮性と抑制性シナプスに存在する細胞接着分子であり、それらは正しいニューロンのネットワーク機能1に必要です。これらのタンパク質は、シナプス前及びシナプス後膜2で見られる。マウスの研究では、neurexinsとneurologinsがシナプス伝達1の本質的な役割を持っていることを示している。最近の報告では、人間の神経系の開発中に変更された神経細胞の接続は、自閉症スペクトラム障害3の多数の例病因の基礎を構成することができることが示されている。 線虫（Caenorhabditis elegans）があるため実験室での実験のためのそのシンプルさ、シナプス成分の機能の研究を促進するために実験的なツールとして使用し、その神経系、シナプスの配線が完全に特徴付けされていることを与えることができます。 Cで。 エレガンスNRX - 1とNLG - 1遺伝子は、それぞれα-ニューレキシン- 1、ニューロリギン- 1タンパク質を、エンコード人間NRXN1とNLGN1遺伝子にオルソロガスです。ヒトと線虫では、neurexinsとneuroliginsの組織は、機能ドメインの点で似ています。 線虫の頭部はamphid、浸透力を含め様々な刺激に応答を媒介する線虫の感覚器官が含まれています。 amphidは繊毛状突起一シナプス前終末軸索4の12の感覚バイポーラの神経細胞で作られています。 ASHRとASHLという名前のこれらのニューロンの二つは、高い浸透力5で水溶性の忌避剤を検出し、浸透圧感覚機能に特に重要です。これら2つのニューロンの樹状突起は、口の先端に長くし、軸索は、彼らが行動反応6を決定する他のニューロンとのシナプス結合を作る神経リング、に拡張します。 高い浸透力の回避にニューレキシンとニューロリギンの影響を評価するために、我々は、4Mフルクトースリング7に基づいてメソッドを使って、NRX - 1とNLG - 1遺伝子に欠陥のある線虫変異株の異なる応答を示しています。行動の表現型が特異的RNAiのクローン8を用いて確認された。 C.で虫は 、RNAiを引き起こすために必要なdsRNAは、9を供給することにより投与することができます。食品を介してdsRNAの配信は、このように遺伝的要素とのネットワーク経路の同定を可能にする目的の遺伝子のRNAiの干渉を誘導する。

Neurexinsとneuroliginsはシナプス分化と伝達に重要な役割を実行する膜ニューロンの接着タンパク質です。のニューロリギン欠損変異体<em&gt; C.エレガンス</em&gt;浸透圧強度を検出するのに欠陥がある、しかし彼らはまた、ニューレキシンをコードする遺伝子に変異が含まれている場合、彼らは野生型の表現型を回復する。

の浸透圧の回避線虫（Caenorhabditis elegans）：二つの遺伝子のシナプス機能、ヒトのオルソログ NRXN1と NLGN1</em自閉症の候補として>、

ニューレキシンとニューロリギンは、興奮性および抑制性シナプスに存在する細胞接着分子であり、神経ネットワークが正しく機能するために不可欠である。これらのタンパク質は、シナプス前膜およびシナプス後膜に見出される。マウスを用いた研究では、ニューレキシンとニューロリギンがシナプス伝達において重要な役割を果たすことが示されている。近年の報告によれば、ヒトの神経系発達期における神経接続の変化が、多くの自閉スペクトラム症の病因となる可能性が示唆されている。Caenorhabditis elegans（C. elegans）は、実験室での操作が簡便であること、およびその神経系とシナプス配線が完全に解明されていることから、シナプス構成要素の機能研究を促進するための実験ツールとして利用可能である。C. elegansのnrx-1およびnlg-1遺伝子は、それぞれα-ニューレキシン-1およびニューロリギン-1タンパク質をコードするヒトのNRXN1およびNLGN1遺伝子のオーソログである。ヒトと線虫において、ニューレキシンとニューロリギンの機能ドメインの構成は類似している。線虫の頭部には、浸透圧強度を含むさまざまな刺激への反応を媒介する感覚器であるアンフィドが存在する。アンフィドは、繊毛樹状突起を持つ12個の感覚双極ニューロンと、1つのシナプス前終末軸索で構成されている。これらのニューロンのうち、ASHRおよびASHLと命名された2つのニューロンは浸透圧感覚機能において特に重要であり、高浸透圧の水溶性忌避物質を検知する。これら2つのニューロンの樹状突起は口の先端まで伸び、軸索は神経環まで伸びて他のニューロンとシナプス接続を形成し、それによって行動反応が決定される。高浸透圧回避におけるニューレキシンとニューロリギンの関与を評価するため、4Mフルクトース環を用いた手法を用い、nrx-1およびnlg-1遺伝子に欠損を持つC. elegans変異体の異なる反応を示す。行動表現型は、特異的なRNAiクローンを用いて確認された。C. elegansにおいて、RNAiを誘発するために必要なdsRNAは、餌として投与することができる。餌を介したdsRNAの導入は、標的遺伝子のRNAi干渉を誘導し、これにより遺伝的構成要素およびネットワーク経路の同定が可能となる。

こんにちは、スペインのコルドバ大学遺伝学部のマヌエル・ルイス・ルビオです。私たちは、完全に解明されているC. elegansの神経系を利用し、自閉症の研究における実験ツールとしてC. elegansを用いています。私たちは、神経シナプスに関与し、自閉症との関連が指摘されている遺伝子に欠損を持つ線虫の変異体を研究しています。Neurexinおよびneuroliginは、シナプスに存在する膜接着分子です。C. elegansの頭部には、浸透圧などのさまざまな刺激に対する応答を媒介する線虫の感覚器官であるamphidが存在します。amphidは、繊毛を持つ樹状突起を備えた12個の感覚双極ニューロンと、1つのシナプス前終末軸索で構成されています。これらのニューロンのうち、ASHRおよびASHLと呼ばれる2つのニューロンは、浸透圧感覚機能において特に重要であり、高浸透圧の水溶性忌避物質を検知します。本ビデオでは、C. elegansのシナプス欠損変異体における浸透圧忌避行動を測定するための、4Mフルクトースリング法に基づいた手法を紹介します。高浸透圧回避におけるneurexinおよびneuroliginの関与を評価するため、4Mフルクトース溶液を用いた手法により、nrx-1およびnlg-1遺伝子に欠損を持つC. elegans変異体の異なる反応を報告しました。実験当日に、1%コンゴレッドを含む4Mフルクトースストック溶液を調製し、室温で完全に溶解させます。NGMプレート上の固体培地の中心に、直径1cmの環状に塗布します。15 µLの赤色4Mフルクトース溶液を使用します。フルクトースをアガロースに約5分間浸透させてください。この実験はブラインド法で実施する必要があります。試験される各系統を含むプレートは、別の実験者がラベル付けを行ってください。SAは、これらの標識を用いて実施されます。実験の約24時間前に、各遺伝子型のL4幼虫をピックアップし、E. coli菌を含むNGMプレートに転移させ、翌日まで20 °Cで保持する必要があります。実験は若い成体を用いて開始してください。各系統の個々の虫を静止円の中に入れ、それぞれの個体がticバリアに対して反応する時間を計測します。結論を得るためには、各系統につき10匹の個体を用い、最低3回の繰り返し実験を行う必要があります。赤色のリングを6回連続で回避した個体を正常と分類します。6回未満の試行でリングから脱出した個体は、浸透圧感受性に欠損があるとみなされます。各SA Bristolのコントロール系統を使用し、リングの障壁を回避するため、2匹の個体をポジティブコントロールとして使用します。コントロール系統は、4Mフルクトースからなる浸透圧障壁に遭遇すると後退して反応します。神経欠損変異体は、浸透圧強度に関してこれらと同様の挙動を示します。しかし、NEUR欠損変異体はこの浸透圧障壁を検知できませんでした。異なる活性ニューロンおよびノックアウトアレルを持つ二重変異体は、浸透圧に反応する野生型表現型を回復しました。RNA干渉摂食により虫をダウンさせるために、標的遺伝子に対応する断片を含むL 44 40ベクターで形質転換されたe coli HD 11五株の大腸菌コロニーを単離します。細菌はLBAまたは炭酸塩プレート上に単離し、翌日に回収します。細菌のコロニーを1つ選び、LV液体培地に接種します。37°Cで振盪しながら約7時間培養します。この培養液を、カーボン封鎖およびIPTGを含むNGMプレートに滴下し、室温で一晩静置して細菌を増殖させ、標的遺伝子断片の発現誘導を開始させます。RNA干渉には、陽性対照および非陽性対照を用いる必要があります。摂食実験において、陰性対照は同一です。TL 44 40ベクターで形質転換したHT 115株を用いました。陽性対照として、22遺伝子配列を含むL 44 40ベクターで形質転換したELI HT 115細胞を使用しました。この遺伝子のノックダウンにより、ステレオ顕微鏡下で容易に識別可能なshaking表現型が生じます。1日目。細菌を含むNGMプレート上のL4段階の個体を、細菌を含むプレートに移し、20 °Cで12時間培養します。これが絶食期間となります。翌日、特定のRNA干渉標的遺伝子を発現する細菌を塗布したプレートに、fast young adult（若齢成虫）を移します。20 °Cで約48時間放置し、F1子代を得ます。その後、次の2日間にわたって、数匹のF1成虫を同じ細菌を塗布した別のプレートにピックアップします。F2世代の子孫から若成体を抽出し、分離します。野生型Bristol N2系統を用い、細菌を含むNGMプレート上で表現型をスコアリングします。L4から成体期にかけて、個体が浸透圧障壁から後退することを確認してください。C. elegansのnrx-1遺伝子の断片を発現する細菌を給餌したBristol N2野生型株は、4Mの溶液を検知できなくなりました。一方で、浸透圧障壁を検知できないnrx-1欠損変異体は、C. elegansのnrx-1遺伝子の断片を発現する細菌を給餌することで、この能力を回復しました。本ビデオでは、C. elegansにおける浸透圧回避反応に影響を与える遺伝子の効果を研究するための簡便な手法を紹介します。コンゴレッドを用いたフルクトースの濃厚環を用いて、浸透圧強度に対する反応を分析します。neuroligin欠損変異体はこの反応に欠陥を示しますが、nrx mutantsは浸透圧ストレスの検出に障害はなく、野生型系統と同様の反応を示します。このビデオでは、nrx-1およびnlg-1遺伝子に異なるノックアウトアレルを持つ二重変異体系統が、浸透圧強度に反応する野生型表現型を回復することを示しています。これらの観察結果は、RNA干渉のフィーディング法を用いて確認されました。この方法により、野生型系統にnlg-1遺伝子の対応する配列を発現する細菌を餌として与えると、浸透圧バリアの認識能が損なわれました。一方で、4Mフルクトース溶液を検出できないnrx-1欠損変異体は、nrx-1遺伝子の対応する配列を発現する細菌を餌として与えることで、この行動を回復しました。この実験で示された結果は、nrx-1とnlg-1が線虫の感覚ニューロンのシナプス接続に関与している可能性があり、また、これらがシナプス機能に影響を与える形で相互に作用していることを示唆しています。それでは、皆様の実験の成功をお祈りしています。さようなら。

osmotic-avoidance-caenorhabditis-elegans-synaptic-function-two-genes

Research

JoVE Journal

Biology

生物学

C. elegansのシナプス伝達の変異体の薬理学的特性評価のためのパラダイム

マイクロアレイ解析はで遺伝子発現プロファイルを決定するために実施された...

で遺伝子発現プロファイルを決定 C.エレガンスマイクロアレイとリアルタイムPCRを用いて

このビデオでは、トランスジェニック線虫モデルにおける化学回避行動を調べるための浸透圧回避アッセイについて説明しています。回避行動は、高浸透圧バリアと化学誘引剤の存在下でプレートでテストされます。ニューロンの機能的喪失を患った線虫は、走化性物質に引きつけられ、高浸透圧障壁を通過し、麻酔薬の溶液のためにトラップゾーンで麻痺します。...

浸透圧回避アッセイを用いたトランスジェニック線虫の化学回避挙動の検討

dsRNAは、Cで供給しながら、 エレガンスは、大規模な送り画面の現在のプロトコルは、可変ノックダウン効率をもたらす遺伝子機能を評価するための強力なツールである。我々は、遺伝子発現の非常に有効かつ再現性のノックダウンをもたらす大規模なRNAi送り画面を実行するための改良されたプロトコルを記載している。...

大規模な遺伝子ノックダウン中<em&gt; C.虫</em&gt;堅牢な機能喪失表現型を生成するためのdsRNA摂食ライブラリの使用

ここでは、ストレスを受けた個人の回避を定量化するためのプロトコルを提示します。このパラダイムは強力でありながらユーザーフレンドリーであり、Drosophila...

社会回避での定量化のための簡単​​なアッセイキイロショウジョウバエ

ここでは、有機体がよく摂食された状態から飢えた栄養状態に進行するにつれて、銅回避行動の変化および共通の食物源を見つける能力を評価するために設計されたCaenorhabditis elegans特異的アッセイを提示する。...

A<em&gt; Caenorhabditis elegans</em&gt;栄養状態ベースの銅回避アッセイ

我々はこれまでに、 カエノラブディティス・エレガンスが 、それぞれ質量トレーニングと間隔トレーニングによって短期および長期の連想記憶を形成するためのプロトコルを開発しました。ここでは、1-プロパノールと塩酸をそれぞれ条件刺激と無条件刺激としてペアリングして嫌悪連想記憶を形成することにより、 C.エレガンスの...

カエノラブディティス・エレガンスにおける2つの化学物質のペアリングによる嫌悪的連想学習と記憶形成

自閉症スペクトラム障害(ASD)は、社会的およびコミュニケーション的行動の障害と反復行動の出現に関連しています。 ショウジョウバエ モデルにおけるASD遺伝子と行動障害との相互関係を研究するために、この論文では、社会的間隔、攻撃性、求愛、グルーミング、および慣れ行動を分析するための5つの行動パラダイムについて説明します。...

自閉症スペクトラム障害の ショウジョ ウバエモデルにおける行動評価のパラダイム

げっ歯類モデルは、自閉症スペクトラム障害(ASD)に関連する主要な行動を研究するための貴重なツールです。この記事では、マウスのASDの主要な特徴をモデル化するための2つの行動テスト、つまり反復行動を評価するセルフグルーミングと、社会的障害を文書化する3チャンバーの社会的相互作用テストについて詳しく説明します。...

マウスの自閉症様行動を評価するための戦略

動的クランプ電気生理学は、ニューロンの発火障害とイオンチャネル機能障害との間の因果関係を確立できます。マウス小脳プルキンエニューロンにおける動的クランプ法とプロトコルについて説明し、有用なリソースと技術的考慮事項に注目します。代表的な研究では、モデル化されたナトリウムコンダクタンスを Tsc1-/-...

自閉症に関連するニューロンの興奮性障害を調査するための動的クランプ法

このプロトコルは、遺伝的にコードされたツールを用いて、ショ ウジョウバエメラノガスター...

CaMPARIを用いた ショウジョウバエ 幼虫の中枢神経系における個々のシナプス前後パートナーの機能的特徴付け

学ぶニューロリギンとニューレキシンのシナプス機能をCaenorhabditis elegansで。浸透圧回避行動を用いた遺伝子相互作用の解析により、自閉症関連タンパク質の補償メカニズムを解明する方法です。

の浸透圧の回避線虫（Caenorhabditis elegans）：二つの遺伝子のシナプス機能、ヒトのオルソログ NRXN1と NLGN1、

さらに動画を探す